河北省汉族RhD阴性献血者RHD基因结构研究

目的 研究河北地区RhD阴性汉族献血者RHD基因外显子构成情况.方法 应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法检测100例常规血清学RhD阴性样本D基因的10个外显子.结果100例RhD阴性样本中63例D基因外显子全部缺失,20例样本D基因外显子全部存在,17例样本中D基因外显子部分存在;21例Del型中有19例RHD基因外显子全部存在.结论 河北地区RhD阴性汉族献血者中D基因存在着全部缺失、无缺失和部分缺失这3种多态性.     

不同保存条件对丙型肝炎病毒核酸稳定性的影响

目的探讨不同温度和时间条件下保存对血液中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)稳定性的影响。方法采集12名丙型肝炎患者4 ml的外周血,分装、保存在不同温度及相同温度下的不同时间,利用实时荧光定量PCR检测其不同时间点血浆HCV RNA的水平(log IU/ml),并与该血液标本的起始HCV RNA水平做比较分析。结果当血液标本中的HCV RNA起始水平≥105IU/ml时,在25℃放置6 h后转至4℃保存18 h(a)、25℃放置12 h后转至4℃保存12 h(b)及4℃放置24 h(c)等3种保存条件,24 h时内检测到血液标本的HCV RNA水平105IU/ml组分别为(5.15±0.16)、(5.15±0.15)及(5.16±0.16)IU/ml(P>0.05),107 IU/ml组分别为(7.45±0.21)、(7.44±0.23)及(7.45±0.24)IU/ml(P>0.05);当血液标本中HCV RNA起始水平在临界范围[(3.38±0.14)IU/ml]时,在条件a、b保存24 h血液标本的HCV RNA含量分别为(2.28±1.52)IU/ml、0(均为P<0.01),而条件c保存24 h血液标本的HCV RNA含量为(3.28±0.20)IU/ml(P>0.05);当血液标本中HCV RNA起始水平为103 IU/ml时,在4℃保存48 h时HCV RNA含量为(2.31±1.54)IU/ml(P<0.01)。结论当血液中HCVRNA起始浓度较低时,HCV RNA的稳定性较差,短时常温保存都会造成病毒核酸的降解。     

脐血体外同时诱导扩增T,NK和CD34+细胞

体外研究表明,人脐血含有比骨髓细胞更原始更早期的造血干细胞群。移植后所引起的GVHD发生率及程度都比骨髓及外周血要低,但其相应的GVL效应也较低,容易复发。单份脐血所含有的造血细胞量仅可以满足一定体重以下的儿童患者需求,对需移植的大部分成人患者则要进行体外扩增。脐血体外扩增后进行干细胞移植是一种新的设想和尝试,移植物中免疫细胞的组成和功能是决定干细胞移植能否成功重建造血与免疫、以及平衡GVHD和GVL的重要因素。为了研究脐血体外同时诱导扩增T、NK和CD34 细胞的可能性,本实验无菌采集健康正常足月产新生儿脐血,并分离出单个核细胞,在不同的细胞因子组合作用下用IMDM培养液培养14天。在培养0、3、7、14天时收集细胞,用FCM分析扩增前后脐血干/祖细胞及T、NK免疫细胞含量。结果表明,与无细胞因子的对照组相比,所有细胞因子SCF,IL3,IL6,IL7,IL2组合组别均能显著扩增脐血中的单个核细胞。所有细胞因子组合组别均能显著增加脐血中的CD34 细胞比例,使其含量从新鲜脐血中的1.6%升高到最高D组的11.9%。第7天时CD34 细胞平均增加10至50倍不等。新鲜脐血中CD3 T细胞平均为(18.7±4.3)%,在无细胞因子的对照组中CD3 T细胞下降明显,而在含细胞因子的组别中CD3 T有不同程度的增加,扩增最高的组别中CD3 T细胞是新鲜脐血的2倍。在新鲜脐血中含(3.6±1.9)?56 细胞。CD56 细胞数量仅在含细胞因子IL2的组别中有显著增加,其它组则无明显变化。结论:脐血中T细胞、NK细胞在一定细胞因子组合下,可与干/祖细胞同时在体外被扩增和诱导分化。     

先证者为Rh阴性汉族家系RHD基因遗传方式研究

目的分析先证者为Rh阴性家系的RHD基因结构特征，了解Rh血型的基因遗传方式，探讨RHD基因组合和Rhesus盒子（Rh盒子）检测预测新生儿溶血病的意义。方法采用PCR-SSP方法对3例汉族Rh阴性家系的19份样本进行了RHD基因10个外显子的上游Rh盒子、下游Rh盒子和融合Rh盒子检测。结果基因型为RHD-／RHD一个体检测到融合Rh盒子，无上下游Rh盒子；基因型为RHD＋／RHD＋个体检测到上下游Rh盒子，无融合Rh盒子；基因型为RHD＋／RHD-的个体可同时检测到上下游Rh盒子和融合Rh盒子。结论用PCRSSP方法进行家系RHD基因结构分析，操作简便直观。本研究证实在Rh阴性家系中存在着非表达的RHD基因，其遗传方式呈单倍型遗传，符合孟德尔遗传规律。     

