碱性成纤维细胞生长因子转染对半月板纤维软骨细胞增殖、细胞周期及胶原合成影响的研究

目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板纤维软骨细胞分为实验组(A组)、对照组(B组)和空白组(C组),3组细胞分别以2×104个/孔接种于24孔培养板。细胞生长至60%融合时,A组与克隆有bFGF基因的重组慢病毒载体悬液共培养,B组与不携带任何基因的慢病毒悬液共培养,C组未接受外加处理。共培养48 h后检测3组的细胞周期、胶原合成能力、培养液中bFGF的表达及不同时间各组细胞的细胞增殖能力的变化。结果共培养48 h后在A组测出bFGF浓度为870±60 pg/m l,而B、C组培养液中未能检测出bFGF的表达;共培养6 d后,M TT法检测,A组吸光度(A)值0.427±0.037与B组0.320±0.042和C组0.308±0.034比较差异有统计学意义(P<0.01)。A组细胞周期较B、C组缩短,A组细胞G1期,S期和G2/M期的时间分别为16.28、12.60和11.04 h;而B、C组分别为23.61、16.90和21.33 h及21.56、19.80和21.41 h;A组与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组细胞每分衰变数(7 281.69±805.50)高于B组(5 916.40±698.11)和C组(5 883.57±922.63),比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论借助慢病毒载体能有效实现bFGF基因在半月板纤维软骨细胞的转染;bFGF基因转染能促进半月板纤维软骨细胞的增殖和胶原合成能力。     

血小板源性生长因子对体外兔关节软骨细胞的生物学行为的影响

目的　了解血小板源性生长因子 (PDGF)对体外生长的兔关节软骨细胞的生物学效应 ,为组织工程构件软骨提供理论基础。方法　取第 3代兔关节软骨细胞体外单层培养 ,培养液DMEM中以终浓度分别为 3、 10、 30、 10 0、 30 0 μg .L 1的PDGF各作用细胞 2 ,4及 6d ,以MTT法检测细胞的增殖情况 ,并在 3μg .L 1PDGF作用下 ,采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析。同时 ,检测基质中糖醛酸的变化反映蛋白多糖含量的变化。结果　结果显示在较低浓度 (3μg .L 1)PDGF即能明显促进培养软骨细胞的增殖 ,且以第 2d刺激效果最明显 ;增加因子浓度不能进一步促进细胞增殖。在 3～ 30 0 μg .L 1浓度下糖醛酸的含量变化不显著。结论　PDGF对培养软骨细胞以剂量时间依赖性方式刺激其增殖但对细胞的分泌功能代谢无明显影响     

碱性成纤维细胞生长因子及相关细胞因子转染对兔骨关节炎的作用

目的 观察重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独及联合白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)和胰岛素样生长因子(IGF)-1基因转染对兔膝骨关节炎(OA)模型的治疗效果.方法 前交叉韧带切断法将新西兰兔膝关节制成OA模型.分别向膝关节内注射单独bFGF或多重组合的重组腺病毒载体各1×108 PFU.3周后关节液分析目的 基因表达和糖胺聚糖(GAG)浓度.关节标本行Mankin评分及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测.结果 基因转染后,在关节液中可检测到相应目的基因的表达.OA组软骨损伤较大,Mankin评分为(8.60±1.14),关节液中GAG为(69.96±8.32)mg/L.与OA组相比,单独bFGF转染后软骨Mankin评分降低(P＜0.05),为(6.00±0.71);bFGF与IL-1Ra和IGF-1联合转染后,Mankin评分进一步降低(P＜0.05),为(3.80±0.84).单独bFGF转染后对GAG释放无明显抑制作用,联合基因转染可显著抑制基质降解,减少GAG的释放.结论 bFGF单独转染可对OA发挥一定的治疗作用.bFGF、IL-1Ra和IGF-1联合转染可有效改善OA病程,其疗效优于bFGF单独转染,提示多基因联合转染治疗OA更为有效.     

