青春期氰戊菊酯暴露对小鼠大脑皮层性激素的影响

目的 探讨青春期氰戊菊酯暴露对小鼠大脑皮层性激素的影响及其可能的分子机制.方法 选取3周龄ICR小鼠,随机分为对照组、氰戊菊酯(7.5、30 mg/kg)处理组,每组雌雄各半.于出生后28 d(PND28)～PND56,处理组小鼠每天灌胃给予一次氰戊菊酯,对照组给予等容积玉米油.染毒2周后,每组取小鼠2只处死,取大脑皮...     

单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

目的 引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂。方法 载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1h,在电泳缓冲液中解旋30min,电泳30min,胸腺细胞核用20mg／L的EB染色5min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用。结果 紫外线和不同浓度H2O20．001、0．01、0．1、1．0mmoL／L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重。结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤。     

一例罕见P表型个体家系研究

目的 研究1例广东籍罕见P表型的血清学特点及其家系的分子遗传背景.方法 用血清学方法鉴定P表型,提取先证者及其家系成员的静脉血基因组DNA,采用PCR方法扩增.α-1,4半乳糖基转移酶[α-(1,4)galactosyltransferase,A4GALT]基因第3外显子,并对扩增产物进行直接测序分析.此外,用测序方法针对该家系中发现的变异在100名健康献血者中进行筛查.结果 先证者及其家系成员中共有5人为P表型,A4GALT基因都存在纯合的点突变c.100G>A(P.Va134Ile)及组合缺失插入突变c.418-428delllins34(P.Gln139Trpfs72);家系成员中有1人为P2表型,两条等位基因中一条为上述突变型,另一条为野生型.健康献血者中发现5名携带c.100G>A杂合突变,未发现c.418-428del11ins34突变.结论 A4GALT基因的纯合缺失插入突变导致无功能的等位基因是该家系罕见p表型的分子遗传基础.测序结果表明p表型的遗传方式为常染色体隐性遗传.     

广州地区无偿献血者人群中Jk(a-b-)表型筛选及分子遗传学研究

目的了解广州地区无偿献血者人群中,Kidd血型系统中Jk(a-b-)稀有血型个体的分布频率及分子遗传背景。方法用2 mol/L尿素溶解法,对50 000名广州血液中心无偿献血者中的Jk(a-b-)血型个体进行筛选。用传统的血型血清学方法对筛选到的Jk(a-b-)表型进行确证。随后从静脉血中提取DNA,PCR方法扩增Kidd血型系统编码基因Jk的所有编码外显子,并直接进行测序分析。结果在50 000名无偿献血者中共筛选到10名Jk(a-b-)血型个体,在广州地区无偿献血者人群中其分布频率约为0.02%。在对其中8名先证者基因分型中,共发现了2种基因型,纯合IVS5-1GA(n=6),杂合IVS5-1GA/杂合896GA(299GlyGlu)(n=2)。结论广州地区无偿献血者人群中,Jk(a-b-)的分布频率高于已报道的北方人群。高频率分布于太平洋波利尼西亚群岛的变异IVS5-1GA,也是本人群中最常见的基因变异。     

抗-CD47单克隆抗体对输血前检测试验的干扰及处理措施——附1例报告

目的探讨抗-CD47单克隆抗体对输血前检测试验的干扰及处理措施。方法收集1名接受抗-CD47单克隆抗体治疗的骨髓增生异常综合征受试者标本,进行ABO和Rh血型抗原鉴定,直接抗球蛋白试验,不规则抗体筛选和抗体鉴定试验,交叉配血试验;收集多人份O型献血者血小板制备成压积血小板,与受试者血浆进行吸收试验;收集Rh抗原分型分别为CCDee、ccDEE和ccdee的O型红细胞各1人份,分别与受试者血浆进行吸收试验;使用缺乏IgG4的抗球蛋白试剂Gamma-clone进行抗体筛选与交叉配血试验,使用Immucor Capture-R固相凝集试剂盒进行不规则抗体筛选试验。结果受试者直接抗球蛋白为阳性,游离抗体筛选和鉴定试验在所有介质中均为阳性(3+~4+);血浆与红细胞多次吸收后,抗体筛选和抗体鉴定为阴性;与多次血小板吸收后,抗体筛选和抗体鉴定仍为阳性;使用Gamma-clone抗球试剂进行不规则抗体筛选和配血试验,结果均为阴性;Immucor Capture-R固相凝集试剂盒进行不规则抗体筛选试验,结果为阴性。结论抗-CD47单克隆抗体可干扰输血前检测及交叉配血,使用缺乏检测IgG4的抗球蛋白试剂Gamma-clone和Immucor capture-R固相凝集法可较好去除抗-CD47干扰。     