人RHD基因Rhesus盒的检测及其意义

为了解人RHD基因的组合情况，进一步研究RHD基因遗传结构和预测新生儿溶血病．采用PCR—SSP方法，设计4条引物，用同一PCR反应条件同时检测人RHD基因的上游、下游和杂交的Rhesus盒。结果显示：RHD^-／RHD^-纯合子个体只检出杂交Rhesus盒，无上、下游Rhesus盒，RHD^ ／RHD^-杂合子个体能同时检出上、下游和杂交Rhesus盒，RHD^ ／RHD^ 纯合子个体只检出上、下游Rhesus盒，无杂交Rhesus盒。50例RhD阳性样本中5例(10％)为RHD^ ／RHD^-型，其余(90％)均为RHD^ ／RHD^ 型。98例无血缘关系RhD阴性汉族人样本中，54例(55．1％)为RHD^-／RHD^-纯合子，36例(36．7％)为RHD^ ／RHD^-杂合子即RHD基因单体型(可用于对RHD基因单体型进一步分析)，8例(8．2％)为RHD^ ／RHD^ 纯合子。2例弱D型样本同时检出上、下游和杂交Rhesus盒．为RHD^ ／RHD^-型。16例Dd型中10例(62．5％)同时检出上、下游和杂交Rhesus盒，为RHD^ ／RHD^-型．6例(37．5％)只检出上、下游Rhesus盒，无杂交Rhesus盒，为RHD^ ／RHD^ 型。这些样本RHD基因10个外显子的检测结果验证了本方法的正确性。结论：本方法所需引物少，操作简便，结果判断直观，适合临床应用。在RhD阴性中国汉族人中存在为数不少的RHD无效基因(非缺失型和部分缺失型占44.9％)。     

RHCE基因结构研究

目的研究中国人RHCE基因结构特征。方法根据文献设计RHCE基因检测的引物,采用PCR-SSP法检测RhD阳性100例,RhD阴性300例的RHCE基因结构。结果RHE/e和RHC/c等位基因定型结果表明,RHE/e和RHc的定型结果与血清学的一致,没有发现假阳性和假阴性。利用RHCE基因外显子1的nt48的C→G多态性检测RHC等位基因将产生6.06%的假阳性,未发现假阴性。利用109bp插入序列这一多态性来检测RHC等位基因,总的假阴性率为4.00%,没有发现假阳性。结论RHE/e和Rhc基因定型可获得准确结果,对RHC等位基因的定型必须使用2种方法或利用至少2个以上的多态性位点。     

可溶性HLA-I检测技术和贮存血中可溶性HLA-I的浓度变化观察

本研究建立可溶性人类白细胞抗原 I类 (sHLA I)检测方法 ,并探讨贮存血中sHLA I浓度变化的意义。采用ELISA双抗夹心法定量检测 6 0例正常广东人血清中sHLA I水平和 2 0例献血员成分血中sHLA I含量。结果表明 :采用本技术时 ,可溶性HLA I最低检测限为 2 .84ng ml,批内变异系数为 5 .80 % ,批间变异系数为 9.0 0 % ,回收率≥ 98 5 7% ,广东人sHLA I平均值为 (6 99.5 4± 36 0 .10 )ng ml。贮存 2 8天的RBC和随机供者血小板的sHLA I的浓度明显高于其它成分血 ,并且与成分血中残存的白细胞数和贮存时间有关。结论 :用ELISA法检测可溶性HLA I灵敏、特异、稳定 ,在临床输血过程中可考虑选择性输注含有不同浓度可溶性HLA I的成分血。     

用血细胞分析仪稀释液配制ABO反定型试剂红细胞

目的 研制用于常规ABO血型反定型的简便试剂红细胞.方法 利用Coulter STKS,CD1700和Bayer2120三种血细胞分析仪的稀释液制备5 ml/dl的试剂红细胞,4±2℃冰箱保存,每三天对红细胞的抗原、红细胞数量和质量、上清液游离血红蛋白以及细菌生长情况等进行观察,观察用三种稀释液制备5 ml/dl的试剂红细胞的有效期限.结果 用coulter STKS稀释液配制的试剂红细胞有效期可达20 d,用CD1700稀释液配制的试剂红细胞有效期可达18 d,用Bayer2120稀释液配制的试剂红细胞有效期可达15 d.在＜2 w有效期内,试剂红细胞在ABO反定型试验中敏感度高、抗原特异度强,细菌污染程度最低,可保证常规ABO血型反定型的准确度.结论 用血细胞分析仪稀释液可制备简便的ABO反定型试剂红细胞,有效期可达2 w.     

RHD等位基因37bp和RHC等位基因109bp插入序列检测

目的研究RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列是否存在多态性。方法应用PCR—SSP技术检测82例汉族RhD阳性样本,206例汉族和70例维族RhD阴性样本RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列。结果上述样本均检测不到RHD基因37bp插入序列,即无RHDψ假基因。82例汉族RhD阳性样本中有76例样本有RhC抗原,其中3例（3．95％）检测不到109bp插入片段;206例RhD阴性汉族样本中有75例样本有RhC抗原,其中4例（5-33％）检测不到109bp插入片段;70例RhD阴性维族样本中,无RhCC表型,3例RhCc样本均检测到109bp插入片段;其余204例Rhcc表型样本均未检测到109bp插入序列。结论中国人RHC等位基因109bp插入序列存在多态性,尚不能肯定中国人是否不存存RHDψ假基因。