携Sialyl Lewisx和抗ICAM-1单抗双配体微泡靶向黏附行为方式的体外研究

目的 体外对比评价携Sialyl Lewisx和抗ICAM-1单抗双配体和同型对照单配体微泡的靶向黏附行为方式.方法 构建携Sialyl Lewisx与抗ICAM-1单抗双配体(MB-D)、携Sialyl Lewisx(MB-S)和抗ICAM-1单抗(MB-I)三种靶向微泡,利用平行板流动腔和Image-Pro-Plus图像分析软件,分别在0.6、2.0和4.0 dyn/cm2三种剪切应力下分析每种微泡流动过程的速度变化,测定滚动和牢固结合的微泡数目,并检测三种靶向微泡的半数解离应力.结果 0.6 dyn/cm2时单个视野内微泡的滚动数目,MB-D和MB-S明显高于MB-I(P＜0.05),而在2.0和4.0 dyn/cm2时MB-S分别约是MB-D和MB-I的1.47～1.70倍和4.52～10.65倍(P＜0.05).三种剪切应力下微泡的全程(6 min)结合数目MB-D分别为MB-S和MB-I的1.40～1.44倍和2.18～3.78倍(P＜0.05).MB-S、MB-D和MB-I的半数解离应力依次递增.结论 三种微泡具有不同的靶向黏附行为方式,MB-I表现为低效滚动后的牢固结合,MB-S呈高效滚动后的不稳定黏附,而MB-D能够实现高效滚动后相对牢固的结合,其靶向黏附效能明显高于同型对照微泡,有望在体内动脉系统高剪切应力状态下实现分子影像评价.

Abstract：

Objective To assess the adhesive behavior of dual-targeted microbubbles carrying both Sialyl Lewisx and anti-ICAM-1 monoclonal antibodies in vitro. Methods Selectin-targeted (with Sialyl Lewisx) microbubbles (MB-S),ICAM-1-targeted (with anti-ICAM-1 monoclonal antibodies) microbubbles (MB-Ⅰ),and dual-targeted (with both ligands) microbubbles(MB-D) were prepared by attaching the ligands to the biotinylated lipid-microbubbles via multi-step avidin biotin bridging chemistry. A parallel plate flow chamber combined with a novel automated tracking algorithm,were used to analyze the transient velocities,rolling and firmly adherent numbers of microbubbles at various shear stress (0. 6,2.0 and 4.0 dyn/cm2)over 6 min. Microbubbles detachments were tested by ramping up the shear stress at 30 s intervals. Results At 0.6 dyn/cm2 shear stress, the rolling numbers of MB-S and MB-D were remarkably more than that of MB-I( P＜0.05), while at 2.0 and 4.0 dyn/cm2 MB-S performed higher rolling efficiency as compared with either MB-I and MB-D ( P＜ 0.05). In all flow conditions, the adhesive numbers of MB-D to the targets were obviously greater than those of MB-S and MB-I ( P＜ 0.05). Half-maximal detachment decreased gradually in MB-I, MB-D and MB-S by turns ( P＜ 0.05). Conclusions MB-I, MB-S and MB-D have different adhesive behaviors. MB-I exhibites primarily firm adhesion with low rolling efficiency, while MB-S reveales unstable or transient adhesion with high rolling efficiency,and MB-D exhibites firm adhesion with high rolling efficiency. MB-D may be suitable for molecular imaging in high-flow vessels.     

