磷酰肌醇-3激酶途径在CML细胞增殖和抗凋亡中的作用

为探讨磷酰肌醇-3激酶(PI3K)通路在CML细胞增殖和抗凋亡中的作用,作者应用沃氏篮酶素(Wortmannin,WT)特异性地抑制PI3K激酶活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落培养和流式细胞膜联蛋白 V(Annexin V)标记技术,观察了K562和NB4细胞增殖能力与凋亡抗性的改变。结果:WT显著抑制K562细胞增殖能力,24,48及72小时增殖抑制率分别为23.13％。45.17％和60.42％,集落形成抑制率为53.91％(均P<0.05),而对NB4细胞的增生无明显影响;WT可促进由Vp16诱导的K562细胞凋亡。凋亡指数提高1.49倍,NB4细胞的凋亡指数无显著改变。上述结果证明了PI3K在CML细胞增殖和抗凋亡中占重要地位。     

三氧化二砷对白血病细胞株K562的杀伤作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株K562的杀伤作用。方法采用台盼蓝拒染法计数活细胞数，并计算细胞生长率；细胞涂片经Wright—Giemsa染色，光镜下观察细胞的形态。结果As2O3对白血病K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。4μmol／L的As2O3能够使K562细胞发生M期阻滞，引起部分细胞发生凋亡。结论As2O3：不但抑制K562细胞的增殖，而且导致K562细胞M期阻滞。     

肝素对人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨肝素对长春新碱诱导的人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响。方法：肝素（5、25、50、100、200U／mL）处理K562细胞1h后，加入长春新碱（0．05μg／mL）24h，应用Trypan blue拒染法和MTT法检测不同浓度肝素对K562细胞增殖的影响，DNA琼脂糖凝胶电泳检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：肝素各组的细胞数量与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05），肝素各组的OD值与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05）；肝素在5～200U／mL的浓度时能够抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡及DNA凋亡梯带的形成。结论：不同浓度肝素对K562细胞无毒，无刺激或抑制作用，但可抑制由长春新碱诱导的K562细胞凋亡。     

酪氨酸激酶抑制剂通过下调Mcl-1和Bcl-xl诱导K562细胞凋亡

本研究观察酪氨酸激酶抑制剂STl571对CML细胞增殖和凋亡以及抗凋亡蛋白Mcl—l表达的影响，探讨Mcl一1在BCR／ABL抗凋亡信号传导中的作用。应用STl571处理慢性髓系白血病K562细胞株，采用台盼蓝拒染法和MTT法检测STl571对K562细胞增殖的影响，用AnnexinV和碘化丙锭双染法及流式细胞术检测K562细胞凋亡情况，蛋白印迹法检测STl571对细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达的影响。结果发现：STl57l可有效地抑制K562细胞增殖并诱导K562细胞凋亡，这种作用呈剂量和时间依赖性，同时降低细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和下调抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl-xl的表达。STl571抑制K562细胞增殖和诱导凋亡与抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl—xl的表达下调一致。结论：STl571通过阻断CML细胞内信号传导途径，下调Mcl—l和Bcl—xl的表达，抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，表明Mcl—l和Bcl—xl一起在CML抗凋亡过程中发挥重要作用.     

c-cbl反义RNA抑制K562细胞的增殖

为探讨原癌基因c-cbl对CML细胞增殖的影响,我们用RT-PCR克隆了包括5′端非编码区的人类c-cbl基因部分序列,将之反向插入pcDNA3载体,并转染K562及NB4细胞。经MTT实验、半固体集落培养和流式细胞术观察细胞增殖能力的改变。结果表明,限制性酶切分析及序列测定证明所克隆的基因核苷酸序列正确,MTT实验显示反义载体转染K562细胞生长明显受抑,24、48及72小时增殖抑制率分别为30.07％,42.53％和55.75％(P值均<0.001),FCM-BrdU法测定的细胞倍增时间之比为1∶1.87(P<0.02),细胞集落形成抑制率为33.01％,反义转染基因NB4细胞增殖率无改变。上述结果直接地证明了c-cbl在CML细胞生长中的重要性。     

