强直性脊柱炎患者血清基质金属蛋白酶-3,TNF-α,IL-15,CRP水平及意义的研究

目的探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3),TNF-α,IL-15,CRP水平及意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定45例AS患者和31例健康对照组的血清MMP-3、白细胞介素15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及C-反应蛋白(CRP)水平,比较各个指标在AS组与对照组之间的差异,并分析AS组患者各指标间的相关性。结果血清MMP-3,TNF-α,CRP水平在AS组患者显著高于健康对照组(P<0.001),IL-15水平两组比较也有显著性差异(P<0.05);在AS组仅有MMP-3与IL-15之间存在相关性。结论MMP-3和IL-15在AS发病机制中起着重要作用,可以作为评估AS病情的二个有价值的血清学指标。     

114例癌症患者外周血T淋巴细胞亚群水平及其临床意义

目的:分析癌症患者外周血T淋巴细胞亚群测定的特点、影响因素及临床意义.方法:采用流式细胞术(FCM)检测114例肿瘤(包括肺癌30例、食管癌43例、非霍奇金淋巴瘤41例)患者外周血中T细胞亚群水平.结果:患者外周血CD3+、CD4+明显减少,CD4+/CD8+值明显下降,与正常组比较差异具有统计学意义(P＜0.01),...     

高三尖杉酯碱通过mTOR通路诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡

目的:观察高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)对人CML细胞株K562的增殖及凋亡的影响,并从mTOR通路探索HHT抗CM L效应的作用机制。方法:采用不同浓度HHT或联合mTOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)处理K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖抑制活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测BCL-6、Caspase-3及mTOR通路相关蛋白的表达水平,RT-PCR法检测BCL-6 mRNA表达水平。结果:HHT可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,且呈浓度依赖性(r=0.970)。随着HHT作用浓度的增加,mTOR通路相关蛋白表达水平升高(r=0.908),而BCL-6 mRNA及蛋白的表达水平下降(r_(mRNA)=-0.961,r_(protein)=-0.981)。与HHT单用组相比,联用RAPA可显著下调mTOR及Caspase-3的表达,并上调BCL-6表达。结论:HHT可通过激活mTOR通路抑制抗凋亡BCL-6蛋白的表达,进而诱导CML细胞凋亡。     

康莱特注射液联合奥沙利铂对SW480细胞株增殖和凋亡的影响

目的:研究康莱特注射液(Kanglaite Injection)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测康莱特、L-OHP及其联合作用对SW480细胞的增殖抑制率的影响;FCM法检测2者对SW480细胞周期及凋亡率的影响;免疫细胞化学法和蛋白质印迹法检测2者对凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响。结果:康莱特及L-OHP对SW480细胞增殖均有抑制作用,两药联合具有协同作用(P<0.05),细胞周期被阻滞于G2/M期(P<0.05);康莱特联合L-OHP对SW480细胞的凋亡率为(23.3±3.04)%,明显高于L-OHP单药作用的(9.00±2.14)%及康莱特单药作用的(7.50±0.85)%(P<0.05);免疫细胞化学法及蛋白质印迹法检测均显示康莱特能协同L-OHP抑制SW480细胞中Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论:康莱特可协同L-OHP抑制SW480细胞的增殖,并促进其凋亡。     

PCI-32765和Bortezomib对B细胞肿瘤细胞系细胞增殖、凋亡的影响及其机制的研究

本研究旨在探讨Btk抑制剂PCI-32765和蛋白酶体抑制剂bortezomib对Raji、Ramos细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制.PCI-32765和bortezomib单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞后,分别运用CCK-8法及流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡,Western blot法检测Btk、NFκB、c-IAP1、Bcl-xL、caspase-3等蛋白的表达.结果表明：①PCI-32765（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0μmol/L）和bortezomib（10、20、30、40、50、60、80 nmol/L）处理Raji和Ramos细胞48 h,均可抑制细胞增殖,抑制率呈剂量依赖性,且两药具有协同作用;②PCI-32765（2.0μmol/L）、bortezomib（20 nmol/L）单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞不同时间（8、12、24、36、48、72 h）,均可抑制细胞存活率,抑制率呈时间依赖性,且两药具有协同作用;③PCI-32765（2μmol/L）和bortezomib（20 nmol/L）单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞48 h,可明显促进Raji及Ramos细胞的凋亡.Raji细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bonezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为10.34±0.53％、24.26±0.91％、43.66±1.08％与74.06±0.72％,各组间有统计学差异（P＜0.05）;Ramos细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bortezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为15.16±1.49％、71.36±0.82％、75.32±2.36％与84.30±0.91％,各组间有统计学差异（P＜0.05）;④PCI-32765和bonezomib单药处理Raji、Ramos细胞后,细胞内Btk、NFκB、Bcl-xl及c-.IAP1的表达水平较对照组降低,Caspase-3的表达水平升高,两药联用后,作用增强.结论：PCI-32765和bonezomib可以协同抑制Raji与Ramos细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制Btk、NFκB的活性,下调Bcl-xl及c-IAP1等抗凋亡蛋白,同时上调Caspase-3等凋亡蛋白的表达而发挥作用.     