基于永生化软骨细胞和骨髓基质干细胞的工程化软骨形成的实验研究

目的 :探讨hTERT转染的永生化软骨细胞和骨髓基质干细胞 (MSCs)裸鼠体内形成软骨的能力。方法 :通过真核表达载体 ,把人端粒酶逆转录酶基因转入兔髁状突软骨细胞 ,筛选并挑选阳性克隆进行扩增培养 ;取兔骨髓 ,密度梯度离心和培养 ,经诱导、扩增后与支架材料 β 磷酸三钙 (β TCP)复合 ,构建细胞 β TCP复合体 ,体外培育 1～ 2d后 ,植入裸鼠体内。通过粘多糖 (GAG)含量和Ⅱ型胶原的表达来检测 3和 6个月复合体软骨形成情况。结果 :两种细胞和 β TCP复合体在裸鼠体内均能形成软骨样组织 ;6个月 ,工程化软骨GAG含量和Ⅱ型胶原的表达均低于正常软骨组织 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :hTERT转染的永生化软骨细胞和骨髓基质干细胞均具有良好的软骨形成能力 ,在软骨组织工程修复软骨缺损方面具有重要的应用前景。     

重组PcDNA3-hBMP3转染兔关节软骨细胞和对其增殖的影响

目的研究将人骨形成蛋白３（ＢＭＰ３）的ｃＤＮＡ构建于真核,表达载体ＰｃＤＮＡ３,形成重组ＤＮＡ ＰｃＤＮＡ３－ｈＢＭＰ３,转染兔关节软骨细胞,以探讨基因转染对关节软骨细胞增殖的影响。方法利用重组ＤＮＡ和基因克隆技术构建重组ＤＮＡ;用细胞培养和基因转染技术体外转染兔关节软骨细胞;用核酸杂交和蛋白电泳检测细胞ＢＭＰ３的表达,最后通过ＦＣＭ、ＤＮＡ和葡糖醛酸含量检测以及Ⅱ型胶原探针原位杂交分析其对增殖的影响。结果软骨细胞６次传代后,Ⅱ型胶原原位杂交的灰度值降低,同样条件下转染的软骨细胞仍保持较高水平Ⅱ型胶原的表达;转染的软骨细胞经流式细胞仪的分析,软骨细胞Ｓ期细胞比例增多,说明细胞ＤＮＡ的合成增加;经ＤＮＡ和葡糖醛酸含量测定,转染的软骨细胞ＤＮＡ和葡糖醛酸含量较转染前有明显提高。结论ｈＢＭＰ３对维持软骨细胞的表型具有十分重要的作用,在脂质体的介导下,ＤＮＡ ＰｃＤＮＡ３－ｈＢＭＰ３转染兔关节软骨细胞获得成功。     

一氧化氮合酶抑制剂对炎性刺激下软骨细胞增殖和基质代谢的影响

目的　用白细胞介素 1β(IL 1β)和脂多糖 (LPS)模拟软骨细胞和软骨的炎性环境 ,探讨一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂对软骨细胞增殖和基质代谢的影响。方法　实验共分 5组 :对照组、IL 1β和LPS刺激组、IL 1β和LPS +S 甲基异硫脲 (SMT)组、IL 1β和LPS +L NIL组、IL 1β和LPS +L NMA组。清洗干净的软骨块和传至第二代的软骨细胞依次加入上述药物。采用MTT法和BrdU掺入法分别检测软骨细胞和软骨的增殖活性 ;化学比色法检测NO释放量、NOS活性 ;3 5S掺入法检测蛋白多糖合成率。结果　①外源性IL 1β和LPS可增加软骨细胞和软骨NO释放 [(2 0 4 5± 14 )μmol/L ,(2 0 9 8± 18) μmol/L],诱导iNOSmRNA表达 ,增加NOS活性 [(2 0 1 7± 17)U/ml,(2 98 7±2 0 )U/ml) ],抑制软骨蛋白多糖合成和软骨细胞增殖 (P <0 0 5 ) ;②不同浓度NOS抑制剂均能减少NO释放和降低NOS活性 ,并与药物剂量正相关 ;③ 1mmol/L的NOS抑制剂可显著逆转软骨细胞和软骨蛋白多糖合成抑制 (P <0 0 5 ) ,增加软骨细胞增殖活性。结论　NOS抑制剂能有效抑制炎性因子 (IL 1β和LPS)诱发的软骨代谢改变 ,对关节软骨损害具有潜在的保护作用。     

重组PcDNA3—hBMP3转染兔关节软骨细胞和对其增殖的影响

目的 研究将人骨形成蛋白３（ＢＭＰ３）的ＣＤＮＡ构建于真核，表达载体ＰＣＤＮＡ３，形成重组ＤＮＡＰｃＤＮＡ３－ｈＢＭＰ３，转染兔关节软骨细胞，以探讨基因转染对关节软骨细胞增殖的影响。方法 利用重组ＤＮＡ和基因克隆技术构建重组ＤＮＡ；用细胞培养和基因转染技术体外转染兔关节软骨细胞；用核酸杂交和蛋白电泳检测细胞ＢＭＰ３的表达，最后通过ＦＣ几葡糖醛酸含量检测以及Ⅱ型胶原探针原位杂交分析其对增殖的影响。结     