PTK787对K562细胞增殖及fak mRNA表达的影响

本研究旨在观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787对K562细胞增殖、细胞周期和fak mRNA表达的影响,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制。应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法观察不同浓度PTK787在不同时间对K562细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测各浓度PTK787对K562细胞周期的影响,应用RT-PCR技术检测各浓度PTK787对K562细胞fak mRNA表达水平的影响。结果表明:随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高。同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组之间比较,差异均有统计学意义(p0.05),其中PTK787作用48小时,以浓度320μmol/L对细胞抑制率最高,继续增加浓度或延长作用时间抑制率增加均不明显。随着PTK787浓度增加,G1期细胞比例逐渐升高,S期细胞比例逐渐下降,各组间比较有明显差异(p0.05)。PTK787浓度由160μmol/L继续升高,对K562细胞周期的改变不明显。随着PTK787浓度增加,K562细胞的fak mRNA表达逐渐降低,组间比较差异有统计学意义(p0.05)。PTK787浓度由160μmol/L继续升高,对K562细胞fak mRNA表达的影响亦不明显。结论:PTK787可以抑制K562细胞增殖,阻止K562细胞由G1期向S期转化,降低fak mRNA表达水平,从而达到抗白血病细胞的作用。     

蝮蛇毒提取物诱导白血病细胞K562凋亡

本研究探讨皖南蝮蛇毒蛋白提取物对白血病细胞K562增殖的影响及诱导凋亡的作用，采用MTT（四唑氮蓝）法检测不同浓度的蛇毒蛋白提取物对K562细胞生长的影响；应用电子显微镜观察药物作用后K562细胞形态的改变：流式细胞术检测蛋白提取物对K562细胞细胞凋亡作用；Western blot检测细胞增殖酶活性的变化。结果表明：1—20μg/ml蛇毒蛋白提取物明显抑制K562细胞的生长，且对K562细胞增殖的抑制作用呈现剂量依赖的关系；提取物作用48小时后显示明显的细胞毒作用；与对照组相比，蛇毒作用48小时后K562细胞出现典型凋亡特征；1、10、20μg／ml蛇毒作用48小时后的凋亡率分别为21.3％、49、7％、70．1％；蛇毒提取物使ERK活性明显降低。结论：蛇毒蛋白能够抑制K562细胞增殖，诱导其凋亡。     

青蒿琥酯对K562细胞的抑制作用及对VEGF表达的影响

本研究探讨青蒿琥酯（artesunate，ART）对K562的抑制作用和对VEGF表达的影响，为青蒿琥酯可能成为一种新的抗白血病药物提供实验基础和理论依据。实验以K562细胞为靶细胞．设对照组及各ART浓度（12．5、25、50、100μg／ml）组，绘制其生长曲线。用光学显微镜观察K562细胞生长情况及不同浓度ART作用不同时间后的细胞形态变化，同时用ELISA检测ART作用K562前后细胞上清液中VEGF含量变化.结果表明：ART对K562细胞的生长有明显的抑制作用（P〈0．01），ART在抑制K562细胞生长时也下调其VEGF的表达（P〈0．01）。K562细胞抑制率与其上清液中的VEGF浓度的相关分析表明：随着各ART组作用浓度递增，在一定时间范围内K562细胞抑制率升高，与此同时K562细胞VEGF表达下调，此变化差异有显著统计学意义（P〈0.01）。结论：青蒿琥酯能显著地抑制K562细胞的生长；青蒿琥酯在抑制K562细胞生长时对VEGF的表达明显下调，K562细胞抑制率与其VEGF表达呈负相关；青蒿琥酯抑制K562细胞生长的机制可能是通过下调细胞的VEGF的表达实现的。     

