不同形态低切应力对小鼠腹主动脉重构及内皮P选择素表达的影响

目的 制备小鼠腹主动脉狭窄的实验模型,探讨短期不同形态的低剪切应力对动脉重建及内皮P选择素表达的影响.方法 24只小鼠随机平均分为3个实验组(1h组、4h组、24h组)和1个正常对照组,实验组用动脉银夹建立腹主动脉局部狭窄模型,彩色多普勒超声检测狭窄近心端和远心端血流动力学参数,计算切应力值;血管标本行HE染色和内皮P选择素免疫组织化学染色,定量分析动脉病理形态学的改变和半定量分析内皮P选择素表达的强度.结果 狭窄动脉近心端和远心端血流分别形成低切应力区和振荡性低切应力涡流区,并且在所有观察点狭窄动脉近心端和远心端血管发生不同程度的动脉重建与内皮P选择素表达,但近心端较远心端更明显(P<0.05).结论 血流动力学改变在较短的时间内可引起动脉重构及内皮P选择素的表达,而且不同形态低切应力导致的病变程度是不同的.     

以N-软酯酰基壳聚糖为壳膜的新型超声微泡造影剂的对比成像

目的 制备N-软酯酰基壳聚糖微泡(PCMB)类超声造影剂,评价其超声对比成像效果.方法 以N-软酯酰基壳聚糖为膜材料采用声振法制备PCMB造影剂,用光学显微镜、库尔特计数仪、Zeta电位仪检测其大小、形态、浓度和表面电位.经大鼠尾静脉团注0.1 ml该造影剂观察大鼠左心室、肝脏、肾脏超声造影效果,脱机分析峰值强度(PI)、达峰时间(TTP)、峰值减半时间(HPT)、廓清时间等参数,并与全氟显进行造影性能比较.结果 PCMB分布均匀,浓度为(2.88±0.45)×109/ml,直径为(1.31±0.07)μm(99.98%微泡直径小于8μm),表面电位为(55.03±3.08)mV;对大鼠左心室、肝脏、肾脏超声造影图像清晰,PI和TTP与全氟显相近(P>0.05),但HPT及廓清时间明显延长(P<0.001).结论 以廉价和生物相容性好的N-软酯酰基壳聚糖为壳膜材料制备新型超声造影剂具有良好的超声对比成像效果.     

聚糖纳米微泡超声造影剂的制备及其超声显影效果

目的 制备聚糖纳米微泡超声造影剂,观察其基本特征及动物超声显影效果.方法 高速剪切法制备纳米微泡超声造影剂,光学显微镜和透射电镜观察纳米微泡大小、形态,马尔文粒度分析仪测粒径分布,细胞计数板计数纳米微泡,Zeta电位仪测表面电位,对比超声观察大鼠肾、心脏超声显影效果并测量声强度.结果 纳米微泡呈空心球形结构,分散均匀,形态规则,平均粒径(617±12)nm,浓度(7.2±0.6)×109/ml,Zeta电位(52.9±1.3)mV.24 h、45 d和90d三个时间点浓度、平均粒径和表面电位无明显差异(P＞0.05).用其可使小鼠肾、心脏超声显影明显增强,最大视频强度分别达(15.6±1.1)GU、(27.3±2.5)GU,可视增强持续时间(10±2)min.结论 聚糖纳米微泡稳定性和显像效果良好,有可能成为可穿过血管内皮间隙的新一代超声造影剂.     

