RHD845A/1227A基因型个体家系调查分析

本研究对1例RHD845A/1227A基因型个体进行家系调查分析,并分析他们的遗传特性。通过盐水法和间接抗人球蛋白试验（IAT）检测RH（D）抗原,PCR—SSP法检测RHD1227A和RHD845A等位基因以及RHD合子型,基因测序方式分析RIHD基因编码区序列。研究结果表明：血清学检测发现1例RH（D）抗原盐水法检测阴性、IAT法检测阳性样本,经RHD基因编码序列分析发现,RHD第845位与第1227位均出现G／A碱基杂合现象,推测该个体基因型可能为RHD845A／1227A。家系调查显示,先证者父亲为RHD阴性,母亲为RHD阳性。PCR-SSP检测结果显示,父亲携带RHDl227A等位基因,基因型为RHD845A／RHD-;母亲携带RHD845A等位基因,基因型为RHD845A／RHD＋,证明先证者分别从父亲和母亲遗传RHD1227A和RHD845A等位基因,基因型为RHD845A／1227A。结论：经过家系调查分析发现了1例罕见的RHD845A／1227A基因型个体。根据家系调查证明,RHD845A和RHD1227A等位基因分别由遗传获得,而非由个体基因变异形成。     

38例血清学弱D表型献血者RhCcEe表型与RHD基因型检测情况分析

目的研究深圳地区血清学弱D表型献血者RhCcEe表型与RHD基因型特点。方法收集38例献血者血液样本,抗-D抗体(IgM/IgG)检测RhD抗原。采用IgM抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗体检测RhCcEe抗原。利用PCR-SSP方法分析RHD基因10个外显子,必要时对RHD基因的所有外显子进行直接测序。统计学方法分析RhCcEe表型与RHD基因型之间的相关性。结果 38例血清学弱D表型献血者中发现8种已报道的等位基因,RHD*weak partial 15(15/38)、RHD*DEL1(11/38)、RHD*DVI.3(5/38)、RHD*weak D type 61(1/38)、RHD*weak D type 95(1/38)、RHD*DCC(1/38)、RHD*DFR1(1/38)、RHD*weak D type 50(1/38)、RHD*weak partial 15 / RHD*DEL1杂合(1/38)。其中RHD*weak D type 50在中国汉族人群中首次报道。另外,发现了1例新的RHD等位基因RHD*IVS9-1C(c.1228-1GC)。该等位基因的序列数据已提交GenBank,登记号为MT755965。经相关性分析,RHD*weak partial 15与RhE抗原相关系数为0.727(P0.01),RHD*DEL1与RhC抗原相关系数为0.645(P0.01)。结论深圳地区血清学弱D表型献血者的RHD基因结构呈现多态性,主要为RHD*weak partial 15、RHD*DEL1、RHD*DVI.3,并存在其他稀有的基因型;RHD*weak partial 15与RhE抗原、RHD*DEL1与RhC抗原存在显著正相关。     

广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析

目的分析广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征。方法收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序。结果发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960GA(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致。结论首次在广州地区人群中发现了RHD*960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D。     

先证者为Rh阴性汉族家系RHD基因遗传方式研究

目的分析先证者为Rh阴性家系的RHD基因结构特征，了解Rh血型的基因遗传方式，探讨RHD基因组合和Rhesus盒子（Rh盒子）检测预测新生儿溶血病的意义。方法采用PCR-SSP方法对3例汉族Rh阴性家系的19份样本进行了RHD基因10个外显子的上游Rh盒子、下游Rh盒子和融合Rh盒子检测。结果基因型为RHD-／RHD一个体检测到融合Rh盒子，无上下游Rh盒子；基因型为RHD＋／RHD＋个体检测到上下游Rh盒子，无融合Rh盒子；基因型为RHD＋／RHD-的个体可同时检测到上下游Rh盒子和融合Rh盒子。结论用PCRSSP方法进行家系RHD基因结构分析，操作简便直观。本研究证实在Rh阴性家系中存在着非表达的RHD基因，其遗传方式呈单倍型遗传，符合孟德尔遗传规律。     

高通量MLPA基因分型技术在1个Del表型家系基因鉴定中的应用

目的 对1个Del表型家系作基因鉴定.方法 运用血型血清学方法对先证者及其家系的3名成员作RhD及相关血型抗原鉴定;提取先证者及其父母和妹妹的静脉血DNA.运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对先证者及其他成员血型基因作定性及定量分型;用PCR产物直接测序方法对发现的变异作确认.结果 血型血清学检测:先证者为Del表型,其他3名家系成员为正常的RhD阳性个体.MLPA基因分型:先证者有2条包含1227G＞A突变位点的RHD等位基因,而3名家系成员有1条包含1227G＞A突变位点的RHD等位基因及1条正常的RHD等位基因.结论 高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够对Del表型作明确的基因鉴定,有助于节约宝贵的RhD阴性血液.     