Aurora激酶抑制剂VX-680对慢性髓系白血病细胞增殖及凋亡的影响

本研究探讨Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对白血病细胞系K562、KCL22和慢性髓系白血病（CML）患者骨髓CD34^＋细胞的增殖和凋亡的影响。利用CCK-8法观察VX-680对K562和KCL22细胞的增殖作用,细胞计数方法测定VX-680对CML的CD34^＋细胞增殖影响,Annexin V-PI凋亡检测试剂盒、流式细胞术分析VX-680对K562、KCL22细胞凋亡效应,集落形成试验检测VX-680对CML及正常供者（donor）的骨髓CD34^＋细胞集落形成能力影响。结果表明,Aurora激酶抑制剂VX-680（20-100 nmol/L）在处理细胞第3天时能明显抑制K562和KCL22细胞增殖（P〈0.01）,并能抑制CML患者骨髓CD34^＋细胞增殖,而且随着剂量增加,抑制作用增强;VX-680（20nmol/L）作用K562和KCL22细胞3天时可诱导细胞凋亡（P〈0.01）;集落形成试验表明,CML患者骨髓CD34^＋细胞在VX-680的体外处理下集落形成能力较正常骨髓CD34^＋细胞明显下降（P〈0.01）。结论：Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对慢性髓系白血病细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

M1-GS RNA靶向作用于K562细胞的研究

目的；探讨带有导引序列的核糖核酸酶P亚单位M1 RNA(M1-GS RNA)转染白血病细胞株K562细胞后对bcr-abl融合基因mRNA及其表达产物的作用效应。方法：含有针对bcr-abl mRNA的M1-GS RNA表达质粒pAVGS4，以X-treme Q2介导转染K562细胞，设置空载体组作为对照，分别在转染后24，48，72和96h收集细胞，以Trizol试剂抽提总RNA，通过RT-PCR检测转染后不同时间bcr-abl mRNA的变化；在转染后48和96h，抽提总蛋白质，通过Western blot检测癌基因的表达产物P210在不同时间的变化。利用半固体琼脂培养方法观察pAVGS4对K562细胞集落形成的影响。结果：pAVGS4转染K562细胞后24，48，72和96h RT-PCR结果显示：在转染后24h，随时间的推移，实验组细胞内bcr-ablmRNA含量下降近1个对数级，72和96h实验组细胞内bcr-abl mRNA的含量接近，而对照组无明显改变。Western blot结果显示：实验组在48h的灰度值是同期对照组的10．4％，96h时为6．7％。K562细胞集落形成分析显示96h后集落抑制率达81．3％。结论：M1-GS RNA可以有效、特异地破坏bcr-abl mRNA，显著下调P210的表达，抑制K562集落形成。     

胆固醇合成抑制剂辛伐他汀对K562细胞增殖和凋亡的作用

目的 探讨慢性髓细胞白血病（CML）细胞抗凋亡机制和诱导CML细胞凋亡的有效方法。方法 采用CML细胞株K562体外培养、用^3H-TdR掺入法及DNA末端标记法观察胆固醇合成限速酶3－羟－3－甲基戊二酰辅酶A（HMG－CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对K562细胞增殖及凋亡的作用,以及该制剂联合化疗药物对K562细胞凋亡的影响。结果 辛伐他汀明显抑制562细胞增殖并诱导其凋亡,并能增强K562细胞对化疗药物的敏感性。加入HMG－CoA下游产物甲羟戊酸可完全逆转这种作用。结论 辛伐他汀通过抑制甲羟戊酸代谢途径抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,表明HMG－CoA还原酶抑制剂作为治疗CML的药物具有潜在的应用价值。     

AG490抑制K562细胞增殖和下调PHLPP蛋白的表达

本研究旨在探讨AG490抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡过程中p-Akt及PHLPP表达的变化。以不同浓度的AG490作用于人慢性髓系急性红白血病细胞株K562,采用WST-1法检测细胞的增殖活性,AnnexinⅤ-FITC双染检测细胞凋亡,Western blot检测p-Akt、Akt、PHLPP蛋白表达水平的变化。结果表明,AG490以时间及浓度依赖性方式抑制K562细胞增殖,其48 h的IC50值为338.0μmol/L;AG490 100μmol/L诱导K562细胞凋亡,呈明显的时间依赖性;AG490 100μmol/L作用于K562细胞后p-Akt及其调节蛋白PHLPP的表达水平呈时间依赖性方式下降,但是对总Akt的表达水平无明显影响。结论:AG490可能通过下调p-Akt的表达抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,但同时也可能通过下调p-Akt的调节蛋白PHLPP的表达水平而使AG490对K562增殖的抑制效果受限。     