冠脉狭窄时心肌收缩、舒张功能及血流灌注三者的关系

目的 应用新型的速度向量成像(VVI)结合心肌声学造影(MCE)评价冠脉狭窄时心肌收缩、舒张功能及血流灌注三者之间的关系.方法 不同程度冠脉(前降支)狭窄的实验犬模型8只,在冠脉狭窄前后于静息和多巴酚丁胺负荷时,取左室短轴图像进行VVI分析并行MCE,测量心肌血流量(A·β值)和短轴圆周方向上收缩期(Srsys)和舒张期峰值应变率(Srdia).结果 静息下,只有当重度冠脉狭窄时,其供血区的Srsys、Srdia和A·β值才均低于狭窄前(-1.1±0.50 vs-1.62±0.50,1.19±0.48 vs 1.75±0.51,0.4±0.21 vs 0.80±0.47,P<0.05).负荷时,与狭窄前相比,狭窄冠脉供血区的Srsys、Srdia和A·β值随冠脉狭窄程度的加重而改变,呈递减关系(-4.31±1.14 vs -3.20±0.98 vs.1.18±0.64,4.51±1.13 vs 3.39±0.98 vs 1.37±0.64,3.54±1.95 vs 1.81±0.89 vs 0.82±0.42,P<0.05).无论静息还是负荷时,Srsys和Srdia(r静息=0.88,r负荷=0.96,P<0.01),Srsys和A·β(r静息=0.55,r负荷=0.71,P<0.01)以及Srdia和A·β(r静息=0.57,r负荷=0.72,P<0.01)间均呈良好相关性.结论 VVI和MCE结合能够用于动态评价短轴心肌节段舒缩功能和血流灌注的变化情况,且VVI通过对心肌舒缩功能的评价能在一定的程度上反映心肌血流灌注的情况.     

N-软脂酰基壳聚糖叶酸靶向微泡的体内外特性和靶向效果

目的 应用N-软脂酰基壳聚糖制备叶酸靶向微泡,评价其基本特征、体外靶向性及体内超声显影效果.方法 以高速剪切法制备叶酸靶向微泡和对照微泡,观察叶酸靶向微泡的大小、形态和叶酸分子在微泡的分布及对昆明鼠肾脏的超声显影效果和体外靶向效果,并与对照微泡比较.结果 叶酸靶向微泡呈空心球形结构,形态规则,分散均匀,平均粒径(1.32±0.20)μm,浓度(1.93±0.01)×109/ml;鼠肾对比显影明显增强,1 min、7 min视频强度分别为(30.35±5.01)GU、(17.41±3.15)GU,可视性对比增强持续时间(10.00±3.00)min;与叶酸受体高表达细胞结合数明显大于叶酸受体低表达细胞组和对照微泡组(P<0.01).结论 N-软脂酰基壳聚糖构建的叶酸靶向微泡可与叶酸受体有效结合,可用其作为分子探针,对叶酸受体高表达的肿瘤进行超声分子成像.     

瑞舒伐他汀钙下调MCP-1改善野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压

目的探讨单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在瑞舒伐他汀钙干预大鼠肺动脉高压中的作用。方法将24只Wistar雄性大鼠分为空白对照组(C组)、野百合碱诱导肺动脉高压组(M组)和瑞舒伐他汀钙组(R组),M组和R组给予野百合碱皮下注射,R组同时给予10 mg/(kg·d)瑞舒伐他汀钙灌胃,6周后检测各组大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、右心室/(左心室+室间隔)重量比RV/(LV+S)、肺组织单核细胞趋化因子-1(MCP-1)mRNA和蛋白表达。结果野百合碱可以上调MCP-1表达,诱导mPAP升高,提高RV/(LV+S),瑞舒伐他汀钙可以下调MCP-1表达,降低mPAP,降低RV/(LV+S)。结论瑞舒伐他汀钙可能通过下调MCP-1改善大鼠肺动脉高压。     

下肢缺血＂晚时间窗＂的血管细胞黏附分子-1超声分子成像

目的 探讨应用携带血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）分子探针的超声分子成像,评价下肢缺血＂晚时间窗＂炎症反应的可行性.方法 12只实验小鼠结扎一侧下肢股动脉制备缺血模型,另一侧股动脉为对照.术后第3天随机先后（间隔30 min）经尾静脉注入携抗小鼠VCAM-1单抗的靶向微泡（MBV）和携同型抗体的对照微泡（MBC）,并于8 min后行对比超声检查,测量双侧下肢的显影强度（VI）;最后进行双下肢病理学检查.结果 对比超声图像显示：缺血下肢MBV组可见明显的超声显影,VI值高达（18.4±2.9）U;而在缺血下肢MBC组仅见轻度的超声显影,VI值为（6.9±1.2）U,两微泡组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.两组微泡在非缺血下肢的VI值未见明显差异（P〉0.05）.但无论MBV还是MBC微泡,其在缺血下肢的VI值均明显高于非缺血下肢相应的VI值.免疫组化显示：缺血下肢血管有大量的VCAM-1表达,而非缺血下肢未见VCAM-1表达.结论 应用VCAM-1分子探针的超声分子成像可有效评价下肢缺血＂晚时间窗＂的炎症反应.     