定点追踪技术评价携Sialyl Lewisx和抗P-选择素单抗靶向微泡在高剪切应力下的黏附行为

目的构建携Sialyl Lewisx和抗P-选择素单抗靶向微泡,用定点追踪技术在体外高剪切应力下评价其黏附行为。方法构建携Sialyl Lewisx靶向微泡(MB-S)、携抗P-选择素单抗靶向微泡(MB-P)、携Sialyl Lewisx和抗P-选择素单抗双配体靶向微泡(MB-D)。利用平行板流动腔和Image-Pro-Plus软件绘制微泡滚动的时间-速度折线图。微泡第1帧的速度为V1,第2帧至黏附前倒数第3帧的平均速度为V2,黏附前倒数第2帧的速度为V3。结果 MB-P高速滚动,速度骤降为0;MB-S从高速平缓过渡到低速,再渐降低至0;MB-D从高速过渡到低速,再骤降为0。3种微泡V1差异无统计学意义(P>0.05);MB-P的V2明显高于MB-S和MB-D(P<0.01);MB-S和MB-D间V2差异无统计学意义(P>0.05)。V3在3种微泡中的顺序为MB-P>MB-D>MB-S(P<0.01)。结论Sialyl Lewisx介导高效滚动,抗P-选择素单抗介导微泡速度的骤降,两者在微泡靶向黏附时可发挥互补作用。     

携Sialyl Lewis~X与携抗P-选择素单抗靶向超声微泡粘附性的对比研究

目的对比评价携sialylLewis。与携抗P-选择素单抗靶向超声微泡粘附特性。方法采用“亲和素-生物素”桥接法构建携Sialyl Lewis、（MB-S）、携抗P-选择素单抗靶向超声微泡（MB-P）及携同型抗体微泡（MB-C）。MB-S、MB-P及MB-C以相同流速通过相应小鼠P-选择素Fc段包被培养皿时,利用平行板流动腔在不同时间点测定相应的MB-S、MB-P及MB-C（对照组）的结合数目、滚动数目以及解离时达到半数解离的剪切应力。结果MB-S结合数量前3min快速增加,其后随时间增加无明显变化,而MB-P结合数量与时间呈正相关（P〈0．05）,且MB-S结合数目是MB-P的2～4倍;对照组MB-C未见明显结合（P〈0．05）。MB-S滚动数目大于MB-P（P〈0．05）;MB-S半数解离时剪切力小于MB-P（P〈0．05）。结论靶向超声微泡MB-S表现为早期、快速、不稳定的结合及滚动,MB-P表现为缓慢牢固结合。     

携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗双靶向微泡的制备及体外寻靶研究

目的 制备同时携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗的双靶向微泡,鉴定其基本性质,并观察体外寻靶能力.方法 采用“生物素-亲和素”桥连法分别构建携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗双配体(MBD)、携抗ICAM-1单抗(MBICAM-1)和携抗CD34单抗(MBCD34)3种靶向微泡,光学显微镜下观察靶向微泡的形状,并用马尔文激光粒度分析仪、DFY超声图像定量分析仪、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪检测靶向微泡的基本特性和抗体结合率.倒置显微镜下观察双靶向微泡与内皮祖细胞(EPCs)和损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的结合情况.结果 3种靶向微泡的形状、粒径、表面电位及抗体结合率差异均无统计学意义(P＞0.05),MBD的回声强度高于MBICAM-1、MBCD34和普通生物素化微泡(MBBiotin)(P＜0.01).MBD与EPCs和损伤HUVECs的结合率明显高于MBBiotin(P＜0.01),MBD和MBCD34与EPCs的结合率、MBD和MBICAM-1与损伤HUVECs的结合率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 成功制备了携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗的双靶向微泡,体外实验证实此双靶向微泡与内皮祖细胞和损伤血管内皮细胞均能特异性结合.     

在生理血流条件下靶向超声微泡对P-选择素的靶向黏附效能

目的平行板流动腔评价在生理血流条件下携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡（MBp）的靶向黏附效能。方法采用＂亲和素-生物素＂桥接法构建MBp;在3种浓度（10、100和1000ng/ml）小鼠P-选择素Fc段（PSFc）包被的平行板流动腔和固定剪切应力下,以及最大包被浓度和不同剪切应力（0.2-1.7dyn/cm^2）下分别检测MBp的每分钟结合数量（结合率）,以抗小鼠P-选择素单抗封闭组和空白组为对照。在3种包被浓度下检测MBp达半数解离的剪切应力。所有分组样本数均为3。结果两对照组均未见有明显的MBp结合。实验组MBp结合率随包被浓度的增高而增加（P〈0.05）,然而与剪切应力呈现双向性（P〈0.05）。MBp达半数解离的剪切应力随包被浓度的增加而增大（P〈0.05）。结论MBp在生理条件下可与PSFc特异有效地结合,体外对靶向超声微泡的靶向黏附效能评价将有助于判定超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境条件。     