鱼藤素对K562细胞nup98表达的影响

本研究观察鱼藤素对白血病细胞株K562细胞核孔蛋白nup98表达的影响。用MTT比色法检测细胞增殖活性;流式细胞术及RT-PCR法分析鱼藤素作用K562细胞后nup98蛋白及mRNA含量的变化。结果表明:鱼藤素能显著抑制K562细胞的增殖,并与作用时间和鱼藤素浓度呈依赖关系;空白对照组K562细胞nup98蛋白表达的平均荧光强度为34.22±1.63,显著高于阴性对照组(2.83±0.02,P<0.01),10nmol/L鱼藤素即能显著抑制nup98蛋白的表达;10nmol/L鱼藤素对nup98mRNA表达的抑制作用不显著,20、40、80、160nmol/L鱼藤素能显著抑制nup98mRNA的表达,并且呈剂量依赖性。结论:鱼藤素可通过抑制核孔蛋白nup98的表达进一步抑制K562细胞的增殖。nup98可能成为急性白血病治疗的基因靶点。     

整合蛋白β1在藻蓝蛋白抑制白血病细胞系K562细胞增殖中的作用

本研究观察不同浓度藻蓝蛋白（phycocyanin）对K562细胞增殖的影响，并检测藻蓝蛋白处理后细胞表面整合蛋白β1表达和胞内黏着斑激酶（FAK）基因表达的变化，探讨整合蛋白β1在藻蓝蛋白抑制K562细胞增殖中的可能作用机制。用流式细胞术（FCM）检测藻蓝蛋白处理前后K562细胞表面整合蛋白β1表达变化；MTT法测定不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞增殖的影响；RT—PCR检测不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞内FAK基因表达的作用。结果表明：整合蛋白β1在K562细胞上高表达；藻蓝蛋白不能改变其表达量。不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞的增殖均有抑制作用。藻蓝蛋白可上调胞内FAK的基因表达水平，恢复整合蛋白β1介导的细胞增殖抑制信号。结论：藻蓝蛋白可能通过增强细胞基质与K562细胞表面的整合蛋白β1结合，上调K562细胞内FAK基因表达水平，恢复整合蛋白β1介导的细胞增殖抑制信号而发挥抑制K562细胞增殖的作用。     

藤黄酸对K562细胞的凋亡诱导及其作用机制研究

本研究探讨藤黄酸（gambogi cacid,GA）对K562细胞的抑制作用及机制。以不同浓度的藤黄酸处理K562和K562／A02细胞;用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测GA对细胞增殖的影响;碘化丙啶（PI）染色分析细胞周期;AnnexinV／PI双染法检测细胞的凋亡;JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase-3、caspase-8、caspase-9阳性细胞水平。结果显示：藤黄酸呈时间和浓度依赖性抑制K562细胞增殖。K562／A02细胞（GA〉2μg/ml）比K562细胞（GA〉0．5μg／ml）需要更高的藤黄酸浓度才显示增殖抑制作用。藤黄酸呈浓度依赖性诱导K562细胞凋亡。藤黄酸0、0．5、1．0、2．0μg／ml浓度对K562细胞周期未显示明显影响。藤黄酸作用后的K562细胞的线粒体跨膜电位明显降低。藤黄酸2μg/ml作用24小时激活的caspase3、caspase8、caspase9阳性细胞比例与对照相比分别上升2．19％、-1．95％、34．01％;作用48小时分别上升60．4％、71．3％、77．7％。结论：藤黄酸对K562细胞株有显著的抑制作用,该作用是通过诱导细胞凋亡实现的。藤黄酸不影响K562细胞的细胞周期。藤黄酸通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导K562细胞的凋亡。     

