FGF2对BMP-Smads信号转导通路的负调节机制初步研究

目的 :利用小鼠前成骨细胞系MC3T3 E1初探FGF2对BMPS Smads信号转导通路的调节机制。方法 :构建含 5个串联的来源于Smad6启动子的R Smads结合序列 (GC2 )的荧光素酶报告基因质粒 ( 5GC2 Lux)。以该质粒探讨FGF2对BMP组成活化型受体I(caALK 2 )激活的Smad5转录调控能力的影响。外源转染去除Smad5分子中MEK ERK通路磷酸化位点的突变体 ,探讨FGF2伙化的MEK ERK对BMPS Smads通路的调节作用。结果 :所构建报告基因质粒能够特异反映Smads的转录激活能力的变化。FGF2能够显著下调BMP组成活化型受体(caALK2 )激活的Smad5转录调控能力。外源转染Smad5突变分子仅能部分逆转FGF2对Smads通路的负调节效应。结论 :FGF2参与调节BMPs活化的信号通路可能不仅限于通过活化MEK ERK信号转导通路来下调Smads转录调控活性     

人骨髓间充质干细胞释放膜微囊条件探索

间充质干细胞（MSC）释放膜微囊（MV）是其促血管再生的重要机制。本研究旨在探索人骨髓MSC释放MV的适宜条件。收集5份健康人骨髓标本,分离培养并鉴定MSC。将第5代MSC分别悬浮于含10％胎牛血清或无血清的培养液中,按2×10^6／皿接种于直径为150mm的培养皿中,在低氧（1％氧浓度）或常氧条件下培养72h,每组20皿。将培养上清高速离心收获MV。计数培养后贴壁细胞,并测定MV蛋白质含量。电子显微镜观察MV的形态以鉴定MV。流式细胞术分析MV的表面标志。在脐静脉内皮细胞培养体系中,加入不同来源的MV（10μg/m1）,培养72h后利用MTr实验观察细胞增殖活性。结果表明：多数Msc释放的MV直径〈100nm,在电子显微镜下呈特征性的中空膜样结构。MV表达CD29、CD44、CD73和CD105,不表达CD31和CD45。在常氧含血清、常氧无血清、低氧含血清和低氧无血清条件下,台盼蓝抵抗的贴壁细胞扩增倍数分别为4．1、1．8、5．8和3．7,计算10^8细胞释放的MV蛋白含量分别为463．48±138．74、1604．07±445．28、2389．64±476．75和3141．18±353．01μg。MTT实验表明,低氧条件下获得的MV具有更好的促内皮细胞增殖作用。结论：低氧可促进MSC释放MV,低氧和无血清培养MSC可能是制备MSC—MV的适宜条件。     

Effect of icariside Ⅱ on the expression of osteoprotegerin in mouse osteoblasts

以17β-雌二醇为阳性对照组,观察不同浓度淫羊藿次甙Ⅱ对成骨细胞护骨素(OPG)表达的影响,结果发现20.ng/dl淫羊藿次甙Ⅱ上调成骨细胞OPGmRNA的表达,且优于阳性对照组(P<0.05),淫羊藿次甙Ⅱ也显著增加成骨细胞OPG分泌水平,20 ng/dl淫羊藿次甙Ⅱ组的促分泌活性显著优于阳性对照组,提示淫羊藿次甙Ⅱ作为淫羊藿甙在体内的主要代谢产物,在体外较低剂量即可显著促进成骨细胞OPG的表达,具有良好的抗骨质疏松作用.     

间充质干细胞治疗的安全性及伦理问题探讨

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSC）的免疫调节、造血支持及促血管新生的功能特点,使其成为继造血干细胞之后又一个有望应用于临床的成体干细胞.有些国家已经批准MSC作为药物,用于治疗移植物抗宿主病、克隆氏病、骨关节炎等疾病;同时,数百个临床试验也在进行中,上万人已经接受了MSC治疗.然而,MSC本身及其治疗过程,都可能引起相应的毒副反应,甚至产生致命的并发症.因此,在MSC治疗某些疾病效果尚存在争议的情况下,进行这种新型细胞治疗的临床试验,应重视符合医学伦理规范的受试者知情权保护.参试者有权了解细胞治疗细节及其可能机制,潜在的风险及规避措施,其他可以采用的治疗手段及其与细胞治疗的比较等细节,以切实保护受试者权益.     