DAT阳性的DEL血型鉴定及其家系分析

目的:对1例DEL血型合并直接抗人球蛋白试验阳性患者进行血型鉴定并分析其遗传规律。方法:采用常规血清学试剂对先证者及其家系成员RhD血型进行血清学分析,使用PCR-SSP方法对RHD基因10个外显子及侧翼序列进行扩增、测序并分析其杂合性。对先证者家系进行调查并分析DEL血型遗传规律。结果:先证者DAT强阳性,RHD基因9外显子存在1227GA等位基因(RHD~*DEL1),其母亲为RHD~*DEL1携带者。RHD合子型鉴定为RHD~+/RHD~-,提示该个体单倍型为CD~(1227A)e/Cde。结论:先证者为DEL型(RHD~*DEL1)。     

弱D72血型的血清学特征及分子生物学分析

目的了解广州地区人群中弱D72血型的血清学特征及分子遗传背景。方法从广州血液中心献血者人群中收集了62人份D变异型标本,采用多重连接依赖的探针扩增(MLPA)技术做RHD及RHCE基因分型;对于MLPA检测不到的RHD突变型等位基因,对其10个外显子做直接测序分析,并采用D抗原表位分析试剂盒(DScreen)及其他7种单克隆抗-D做D抗原表位血清学检测。结果在62例D变异型标本中,共发现26例弱D表型,其中弱D72突变型等位基因5例[占8.1%(5/62)],4例为RHD*weak D type 72/RHD*01N.01(RHD基因缺失)和Ccee,1例为RHD*weak D type 72/RHD*DVI.3和CCeee。取1例RHD*weak D type 72/RHD*01N.01的红细胞标本做D抗原表位血清学检测:其与D-Screen试剂盒的9种单克隆抗-D均呈阳性反应,反应强度为1+~2+,与其余7种单克隆抗-D也均呈阳性反应,反应强度为w+~1+。结论血型血清学分析初步提示弱D72血型D抗原表位完整,但该血型个体在免疫刺激下是否不会产生抗-D仍需进一步临床证据证实。     

发现1个新的无效RHD等位基因

目的鉴定1个疑似新的无效RHD等位基因。方法采用常规血清学方法检测1名孕妇的Rh血型抗原,间接抗球蛋白试验确认RhD抗原阴性,并用吸收放散试验排除D放散型(Del);先后分别采用商品化试剂盒、序列特异性引物PCR(SSP-PCR)技术以及DNA序列分析技术,分析该名个体的RHD基因。结果血清学试验为Rh-dCcEe,吸收放散试验阴性;基因型检测为杂合型RHD+/RHD-;商品化试剂盒和SSP-PCR结果都显示该个体携带的RHD阳性基因与正常Rh阳性表型的基因一致。对该标本编码区全长序列分析结果显示:第1外显子的第78位核苷酸缺失1个碱基"C",至第112位氨基酸时形成终止密码子。结论经GenBank检索发现该例为1个新的无效RHD等位基因,并完成注册RHD78delC(GenBank GQ477180)。     

1例B_X血型个体的家族遗传分析及临床输血探讨

目的对1例BX血型个体及其家系成员血型进行分析,以阐明其血型遗传特征、保证临床输血安全。方法采用微柱凝胶法和试管法检测先证者及其家系成员的ABO血型、吸收放散试验确认亚型抗原物质、中和抑制实验检测唾液血型物质;扩增ABO基因6、7外显子并对扩增产物进行直接测序,并对测序结果进行比对。结果先证者及其儿子为BX型;先证者父亲和弟弟为B型;先证者母亲及其配偶为O型;测序结果显示先证者及儿子、父亲的ABO等位基因第7外显子在B101基础上发生695TC突变,比对人类血型抗原基因突变数据库,该等位基因为Bw11。结论鉴定了1例BX型患者及其家系成员的血型和等位基因型,血清学方法结合分子生物学方法对于准确鉴定ABO血型和降低亚型患者输血风险有重要意义。     

浙江汉族人群RHD基因合子型检测

目的了解浙江汉族人群RHD基因合子型多态性情况。方法采用PCR-SSP方法检测438例RhD阳性、弱D表现型、RhD阴性表型个体的RHD基因上、下游盒和杂交盒,根据个体盒子的检测结果推测其合子型。结果198例RhD阳性样本中12例(6.06%)为RHD /RHD-型,其余186例(93.94%)为RHD /RHD 型;32例弱D表现型样本中29例(90.63%)为RHD /RHD-型,3例(9.37%)为RHD /RHD 型;208例RhD阴性样本中53例(25.48%)为RHD /RHD-型,145例(69.71%)为RHD-/RHD-型,10例(4.81%)为RHD /RHD 型。结论浙江汉族人群中RhD阳性、弱D表现型、RhD阴性表型个体RHD基因合子型分布频率不同,RhD阴性人群中存在缺失RHD基因或有完整RHD基因的情况。     