携ICAM-1单抗超声造影剂体外评估兔腹主动脉内皮损伤实验研究

目的探讨携ICAM-1 单抗的超声造影剂评价血管内皮损伤的可行性及其价值.方法 FITC标记自制含氟碳声振白蛋白造影剂及携ICAM-1 单抗的靶向超声造影剂.新西兰大白兔8只,高脂饮食建立内皮损伤动物模型后,取兔腹主动脉做冰冻病理切片,随机分两组,分别滴加非靶向造影剂、靶向造影剂,比较两种微泡内皮分布情况及相应荧光染色度的差异.结果靶向造影剂组内皮黏附微泡明显增多,荧光染色较强.结论携ICAM-1 单抗的造影剂微泡可靶向黏附于损伤内皮,据此可评价早期内皮损伤.     

携IL-8单抗靶向超声微泡对损伤心肌细胞的体外寻靶实验研究

目的制备携IL-8单克隆抗体(以下简称单抗)靶向超声微泡,检测其基本特性,并探讨其对损伤心肌细胞的体外黏附能力。方法采用共价偶联法制备携IL-8单抗靶向超声微泡,利用缺氧、缺糖方法制备损伤心肌细胞,通过靶向超声微泡与损伤心肌细胞的体外结合实验检测其寻靶能力,并与Sono Vue微泡进行比较。结果携IL-8单抗靶向微泡与轻度及重度损伤心肌细胞的黏附比分别为(61.9±18.9)%和(86.6±5.1)%,明显高于Sono Vue微泡与轻度损伤及重度损伤心肌细胞的黏附比[(12.0±0.6)%和(11.8±1.0)%],差异均有统计学意义(均P0.01);且随着损伤程度的加重,携IL-8单抗靶向超声微泡与心肌细胞的黏附作用逐渐加强(r=0.945,P0.01)。结论携IL-8单抗靶向超声微泡对损伤心肌细胞具有较强的靶向性。     

模拟动脉间歇脉搏血流评价携血管细胞黏附分子-1单抗靶向微泡黏附效能

目的 应用平行板流动腔模拟间歇脉动的动脉血流评价携血管细胞黏附分子-1单抗靶向微泡(MBv)进行高剪切应力下靶向的可行性.方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建MBv在1000ng/ml小鼠血管细胞黏附分子-1 Fc段(VFc)包被的平行板流动腔中,分为连续输注组及间歇输注组,在不同剪切应力(0.5～16 dyn/cm2)下,分别检测不同结合时间点(1～6 min)靶向微泡的结合数量.并用解离实验检测MBv达半数解离的剪切应力.所有实验均重复3次取平均值.结果 两组在0.5～2 dyn/cm2时均见有明显的MBv结合.间歇输注组MBv在各个剪切应力的靶向结合效率均明显较连续输注组高(P＜0.05),且只有间歇输注组MBv能在4～8 dyn/cm2条件下实现靶向结合.解离实验显示靶向微泡达半数解离的剪切应力为(20.7±3.1)dyn/cm2.结论 在间歇脉动的液体流动状态下,MBv可在更高的血流剪切应力条件下与VCAM-1特异有效结合,有望用于进行动脉系统的超声分子成像.     

携Sialyl Lewis~X和抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡评价心肌缺血再灌注损伤对比研究

目的探讨携Sialyl Lewis~X靶向超声微泡结合对比超声分子成像评价心肌缺血再灌注损伤可行性并与携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡对比分析。方法采用"亲和素-生物素"桥接法构建携Sialyl Lewis~X和抗小鼠P选择素单抗靶向超声微泡(MB_(slex)、MBp),并应用平行板流动腔技术在体外模拟的生理血流条件下评价MBp和MB_(slex)与小鼠P-选择素Fc段的靶向黏附效能。然后,20只心肌缺血再灌注(IR)小鼠随机经静脉注入MB_(slex)和MBp,分别于注入5min后行心肌对比超声心动图(MCE)检查,测量心肌缺血区和非缺血区的声强度(VI)。结果平行板流动腔实验显示:在第6分钟时,MB_(slex)与小鼠P-选择素Fc段结合数目为MBp的1.7倍。对比超声图像显示MB_(slex)组和MBp组缺血区心肌均见显著造影增强,声强度(VI)值分别为(23.52±1.08)U、(25.98±6.23)U,两者相比无显著差异(P0.05)。但无论是MBp组还是MB_(slex)组的缺血区心肌VI值均明显高于非缺血区心肌VI值[(6.53±0.95)U,(7.13±0.91)U,(P0.05)]。结论 MB_(slex)对炎症组织靶向检出能力与MBp相似,它和对比超声结合可有效评价心肌缺血再灌注损伤。     