氟达拉滨联合丙戊酸对慢性粒细胞白血病细胞凋亡诱导作用

目的 研究氟达拉滨（Fludarabine,FDB）联合丙戊酸（valproic acid,VPA）对慢性粒细胞白血病（chronic myeloidleukemia,CML）细胞株K562增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 慢性粒细胞白血病细胞株K562,单独使用不同浓度的FDB（1,5,10μmol/L）或VPA（1,2.5,5 mmol/L）,或联合使用FDB和VPA处理K562细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况,并观察其有效的作用浓度;流式细胞仪检测K562细胞周期变化;western blot检测凋亡相关蛋白及组织蛋白酶B的表达变化.结果 单独使用FDB或VPA均可明显抑制K562细胞的增殖,呈剂量依赖性,并使K562细胞停滞在G0/G1期,联合使用VPA能增强FDB对K562细胞的凋亡诱导作用.同时检测到FDB和VPA能诱导溶酶体中组织蛋白酶B的表达.结论 联合使用FDB和VPA可诱导K562细胞溶酶体中组织蛋白酶B的表达及活性,从而启动溶酶体介导的细胞凋亡过程,明显抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞的凋亡,提高治疗效果,为临床抗肿瘤治疗提供新的指导方向.     

三氧化二砷、人参皂甙和β榄香烯对K562细胞株端粒-端粒酶系统作用机制的研究

本研究目的是探索三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯等几种药物在不同浓度作用时对K562细胞株端粒长度和端粒酶活性的调节及抑制作用，并研究上述药物抗白血病的作用机制，为寻求治疗急性白血病的新方法奠定基础。用3组不同浓度的三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯与人类红白血病细胞株K562共培养，采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性，Southem blot法检测端粒长度。观察上述药物对K562细胞端粒酶活性及端粒长度的影响。结果表明：①经人参皂甙、三氧化二砷及β榄香烯作用后，K562细胞株端粒酶活性下降，下降程度呈浓度、时间依赖性，在一定浓度及作用时间后端粒酶呈阴性。②三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯作用后K562细胞的存活率下降，且抑制作用呈浓度、时间依赖性。③三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯作用于K562细胞72小时后，端粒长度略有延长。结论：①三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯均能抑制K562细胞的端粒酶活性，抑制作用呈浓度、时间依赖性。抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一。②三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯均能抑制K562细胞的生长，抑制作用呈浓度、时间依赖性。③抑制端粒酶活性后，K562细胞的端粒长度略有延长。本研究结果提示除了端粒酶以外，白血病细胞可能存在其他的端粒长度调节机制。     

细胞周期素A的特异反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用

目的　探讨细胞周期素A(CyclinA)的特异反义脱氧寡核苷酸 (ASON)对K5 6 2细胞增殖的调控作用。方法　采用反义技术将CyclinA特异的ASON与K5 6 2细胞共培养后 ,用台盼蓝拒染法绘制生长曲线、并做CFU K5 6 2克隆培养 ,流式细胞术进行A蛋白检测。结果　CyclinA特异的ASON组与正义脱氧寡核苷酸 (SON)组及空白对照组相比 ,能特异地抑制CyclinA蛋白水平的表达 (P <0 .0 1) ;而且当ASON的浓度达到一定程度时 ,K5 6 2细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制 (P <0 .0 1)。结论　ASON能特异封闭CyclinA蛋白水平 ,并能抑制K5 6 2细胞的增殖 ,但有明显的浓度依赖性。     

塞来昔布联合干扰素α对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期和CD117表达的影响

本研究探讨塞来昔布(Celecoxib)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期和CD117表达的影响及其与干扰素α(IFN-α)联用的协同作用。通过以不同浓度组合的Celecoxib和IFN-α作用于培养的K562细胞,用MTT比色法观察各组的细胞生长抑制情况,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和CD117膜抗原表达情况。结果显示:Cele-coxib可明显抑制K562细胞增殖,抑制效应呈浓度依赖性(r=-0.91)。K562细胞培养72小时后,空白对照组、IFN-α组、Celecoxib组和Celecoxib联合IFN-α组的细胞增殖率分别为(96.1±0.5)%、(90.2±0.4)%、(57.2±0.9)%和(21.9±0.3)%;细胞凋亡率分别为(5.5±0.8)%、(6.3±0.6)%、(26.4%±3.9)%和(57.3±4.5)%;K562细胞膜CD117表达率分别为54.7%、10.5%、36.3%和7.3%。两药联用还可使K562细胞阻滞于G0/G1期。结论:Celecoxib和IFN-α不同程度地抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡、产生G0/G1期阻滞和降低CD117表达,两药联用对上述效应具有协同作用。