外源性人胰岛素样生长因子-1基因在关节软骨细胞中的表达

目的探讨含有绿色荧光蛋白(GFP)的外源性人胰岛素样生长因子(hIGF)-1基因真核表达载体在关节软骨细胞内稳定表达的可行性，建立IGF-1基因工程化的关节软骨细胞。方法利用基因重组技术，将GFPcDNA片段插入pcDNA3．1-hIGF-1载体中，构建重组载体pcGI。然后采用脂质体方法，转染原代关节软骨细胞，经G418筛选后，继续体外单层培养4周。原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF-1的表达，荧光显微镜观察GFP的表达，Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测软骨细胞表型，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测软骨细胞增殖能力。结果根据重组载体pcGI内的酶切位点，设计采用BamHI酶切显示为线性化，XbaI酶切显示为512bp、1768bp、5915bD三个片段，HindⅢ则酶切下3023bp、5172bp二个片段，证明所构建的质粒方向及大小正确，含有GFP和hIGF-1cDNA片段。稳定转染pcGI的软骨细胞原位杂交、免疫细胞化学和荧光显微镜证实了hIGF-1和GFP的表达，同时MTT显示转染后的软骨细胞增殖能力增强，并能维持Ⅱ型胶原的表达。结论外源性hIGF-1和GFP基因在关节软骨细胞内获得稳定表达，体外单层培养的转染关节软骨细胞增殖能力增强，同时维持软骨细胞表型。     

人转化生长因子β1及骨形成蛋白7基因共表达载体的构建及对骨髓基质干细胞的定向诱导作用

目的 构建人转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)及骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)基因共表达腺病毒真核表达载体,并观察感染骨髓基质干细胞(marrow stromal stem cells,MSCs)后目的 基因的表达和对细胞生物学行为的影响.方法 以复制缺陷的腺病毒AdEasy为基因载体,制备携带TGF-β1及BMP 7基因的高滴度腺病毒液感染人MSCs,通过免疫细胞化学、原位杂交、RT-PCR及己糖醛酸水平检测等方法鉴定外源基因的表达,分析外源性基因共表达对MSCs定向软骨分化的调控机制. 结果 腺病毒感染72 h后,TGF-β1和BMP 7免疫细胞化学染色可见大部份MSCs胞浆内均出现棕黄色粗颗粒,通过原位杂交检测出Ⅱ型胶原蛋白基因mRNA,感染10 d后细胞培养液中己糖醛酸含量为68.03±3.34μg/ml与感染前的53.20±3.70μg/ml明显升高有统计学意义(P＜0.01).结论 成功构建了人TGF-β1及BMP-7共表达基因腺病毒表达载体,证实其在MSCs中的表达和具有向软骨细胞定向分化的诱导作用,为软骨缺损修复的局部基因治疗奠定实验基础.     

腺病毒介导TGF-β1及BMP-7基因共表达感染骨髓基质干细胞修复兔关节软骨缺损

目的探讨腺病毒介导转化生长因子β1(TGF-β1)及骨形成蛋白7(BMP-7)基因共表达感染对骨髓基质干细胞(MSCs)增殖和定向分化的影响,观察其构建组织工程化软骨对关节软骨缺损的修复质量和疗效。方法以腺病毒AdEasy为基因转移载体,制备携带TGF-β1和BMP-7基因的高滴度腺病毒感染兔MSCs,利用外源性基因编码的生长因子诱导其表达软骨细胞表型,通过免疫细胞化学、原位杂交、RT-PCR及己糖醛酸水平检测等方法鉴定。再将其与骨基质明胶(BMG)支架相复合体外构建组织工程化软骨,移植修复同种异体兔关节软骨缺损并进行形态学和组织学观察及修复结果分析。结果腺病毒感染MSCs后免疫细胞化学染色和RT-PCR可检测出外源基因及其编码蛋白的表达,通过原位杂交可检测出Ⅱ型胶原蛋白基因表达,细胞培养液中己糖醛酸水平明显升高。将其复合于骨基质明胶上,经组织染色和电镜观察可见前体软骨细胞贴附于BMG表面和孔隙内大量增殖,在体移植修复实验组新生组织为类透明软骨,修复效果明显优于各对照组。结论MSCs经携带TGF-β1和BMP-7基因的腺病毒感染后,体外能向软骨细胞作定向分化,可用于制备组织工程化软骨,使提高关节软骨缺损的修复质量成为可能。     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