在中国人群中首次发现1例Rh血型弱D12型

目的分析鉴定1名RhD抗原弱阳性个体的血型血清学表型及分子背景。方法采用常规血型血清学技术检测Rh D、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)方法同时检测RHD基因和RHCE基因,并测序分析RHD基因全长编码区序列;同时通过特异性PCR技术测定RHD合子型或RHD基因数目。结果血型血清学试验证实该标本为D抗原弱阳性表型,与相应Rh抗血清反应为C-c+E+e+;SSP-PCR检测显示RhCcEe基因定型结果与血型血清学完全一致,且有完整的RHD基因;但RHD基因全长编码区序列分析发现该标本的RHD第6外显子存在1处碱基突变:830G>A,编码区序列其它部分与正常RHD序列相同;RHD杂合性试验鉴定显示为RHD+/RHD-杂合型,推测该个体基因型可能为DcE/dce。结论对照国内外文献报道和GenBank记录的基因序列,该个例为在中国人群中首次发现的弱D12型。     

应用分子生物学技术检测及蛋白质模型预测1例弱D型54

摘要:目的对1例血型血清学检测为RHD变异型的样本进行基因分型,并进行家系调查分析。方法运用血型血清学检测方法对先证者及其家系样本进行RHD确认及RH血型抗原表位检测，用序列特异性引物PCR( sequence specifie primer PCR,PCR-SSP)法分析RHD基因外显子的表达,运用Sanger和SMRT ( single molecule real-timesequencing)测序法 对先证者及其家系样本进行RHD基因的1~10外显子测序分析。通过AlphaFold模拟构建蛋白质三级结构,将突变前后的蛋白质结构进行叠合以观察结构内分子间相互作用力的改变。结果先证者为 RHD弱表型,其他抗原为Ccee, 直接抗人球蛋白试验抗体筛查、抗体鉴定试验均为阴性，PCR-SSP 初步分型为RHD阳性。其父母血型血清学及PCR-SSP结果均为RHD阳性。SMRT 测序结果显示先证者母亲为RHD*/RHD杂合子。Sanger 测序结果显示，先证者父亲携带弱D型54等位基因。AlphaFold 建模预测揭示,p.Serl22Leu突变不能与146位GLU形成氢键相互作用。结论该样本为弱 D型54,p.Ser122Leu突变导致氨基酸内部分子间作用力发生改变,从而引起突变后蛋白质结构和功能的部分改变。     

番禺地区RHD变异体基因分型研究

目的研究分析番禺地区RHD变异体基因分型特征。方法采用微量板法对2010年11月～2011年8月到本站参加献血的26 172名次献血者进行RhD阴性筛查;采用抗球蛋白法对初筛RhD阴性的标本进行确认,采用吸收放散试验对经抗球蛋白法确认为RhD阴性的标本进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对献血者模板DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断RHD基因分型。对血清学与基因分型结果不符的标本进行测序分析。结果初筛检出60名RhD阴性,经抗球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23%;吸收放散试验检出10例Del表型。60例初筛阴性的基因分型检测发现40例RHDEXON1～10全缺失基因型,发生频率约为67.8%;10例RHD 1227A DEL基因型,发生频率约为16.9%;7例部分D,发生频率约为11.9%;1例RHD弱D15基因型,发生频率约为1.2%;2例RHD基因分型阳性需作进一步碱基测序分析。结论本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD 1227A DEL、RHD-CE(2-9)-D,RHD-CE(5)-D、RHD-CE(6-9)-D和RHD弱D15等基因型,血清学结合基因分型能更准确鉴定RhD血型。     

洛阳地区汉族人群RHD基因杂合性检测及其临床意义

目的调查洛阳地区汉族人群RHD基因的杂合情况。方法收集RhD阳性、弱D、RhDel及RhD阴性表型样本共387例,检测RHD基因的Up Box、Down Box及Hybrid Box,并判定个体的合子型。结果在所有387例样本中,94例（24.29%）为RHD＋/RHD-杂合子,246例（63.57%）为RHD＋/RHD＋纯合子,47例（12.14%）为RHD-/RHD-纯合子。300例表型为RhD阳性样本中,RHD＋/RHD＋纯合子有236例（78.67%）,其余64例（21.33%）为RHD＋/RHD-杂合子;12例弱D样本中,RHD＋/RHD＋纯合子有5例（41.67%）,其余7例（58.33%）为RHD＋/RHD-杂合子;19例表型为RhDel样本中,RHD＋/RHD＋纯合子有6例（31.58%）,其余13例（68.42%）为RHD＋/RHD-杂合子;56例表型为RhD阴性样本中,47例（83.93%）为RHD-/RHD-纯合子,其余9例（16.07%）为RHD＋/RHD-杂合子。结论 RHD基因合子型在不同RhD表型（RhD阳性、弱D、RhDel及RhD阴性）个体中的分布频率差异有统计学意义;研究本地区人群RHD基因杂合性,对产前预防RhD-HDN及临床输血具有重要的指导意义。     

