携Sialyl Lewisx多聚体微泡超声造影评价小鼠腹主动脉的炎症反应

目的探讨采用携Sialyl Lewisx多聚体（PSLex）微泡靶向CEUS评价动脉系统血管炎症反应的可行性。方法构建分别携P-Sialyl Lewisx（MB-S）、抗P-选择素单抗（MB-P）和同型对照单抗（MB-C）的3种微泡,应用流式细胞仪分析其配体结合率,利用平行板流动腔和Image-Pro Plus图像分析软件,分析3种微泡在0.5、2.0和4.0dyn/cm2剪切应力下的靶向结合数目。对急性腹主动脉炎症模型（炎症组）和假手术模型（对照组）小鼠各9只,采用弹丸式注入以上微泡,6min后行CEUS检查,测量腹主动脉显影的声强度（VI）。结果 MB-P、MB-S的配体结合率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。在3种剪切应力下,MB-S和MB-P的全程（6min）结合数目均高于MB-C（P均〈0.05）;在0.5dyn/cm2时,MB-S的全程结合数目与MB-P的差异无统计学意义（P〉0.05）,而在2.0和4.0dyn/cm2时,MB-S的全程结合数目明显多于MB-P（P均〈0.05）;各种微泡的全程结合数目均随剪切应力提高而减少（P均〈0.05）。在炎症组中,MB-S、MB-P和MB-C的VI值依次降低（P均〈0.05）;除MB-C外,MB-S和MB-P在炎症组的VI值均分别高于对照组（P均〈0.05）。结论在高剪切应力下MB-S的结合能力明显优于MB-P,可用于评价动脉血管内皮炎症反应。     

人白血病抑制因子受体单抗靶向脂质体微泡的制备及其体外荧光鉴定

目的 制备人白血病抑制因子受体( LIFR)单抗靶向脂质体微泡,并对其微泡微囊的连接可靠性进行体外免疫荧光鉴定.方法 利用生物素-亲和素桥连技术,构建LIFR单抗脂质体微泡(MB-BSB-LIFR-AB).以FITC荧光亲和素标记普通脂质体微泡(MB)、生物素化脂质体微泡(MB-B),以两个不同浓度梯度(1:4和1:16)的DTAF荧光二抗分别标记MB、MB-B、生物素-亲和素脂质体微泡(MB-BS)、MB-BSB-LIFR-AB;荧光显微镜下观察微泡荧光强度并分为0级、1级、2级、3级.结果 加入FITC荧光亲和素后,MB-B呈现3级明亮的绿色荧光,而MB无荧光显示(0级);以1:4和1:16浓度梯度的DTAF荧光二抗孵育后,MB-BSB-LIFR-AB均发出3级明亮的绿色荧光;而MB-BS、MB-B仅在1:4时显示1级微弱的绿色荧光;MB在两个浓度梯度下均无荧光显示(0级).结论 携LIFR单抗通过生物素-亲和素桥连技术有效连接在MB-B微囊;体外荧光法是鉴定靶向脂质体微泡配体连接可靠性的简便方法.     

不同形态低切应力对小鼠腹主动脉重构及内皮P选择素表达的影响

目的 制备小鼠腹主动脉狭窄的实验模型,探讨短期不同形态的低剪切应力对动脉重建及内皮P选择素表达的影响.方法 24只小鼠随机平均分为3个实验组(1h组、4h组、24h组)和1个正常对照组,实验组用动脉银夹建立腹主动脉局部狭窄模型,彩色多普勒超声检测狭窄近心端和远心端血流动力学参数,计算切应力值;血管标本行HE染色和内皮P选择素免疫组织化学染色,定量分析动脉病理形态学的改变和半定量分析内皮P选择素表达的强度.结果 狭窄动脉近心端和远心端血流分别形成低切应力区和振荡性低切应力涡流区,并且在所有观察点狭窄动脉近心端和远心端血管发生不同程度的动脉重建与内皮P选择素表达,但近心端较远心端更明显(P<0.05).结论 血流动力学改变在较短的时间内可引起动脉重构及内皮P选择素的表达,而且不同形态低切应力导致的病变程度是不同的.     