大剂量甲氨喋呤副作用及其对策

我们对17例ALL 58次HD-MTX治疗,出现的副作用及处理进行了总结分析,认为:(1)副作用以呕吐、发热及药物性肝炎多见;(2)发热可能与MTX直接脑毒性有关;(3)药物性肝损害表现为GPT增高,可于短期内恢复;(4)局部应用0.1g/L四氢叶酸钙可减轻口腔及肛周溃疡的发生。     

脐带间充质干细胞在遗传性痉挛性截瘫中的应用

目的观察脐带间充质干细胞（UC-MSC）治疗遗传性痉挛性截瘫（HSP）的临床疗效及安全性。方法2010年9月及2011年4月,分别给予一HSP家系父子2人行UC-MSC鞘内注射治疗,两个疗程,每次1×106 cells/Kg,每周1次,4次为1个疗程。采用改良的Ashworth肌张力分级标准（MAS）、国际合作共济失调评分量表（ICARS）及日常生活量表（ADL）,对患者治疗前后神经功能、日常生活能力进行评定。结果第一疗程结束1个月与治疗前比较,2人MAS分级、ICARS及ADL评分均降低,两人行走站立稳定性及言语流利程度较治疗前改善;第二疗程结束后1个月与该疗程治疗前比较,2人ICARS及ADL评分降低,儿子肌张力进一步降低,父亲双上肢共济失调减轻。2人治疗后均未见明显不良反应发生。末次治疗结束后随访20个月,父、子俩分别于第二疗程治疗结束7个月及8个月后,症状继续加重。结论 UC-MSC鞘内注射治疗是安全的,可在一定时间内一定程度上减轻患者临床症状,提高患者生活质量,延缓疾病进展,但疗效不能持久。     

c-cbl反义RNA抑制K562细胞的增殖

为探讨原癌基因c-cbl对CML细胞增殖的影响,我们用RT-PCR克隆了包括5′端非编码区的人类c-cbl基因部分序列,将之反向插入pcDNA3载体,并转染K562及NB4细胞。经MTT实验、半固体集落培养和流式细胞术观察细胞增殖能力的改变。结果表明,限制性酶切分析及序列测定证明所克隆的基因核苷酸序列正确,MTT实验显示反义载体转染K562细胞生长明显受抑,24、48及72小时增殖抑制率分别为30.07％,42.53％和55.75％(P值均<0.001),FCM-BrdU法测定的细胞倍增时间之比为1∶1.87(P<0.02),细胞集落形成抑制率为33.01％,反义转染基因NB4细胞增殖率无改变。上述结果直接地证明了c-cbl在CML细胞生长中的重要性。     

小鼠骨骼肌源间充质干细胞的分离与培养

为观察成体小鼠肌肉组织中是否含有间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)，将分离胶原酶消化的肌肉单个核细胞，在含10％胎牛血清的α—MEM／F12培养液中培养，观察培养细胞的形态、细胞化学及增殖特性特征，用流式细胞术分析细胞表型，并观察细胞体外向成骨细胞分化能力。结果显示，从小鼠肌肉组织中分离和培养获得的细胞具有良好的增殖特性，CD34及CD45阴性，CD29及Sca—1阳性率在90％以上。细胞化学染色显示，细胞非特异性酯酶和酸性磷酸酶为阳性，碱性磷酸酶阴性，糖原为弱阳性。细胞经维生素C，β-磷酸甘油及地塞米松诱导后，碱性磷酸酶活性明显增强，阳性率达到94％以上。结论：成体小鼠肌肉组织中含有间充质干细胞，是肌肉干细胞群体中的重要组成部分。     

间充质干细胞及其临床应用中的几个问题

在血液病的治疗方面,骨髓造血干细胞的作用早已得到公识。目前,在许多国家间充质干细胞已经被批准进入多个临床试验,用于治疗移植物抗宿主病、克罗恩氏病、肝脏纤维化和骨关节损伤等多种疾病。然而,有关体内间充质干细胞的本质、体外培养后间充质干细胞的特性变化、细胞移植后在体内的分布、间充质干细胞治疗的作用机制及其临床应用的安全性等诸多根本性的问题,必须在间充质干细胞被广泛应用之前得以明确。这里尚有多少个不确定的环节？尚有多少个需要认识的关键性问题？文章结合以上问题,对近几年间充质干细胞的研究进展进行了综述和分析。     

人骨髓间充质干细胞对放射损伤小鼠造血恢复的影响

本研究旨在探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)对受γ射线照射小鼠造血恢复的影响。亚致死剂量(6Gy)60Co-γ射线全身照射雌性BALb/c小鼠,静脉输注不同剂量(1×105,1×106和5×106)的hBMMSC,观察注射后小鼠血常规指标、骨髓造血祖细胞集落量以及血清人TPO,SCF和G-CSF水平等动态变化。结果表明:hBMMSC输注对亚致死量照射小鼠早期死亡率无影响;与对照组比较,接受细胞治疗小鼠早期血象水平无显著增高,但在第28天外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白水平高于对照组,尤以大剂量组明显(P值均小于0.05);在中剂量和大剂量hBMMSC组小鼠骨髓中,单个核细胞集落形成单位总数和粒单系集落形成单位数均高于对照组(P<0.05);hBMMSC输注后第2天,ELISA法检测可在细胞治疗组小鼠血清中检测到人G-CSF和SCF,以hBMMSC高剂量组G-CSF含量为最高(P<0.01)。所有各组未检测到人TPO,治疗后第9和16天所有各组血清中均未检测到人G-CSF和SCF。结论:hBMMSC输注可加速放射损伤小鼠造血功能的恢复,其机制可能与细胞短暂分泌相关造血细胞调控因子有关。