人RHD基因Rhesus盒的检测及其意义

为了解人RHD基因的组合情况，进一步研究RHD基因遗传结构和预测新生儿溶血病．采用PCR—SSP方法，设计4条引物，用同一PCR反应条件同时检测人RHD基因的上游、下游和杂交的Rhesus盒。结果显示：RHD^-／RHD^-纯合子个体只检出杂交Rhesus盒，无上、下游Rhesus盒，RHD^ ／RHD^-杂合子个体能同时检出上、下游和杂交Rhesus盒，RHD^ ／RHD^ 纯合子个体只检出上、下游Rhesus盒，无杂交Rhesus盒。50例RhD阳性样本中5例(10％)为RHD^ ／RHD^-型，其余(90％)均为RHD^ ／RHD^ 型。98例无血缘关系RhD阴性汉族人样本中，54例(55．1％)为RHD^-／RHD^-纯合子，36例(36．7％)为RHD^ ／RHD^-杂合子即RHD基因单体型(可用于对RHD基因单体型进一步分析)，8例(8．2％)为RHD^ ／RHD^ 纯合子。2例弱D型样本同时检出上、下游和杂交Rhesus盒．为RHD^ ／RHD^-型。16例Dd型中10例(62．5％)同时检出上、下游和杂交Rhesus盒，为RHD^ ／RHD^-型．6例(37．5％)只检出上、下游Rhesus盒，无杂交Rhesus盒，为RHD^ ／RHD^ 型。这些样本RHD基因10个外显子的检测结果验证了本方法的正确性。结论：本方法所需引物少，操作简便，结果判断直观，适合临床应用。在RhD阴性中国汉族人中存在为数不少的RHD无效基因(非缺失型和部分缺失型占44.9％)。     

Rhesus盒检测技术

为了研究Rhesus盒的检测技术及意义,根据RHD基因上游盒、下游盒及杂交盒的DNA序列特异性设计引物,用PCR-SSP和错配PCR技术检测上游、下游和杂合的Rhesus盒.结果表明：DNA标准品验证本技术可靠,随机非血统关系RhD阳性者中,RHD^＋/RHD^-型占9.00%,RHD^＋/RHD^＋型占91.00%;RhD阴性者中RHD^＋/RHD^-型占26.14%,RHD^＋/RHD^＋型占3.92%,RHD^-/RHD^-型占69.94%.结论：Rhesus盒检测技术可用于分析RhD单倍型基因结构,用于遗传、临床输血及新生儿溶血病等研究.     

中国部分地区RhD(-)汉族人RHD基因结构分析

目的 :了解RhD(- )中国汉族人RHD基因的构成情况 ,并探讨其潜在的应用价值。方法 :采用PCR SSP方法分析 5 0名RhD(+)和 76名常规血清学RhD(- )汉族供血者的RHD基因存在情况 ,对其中 8例RhD(- )血样进行了吸收放散试验。结果 :5 0名RhD(+)供者RHD基因完整存在。 76名RhD(- )供者中 ,2 2名供者(2 8 95 % )存在完整RHD基因 ,9名供者 (11 84% )缺失大部分RHD基因 ,并全为中间缺失型 ;45名供者(5 9 2 1% )完整缺失RHD基因。携带完整RHD基因片段的RhD(- )个体表型均为CC或Cc,而无cc。吸收放散试验证实携带完整RHD基因的常规血清学RhD(- )个体中存在吸收放散弱D型 (Delution ,Del)。结论 :常规血清学RhD(- )中国人RHD基因存在多态性 ,提示中国汉族人RhD(- )特征有多种遗传机制 ,因此在临床医学中要正确对待不同遗传背景的常规血清学RhD(- )个体。     

新疆维吾尔族Rh血型特征

本研究探讨新疆维吾尔族Rh血型特点。采用Rh血清学分型,改良抗球蛋白实验,氯仿/三氯乙烯吸收放散实验、RH上游盒、下游盒、杂合盒、D基因10个外显子,RHDψ假基因等检测1230份维吾尔族血样本。结果表明：RhD阴性频率为5.8%,未发现Del型。对72份RhD（-）样本进一步研究发现,ccee（57.02%）和Ccee（29.82%）表型,RHD-/RHD-基因型（94.44%）及D基因外显子全缺失型（91.12%）最常见。未发现RHDψ假基因。结论：我国新疆维吾洋族Rh血型兼有黄种人与白种人Rh特点。