Btk及NFκB在急性髓系白血病细胞中的表达及其意义

摘要本研究检测Btk及NFκB在急性髓系白血病（AML）患者白血病细胞中的表达,评价其在AML发生、发展中的作用。选取14例AML初诊及治疗达完全缓解患者的骨髓单个核细胞标本,检测Btk、NFκB在mRNA及蛋白质水平的表达。结果表明：在mRNA及蛋白质水平,AML患者细胞中均有Btk、NFκB的表达。Btk、NFκB蛋白在初发AML患者白血病细胞中表达高,达完全缓解后,其表达下降或检测不到（P〈0．05）。结论：Btk、NFκB在AML的发生、发展中可能起重要作用,它们有可能作为AML的潜在治疗靶点及用于预后预测。     

免疫分型在-些特殊类型急性白血病诊断中的应用

目的 报告免疫分型在一些特殊类型急性白血病(AL)诊断中应用的重要意义.方法 应用流式细胞术(FCM)分析369例AL的免疫表型.结果 369例AL中有2例诊断为急性髓细胞白血病(AML)·M0,1例诊断为AML-M7,0例诊断为急性杂合性白血病(HAL),5例诊断为急性未分化型白血病(AUL),2例诊断为侵袭性NK细胞白血病.结论 AML-MO、AML-M7、HAL、AUL和侵袭性NK细胞白血病等特殊类型AL的诊断依赖于细胞免疫表型分析.     

靶向SMC1A基因慢病毒介导的RNA干扰对奥沙利铂治疗敏感性的影响

目的 探讨沉默结直肠癌细胞株染色体结构维持-1A（SMC1A）基因对奥沙利铂（L-OHP）敏感性的影响。方法 构建SMC1A基因的小分子RNA干扰表达质粒。与慢病毒包装质粒一起转染239T细胞制备pGCSIL-GFP／SMC1A-siRNA慢病毒载体,并将重组质粒转染结直肠癌SW480、HT-29细胞株。RT-PCR、Western blotting法检测SMC1A mRNA和蛋白的表达情况。CCK-8法检测不同浓度L-OHP对细胞的抑制作用。 结果 pGCSIL-GFP／SMC1A-siRNA慢病毒载体构建成功,RT-PCR产物为343bp。RT-PCR显示重组质粒转染的SW480、HT-29细胞SMC1A mRNA表达量明显低于其对应的未转染细胞（0.13±0.02 vs. 1.02±0.06,0.182±0.019 vs. 1.114±0.032;P＜0.05）;Western blotting 显示干扰后的细胞SMC1A蛋白表达受到明显抑制;不同浓度的L-OHP处理细胞48h后,CCK-8显示转染SMC1A-siRNA细胞生长抑制率较未转染细胞高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 沉默结直肠癌细胞株SMC1A基因对奥沙利铂的敏感性显著增加,为临床进一步提高结直肠癌的疗效提供了研究基础。     

Survivin抑制剂YM155对K562细胞凋亡和自噬的影响

目的:本研究旨在探讨survivin抑制剂YM155对人慢性髓系白血病细胞株K562凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度YM155处理K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RTPCR检测survivin、BCL-2及beclin1的mRNA表达水平,Western blot检测survivin、BCL-2、caspase-3、PARP及LC-3的蛋白表达。结果:YM155抑制K562细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性。随着药物浓度的升高及作用时间的延长,survivin和BCL-2的mRNA及蛋白表达水平下降,而caspase-3、PARP、beclin1及LC-3的表达水平升高。YM155联合3-MA组的LC-3和caspase-3蛋白表达水平以及K562细胞凋亡率均显著低于YM155单用组。结论:YM155通过诱导凋亡和自噬而抑制K562细胞的增殖,其自噬诱导效应与凋亡诱导效应有协同抗CML的作用。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的时间节律性及其机制研究

本研究旨在观察高三尖杉酯碱（HHT）作用于K562细胞后不同时间点凋亡率的变化及其机制。HHT10ng／ml作用K562细胞后,用MTT法检测不同时间点的细胞增殖活力,Westernblot法检测caspase-3凋亡蛋白表达;流式细胞术检测BCL-2蛋白表达;应用透射电子显微镜观测细胞自噬。结果表明,HHT10ng／ml处理后的前5d,K562细胞增殖活性逐渐下降,但在第6天以后增殖活性又逐渐上升;同时激活型caspase-3蛋白从第1天至第7天逐渐增高,而在第8天明显降低（P〈0．05）;BCL-2蛋白表达水平则呈现先降低后升高（P〈0．05）的特点。细胞自噬体在HHT作用第8天明显增多。结论：HHT作用后,K562细胞凋亡水平变化呈现先升高后下降的特点,其机制与HHT作用后期K562细胞自噬水平升高有关。