聚糖纳米微泡超声造影剂的制备及其超声显影效果

目的 制备聚糖纳米微泡超声造影剂,观察其基本特征及动物超声显影效果.方法 高速剪切法制备纳米微泡超声造影剂,光学显微镜和透射电镜观察纳米微泡大小、形态,马尔文粒度分析仪测粒径分布,细胞计数板计数纳米微泡,Zeta电位仪测表面电位,对比超声观察大鼠肾、心脏超声显影效果并测量声强度.结果 纳米微泡呈空心球形结构,分散均匀,形态规则,平均粒径(617±12)nm,浓度(7.2±0.6)×109/ml,Zeta电位(52.9±1.3)mV.24 h、45 d和90d三个时间点浓度、平均粒径和表面电位无明显差异(P＞0.05).用其可使小鼠肾、心脏超声显影明显增强,最大视频强度分别达(15.6±1.1)GU、(27.3±2.5)GU,可视增强持续时间(10±2)min.结论 聚糖纳米微泡稳定性和显像效果良好,有可能成为可穿过血管内皮间隙的新一代超声造影剂.     

αv-整合素超声分子成像可视化评价基质胶血管新生

目的 探讨应用携带αv-整合素分子探针的分子成像可视化评价基质胶血管新生的可行性.方法 10只实验小鼠分别于腹部皮下注射添碱性成纤维细胞生长因子(FGF)-2的基质胶制备血管新生模型.于注射后第10 d所有小鼠经尾静脉随机先后(间隔30min)弹丸注射携抗小鼠αv-整合素单抗靶向微泡(MBα)、携同型抗体对照微泡(MBc),并分别于注入后6 min行基质胶超声造影检查,测量基质胶的显影强度(video intensity,VI).随后,所有小鼠均预先αMBcv-整合素单抗封闭10 min后再注入MBα和MBc行超声造影检查.最后进行基质胶组织学检查.结果 超声造影图像显示MBα组呈明显的超声显影,VI值高达(20.5±3.3)U,而MBc组仅见轻度的超声显影,其VI为(4.8±1.5)U,两者之间差异有统计学意义(P＜0.05).预先单抗封闭αv-整合素后,MBα的VI值仅为封闭前的22.4%,两者之间差异有统计学意义(P＜0.05);而MBα的VI值较封闭前无明显变化,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).病理学检查显示基质胶中有丰富的新生血管形成,新生血管中有大量αv-整合素表达.结论 应用携带αv-整合素分子探针的超声分子成像可有效特异地评价基质胶血管新生.     

以N-软酯酰基壳聚糖为壳膜的新型超声微泡造影剂的对比成像

目的 制备N-软酯酰基壳聚糖微泡(PCMB)类超声造影剂,评价其超声对比成像效果.方法 以N-软酯酰基壳聚糖为膜材料采用声振法制备PCMB造影剂,用光学显微镜、库尔特计数仪、Zeta电位仪检测其大小、形态、浓度和表面电位.经大鼠尾静脉团注0.1 ml该造影剂观察大鼠左心室、肝脏、肾脏超声造影效果,脱机分析峰值强度(PI)、达峰时间(TTP)、峰值减半时间(HPT)、廓清时间等参数,并与全氟显进行造影性能比较.结果 PCMB分布均匀,浓度为(2.88±0.45)×109/ml,直径为(1.31±0.07)μm(99.98%微泡直径小于8μm),表面电位为(55.03±3.08)mV;对大鼠左心室、肝脏、肾脏超声造影图像清晰,PI和TTP与全氟显相近(P>0.05),但HPT及廓清时间明显延长(P<0.001).结论 以廉价和生物相容性好的N-软酯酰基壳聚糖为壳膜材料制备新型超声造影剂具有良好的超声对比成像效果.     

携抗白细胞介素-2受体α单抗靶向超声微泡黏附效能的体内外评价

目的构建小鼠携抗白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)单抗靶向超声微泡(MB_(IL-2Rα))及体内外评价其靶向黏附效能。方法采用"亲和素-生物素"桥连法构建携带荧光FITC的MB_(IL-2Rα)和普通超声微泡(MB)。首先利用平行板流动腔体外评价在不同时间点、不同浓度小鼠IL-2Rα包被下MB_(IL-2Rα)结合数目。然后,分别随机经静脉将MB_(IL-2Rα)和MB弹丸式注入对照组(10只)和TNF-α处理组(10只)的小鼠提睾肌炎症模型。同时,200倍荧光显微镜直视下观察并记录5min内两组中不同微泡在提睾肌微血管中的黏附数量和黏附情况。结果体外结果显示,MB_(IL-2Rα)结合数量随着IL-2Rα包被浓度的增高而增加(P0.05),并与结合时间呈明显相关(P0.05);体内荧光显微镜下TNF-α处理组MB_(IL-2Rα)黏附数量[(4.6±1.1)个/200倍视野)]明显高于MB黏附数量[(3.0±0.7)个/200倍视野](P0.05);且TNF-α处理组MB_(IL-2Rα)黏附数量分别为对照组MB_(IL-2Rα)和MB黏附数量的(2.8±0.8)和(3.7±1.4)倍(P0.01)。结论 MB_(IL-2Rα)可与IL-2Rα特异、有效地结合,其高效黏附性能将有助于进一步对移植排斥反应的靶向超声分子显影。     