尼可地尔预处理对内皮素1刺激的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响及机制探讨

目的观察尼可地尔预处理对内皮素1（ET-1）刺激的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响并探讨其机制。方法取新生大鼠心肌组织中的心脏成纤维细胞，接种于6孔培养板，待细胞生长至亚融合状态时，无血清培养液培养24h。将细胞分为6组：空白组仍用原培养液培养；尼可地尔组分别用含1、3和10μmol／L尼可地尔预处理成纤维细胞30min，再加入ET-110nmol／L处理24h；N-乙酰基-L．半胱氨酸（NAC）组用5mmol／L的NAC培养液预处理成纤维细胞30min，再加入ET-110nmol／L处理成纤维细胞24h；ET-1组加入ET-110nmol／L处理24h。CCK8法测算各组细胞增殖率；荧光探针法检测细胞内活性氧（ROS）；实时定量荧光PCR法和Westernblot法检测细胞内转换生长因子β1（TGF-β1）mRNA和蛋白表达。结果ET-1组细胞增殖率明显高于空白组，尼可地尔10μmol／L组及NAC组细胞增殖率明显低于ET-1组，尼可地尔1、3、10μmol／L组ROS、TGF．β1-mRNA及蛋白表达均明显低于ET-1组，P均〈0．05。结论尼可地尔预处理对ET-1刺激的大鼠心脏成纤维细胞增殖有明显抑制作用；其机制可能与降低ROS及TGF-βl表达有关。     

体外评价携Sialyl Lewisx和抗ICAM-1单抗双配体超声微泡的靶向黏附性能

目的 构建携Sialyl Lewisx和抗ICAM-1单抗双配体和同型对照单配体靶向超声微泡,体外对比评价其靶向黏附性能.方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建携Sialyl Lewisx与抗ICAM-1单抗双配体(MB-D)、携Sialyl Lewisx(MB-S)和携抗ICAM-1单抗(MB-I)三种靶向超声微泡,以流式细胞术定量分析其配体结合率,并利用平行板流动腔分别在0.5、2.0和4.0 dyn/cm2三种剪切应力下的不同时间点观察微泡的结合及解离情况.结果 MB-D、MB-S和MB-I的配体结合率均达85%以上,各组间无统计学差异(P>0.05).在三种剪切应力下,MB-D和MB-S集中于前3～5 min高效结合,在5 min后两者的结合率均呈平台状态,而MB-I全程结合率(1～6 min)均呈低水平状态;MB-D的平均结合率和全程结合数目均明显高于MB-S和MB-I(P<0.05),而半数解离剪切应力则按MB-I、MB-D和MB-S顺序依次递减(P<0.05).结论 相同条件下,MB-S表现为早期快速、不稳定的黏附,MB-I为缓慢、牢固的结合,而MB-D呈早期高效、相对牢固的结合.MB-D有可能用于高流速的动脉超声分子成像.     

携Sialyl Lewis~X和抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡评价心肌缺血再灌注损伤对比研究

目的探讨携Sialyl Lewis~X靶向超声微泡结合对比超声分子成像评价心肌缺血再灌注损伤可行性并与携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡对比分析。方法采用"亲和素-生物素"桥接法构建携Sialyl Lewis~X和抗小鼠P选择素单抗靶向超声微泡(MB_(slex)、MBp),并应用平行板流动腔技术在体外模拟的生理血流条件下评价MBp和MB_(slex)与小鼠P-选择素Fc段的靶向黏附效能。然后,20只心肌缺血再灌注(IR)小鼠随机经静脉注入MB_(slex)和MBp,分别于注入5min后行心肌对比超声心动图(MCE)检查,测量心肌缺血区和非缺血区的声强度(VI)。结果平行板流动腔实验显示:在第6分钟时,MB_(slex)与小鼠P-选择素Fc段结合数目为MBp的1.7倍。对比超声图像显示MB_(slex)组和MBp组缺血区心肌均见显著造影增强,声强度(VI)值分别为(23.52±1.08)U、(25.98±6.23)U,两者相比无显著差异(P0.05)。但无论是MBp组还是MB_(slex)组的缺血区心肌VI值均明显高于非缺血区心肌VI值[(6.53±0.95)U,(7.13±0.91)U,(P0.05)]。结论 MB_(slex)对炎症组织靶向检出能力与MBp相似,它和对比超声结合可有效评价心肌缺血再灌注损伤。