肢芽细胞微团培养评价饮水中有机物致畸性

目的应用大鼠肢芽细胞微团培养技术快速评价饮用水中有机物的致畸性,并比较氯化消毒过程对致畸作用的影响。方法XAD-4树脂富集、浓缩饮用水中有机物,连续5 d微团培养d13大鼠肢芽细胞,根据半数分化抑制浓度(ID50)和半数增殖抑制浓度(IP50)及IP50/ID50比值判定有机浓集物的致畸性。结果在较低剂量范围内,管网末梢水中有机物对大鼠肢芽细胞的分化有明显的抑制作用,ID50分别为363.1 ml/ml(-S9)和5.67 ml/ml( S9);IP50分别为1355.2 ml/ml(-S9)和1264.5 ml/ml( S9),IP50/ID50=3.7(-S9);IP50/ID50=223( S9),显示该组分特异性抑制肢芽细胞的分化,经代谢转化后其ID50降低达63倍;原水中有机浓集物的ID50分别为1.17 ml/ml(-S9)和0.387 ml/ml( S9);IP50分别为15.8 ml/ml(-S9)和41.1 ml/ml( S9);IP50/ID50=13.5(-S9);IP50/ID50=106.2( S9),代谢活化增加该组分的抑制分化作用。结论管网末梢水及原水中有机浓集物属特异性细胞分化抑制物,具有潜在的直接和间接致畸性,为潜在的强致畸原,显示多种致畸机制。氯化消毒过程可能增加饮用水中有机物的间接致畸作用。     

异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激诱导的淋巴细胞损伤及基因表达影响的比较研究

目的:以H2O2诱导淋巴细胞的氧化应激模型,观察研究异常黑胆质成熟剂及清除剂对活性氧诱导的细胞损伤和Bcl-2蛋白表达的作用效应的差异。方法:用"彗星实验"(SCGE)和MTT法观察异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激的淋巴细胞DNA损伤和细胞生长活性的影响;并采用western-blot研究淋巴细胞Bcl-2蛋白的表达。结果:异常黑胆质成熟剂对氧化应激诱导的淋巴细胞DNA和细胞损伤有保护性作用,而清除剂的作用明显不同;异常黑胆质成熟剂能上调Bcl-2蛋白的表达,而清除剂能下调该蛋白的表达,二者的作用相反。结论:异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激的淋巴细胞损伤以及细胞凋亡相关基因表达的作用明显不同。     

平移计数法在微团培养技术中的应用

背景与目的： 探索一种经济、快速而又准确的计数方法,以应用于微团培养技术中集落的评价。 材料与方法： 采用5 d连续培养妊娠13 d的大鼠胚胎中脑及肢芽细胞后,以倒置显微镜视场直径为间距将微团划分为若干等间距平行区间,沿一定方向移动视场并依次计数各区间内集落数,通过摄像分析和批内重复实验评价方法的准确度及灵敏度。 结果： 各组数据经Grubbs检验法检验均为正常数据,中脑细胞集落数和肢芽细胞集落数的相对误差分别为0.776％、0.213％;批内标准差分别为0.933 9、2.883 9;批内变异系数分别为1.24％、2.05％,均小于WHO提出的OCV(3％)标准。 结论： 平移记数法无需特殊设备,不仅具有较好的准确度和极高的灵敏度,而且适用于即时分析,从而缩短实验周期,可以作为微团培养技术中集落计数的常规方法。     

疑难配血中混合抗体鉴定1例

目的探讨疑难配血过程中混合抗体的鉴定方法。方法首先鉴定红细胞血型,并对血清进行抗体筛查及鉴定,再利用特定细胞对患者血清进行吸收放散实验分离抗体,最后分别对分离后的抗体进行鉴定。结果患者血型为O型,Jka+b-,CCDee;用O型CCDee,Jkb+的细胞与患者血清进行吸收放散,分离抗体后鉴定结果为抗-cE、抗-Jkb的混合抗体。结论选择合适的细胞进行吸收放散实验分离抗体,可以实现对混合抗体的鉴定,为患者选择相应抗原阴性的血液,保证临床输血安全。