冠脉狭窄时心肌收缩、舒张功能及血流灌注三者的关系

目的 应用新型的速度向量成像(VVI)结合心肌声学造影(MCE)评价冠脉狭窄时心肌收缩、舒张功能及血流灌注三者之间的关系.方法 不同程度冠脉(前降支)狭窄的实验犬模型8只,在冠脉狭窄前后于静息和多巴酚丁胺负荷时,取左室短轴图像进行VVI分析并行MCE,测量心肌血流量(A·β值)和短轴圆周方向上收缩期(Srsys)和舒张期峰值应变率(Srdia).结果 静息下,只有当重度冠脉狭窄时,其供血区的Srsys、Srdia和A·β值才均低于狭窄前(-1.1±0.50 vs-1.62±0.50,1.19±0.48 vs 1.75±0.51,0.4±0.21 vs 0.80±0.47,P<0.05).负荷时,与狭窄前相比,狭窄冠脉供血区的Srsys、Srdia和A·β值随冠脉狭窄程度的加重而改变,呈递减关系(-4.31±1.14 vs -3.20±0.98 vs.1.18±0.64,4.51±1.13 vs 3.39±0.98 vs 1.37±0.64,3.54±1.95 vs 1.81±0.89 vs 0.82±0.42,P<0.05).无论静息还是负荷时,Srsys和Srdia(r静息=0.88,r负荷=0.96,P<0.01),Srsys和A·β(r静息=0.55,r负荷=0.71,P<0.01)以及Srdia和A·β(r静息=0.57,r负荷=0.72,P<0.01)间均呈良好相关性.结论 VVI和MCE结合能够用于动态评价短轴心肌节段舒缩功能和血流灌注的变化情况,且VVI通过对心肌舒缩功能的评价能在一定的程度上反映心肌血流灌注的情况.     

N-软脂酰基壳聚糖叶酸靶向微泡的体内外特性和靶向效果

目的 应用N-软脂酰基壳聚糖制备叶酸靶向微泡,评价其基本特征、体外靶向性及体内超声显影效果.方法 以高速剪切法制备叶酸靶向微泡和对照微泡,观察叶酸靶向微泡的大小、形态和叶酸分子在微泡的分布及对昆明鼠肾脏的超声显影效果和体外靶向效果,并与对照微泡比较.结果 叶酸靶向微泡呈空心球形结构,形态规则,分散均匀,平均粒径(1.32±0.20)μm,浓度(1.93±0.01)×109/ml;鼠肾对比显影明显增强,1 min、7 min视频强度分别为(30.35±5.01)GU、(17.41±3.15)GU,可视性对比增强持续时间(10.00±3.00)min;与叶酸受体高表达细胞结合数明显大于叶酸受体低表达细胞组和对照微泡组(P<0.01).结论 N-软脂酰基壳聚糖构建的叶酸靶向微泡可与叶酸受体有效结合,可用其作为分子探针,对叶酸受体高表达的肿瘤进行超声分子成像.     

携抗P-选择素单抗靶向微泡在炎症模型微循环中黏附机制及行为方式的研究

目的 荧光显微镜直视下对比评价携抗P-选择素单抗靶向微泡与同型对照微泡在微循环中的黏附机制及行为方式.方法 构建携荧光FITC的抗P-选择素单抗靶向微泡(MBp)和同型对照微泡(MBiso),并随机经静脉注入小鼠提睾肌炎症模型.20倍荧光显微镜直视下观察并记录5min内两种微泡在提睾肌微循环中的黏附情况,并对不同黏附方式的微泡进行计数.应用image-pro-plus分析软件对微泡进行定点追踪,并对其黏附过程中速度的变化进行定量测定.结果 荧光显微镜下观察可见MBp组与内皮黏附数量高达(8.4±2.1)个/视野,MBiso组仅为(0.8±0.8)个/视野,两者间差异有统计学意义(P＜0.01);MBp和MBiso组白细胞黏附数量分别为(3.6±0.6)个/视野、(2.2±0.8)个/视野,两者间差异无统计学意义(P＞0.05).微泡黏附过程速度变化曲线显示MBp和MBiso分别以流动速度逐渐和迅速降低两种方式实现对靶组织的黏附.结论 MBp和MBiso具有不同的黏附方式,MBp能更高效、特异地黏附于炎症组织血管内皮上,为评价血管内皮炎症反应或其他组织损伤的应用提供了理论基础.