携细胞间黏附分子1抗体的Sono Vue微泡造影剂靶向识别受损内皮的实验研究

目的 探讨静电吸附法制备的携细胞间黏附分子1抗体靶向微泡在体外和体内的寻靶能力.方法 采用静电吸附法制备携ICAM-1抗体的靶向SonoVue微泡.体外培养经IL-1β刺激大量表达ICAM-1的人血管内皮细胞ECV304,采用免疫荧光法检测靶向微泡与其结合能力.构建兔急性心肌梗死模型,进行靶向微泡的心肌造影,采用冷冻切片和免疫荧光法榆测靶向微泡与受损血管内膜结合能力.结果 在体外实验中,可见大量携ICAM-1抗体靶向微泡与刺激后ECV304细胞紧密结合,仅有少量靶向微泡与正常ECV304细胞结合.体内实验中,可见大量携ICAM-1抗体靶向微泡在兔梗死心肌受损血管内膜处黏附,仅可见少量靶向微泡在正常血管内膜处黏附.结论 携ICAM-1抗体靶向微泡在体内、体外均能与受损血管内皮特异性结合,不仅有利于靶向超声造影显像,更为微泡携带药物或基因在局部定向释放开辟良好前景.     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

护理干预对提高中风患者生活质量的效果观察

目的探讨提高中风患者生活质量的护理方法。方法将50例中风患者随机分为对照组23例和实验组27例,对照组给予针灸内科常规护理,实验组在此基础上给予心理护理和康复训练。结果两组患者治疗护理后日常生活活动(ADL)能力和贝克抑郁量表(BDI)评分均有好转,但实验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论实施针对性心理护理和康复训练可明显提高中风患者的治疗效果。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据,以及纳入系统评价的临床随机对照试验（RCT）的方法学质量。方法检索Cochrane Library数据库（2009年第4期）中有关胰腺癌治疗的系统评价,并运用RewMan5.0.21对所纳入研究的偏倚进行评估。结果共检索到胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的系统评价、放化疗治疗不能手术的进展期胰腺癌的系统评价共2篇系统评价,共纳入79个RCT。依照Cochrane协作网推荐的质量评价方法,对所纳入RCT的偏倚进行评估,表明均存在不同程度的偏倚,方法学质量普遍较低。结论 Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前缺少足够强度的证据来支持胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的疗效。其他治疗手段的疗效如胰腺癌围手术期的营养支持治疗等还需要通过进一步的完成系统评价来评估。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度以及按照CONSORT声明严格规范RCT的报告,以便于总结胰腺癌治疗的临床证据。     

缺血性脑卒中患者血浆内皮素和心钠素含量的相关性探讨

本文监测了３３例缺血性脑卒中患者血浆中内皮素 (ＥＴ)和心钠素 (ＡＮＰ)的含量变化及其相关关系并进行分析 ,以探讨其在缺血性脑卒中发病过程中的作用及其相关关系。１资料与方法１．１一般资料本文选择缺血性脑卒中患者３３例 ,均为我院住院病人。年龄４１～８３岁 ,平均６０．３岁 ;病程３ｈ～３个月 ,其中１周内３０例 (９０% )。３３例患者中腔隙性脑梗塞１３例 (梗塞面积≤１５ｍｍ２) ,单发性梗塞９例 (梗塞面积＞１５ｍｍ２) ,多发性梗塞１１例 (梗塞面积＞１５ｍｍ２,且病灶在两个以上者 )。梗塞部位包括脑叶、基底层、脑干 (脑…