Frequency of complications of manipulation of the spine

Summary A survey of all members of the Swiss Medical Association of Manual Medicine was undertaken for the year 1989. Informative data were given by 425 respondents on the frequency of complications of manipulation as related to the spine. The number of thoraco-lumbar manipulations during 1989 (225 working days) was 805 for each respondent, and the number manipulations of the cervical spine 354. Thus, the total number of thoraco-lumbar manipulations was 342 125, and the total number of cervical manipulations was 150 450. The overall incidence of side-effects of transient complications due to cervical spine manipulation such as disturbance of consciousness or radicular signs was 1: 16716. Seventeen patients (ratio 1: 20 125) after manipulation of the lumbar spine presented, in addition to increased pain, a transient sensorimotor deficit with precise radicular distribution. Nine of the 17 patients (ratio 1: 38013) developed a progressive radicular syndrome with sensorimotor defict and radiologically verified disc herniation and had to be referred for surgery. Side effects and complications of cervical and lumbar spine manipulation are rare. Taking in to account the yearly number of manipulations performed by a single physician in Switzerland and the rate of complications, it can be calculated that a physician practicing manual medicine will encoutner one complication due to manipulation of the cervical spine in 47 years and one complication due to lumbar spine manipulation in 38 years of practice. However, it is important that a careful clinical assessment is carried out to avoid complications due to manipulation carried out on the basis of inappropriate indications. Furthermore, the decision as to which technique is indicated for any particular functional disorder of the spine should be made on the basis of rational criteria resting on a knowledge of clinical biomechanics, functional anatomy and neurophysiology. The authors recommend a prospective morbidity study to be carried out among physicians, chiropractors, osteopaths and physiotherapists, taking into account the different indications and therapeutic techniques in relation to complications.     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7–, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20–, MUC2–). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

静脉皮瓣成活过程的实验研究

我们以兔为实验动物，通过微循环观察及血管内灌注填充剂，研究静脉皮瓣的成活过程。这一过程可分为２个阶段。第一阶段（术后７２小时内）为静脉血营养期：静脉血由静脉干通过小静脉吻合支、微静脉干间吻合支及终末微静脉吻合支回流至另一静脉。术后４８小时内毛细血管内无血液运动。第二阶段（术后７２小时～６周）为动脉血营养及血管改造期：术后７２小时新生血管开始向皮瓣内生长。术后７２无皮瓣动脉同主要来自皮瓣周围正常组织内的新生血管吻合使动脉血分布于整个皮瓣，这是静脉皮瓣成活的关键     

Management of sequelae of septic arthritis of hip

A nine years old boy, who had suffered septic arthritis at the age of two years and presented now with a limp, hip instability, leg length discrepancy. The patient was treated by adductor tenotomy and upper tibial pin traction. When head remnant reached the level of the acetabulum, open reduction and Pemberton osteotomy was done to achieve cover of the femoral head. The purpose of this report is to highlight the six years followup of reconstruction of sequale of septic arthritis of hip joint.     

Catamnestic study of childless patients of the Department of Andrology of Hamburg-Eppendorf University Hosptal

By means of a questionnaire, we carried out a catamnestic study of 1419 patients with a complaint of infertility. 27 per cent of the replying patients reported about the birth of children. 343 patients (38%) reported about one or more conceptions. Compared with previous studies, this investigation shows better results of therapies. We interprete this to be caused in better possibilities of therapy, esp. the Kallikrein therapy.     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。     

骨盆骨折的治疗进展

对于骨盆骨折的治疗 ,传统方法以卧硬板床 ,股骨髁上持续骨牵引 ,骨盆兜等保守治疗为主 ,常常引起下肢不等长 ,骶髋痛 ,步态失常等而严重影响生活质量 ,同时长期卧床易引发肺部感染、褥疮、应激性溃疡、泌尿系统结石等并发症而危及生命。下面就骨盆骨折的治疗进展作一综述。1     

Oddi括约肌肌电活动实验模型的建立

目的建立研究Oddi括约肌肌电活动的动物模型和实验方法。方法将双极金属钩状电极通过浆膜层置入Oddi括约肌，记录不同条件干预下家兔的Oddi括约肌肌电活动信号，调整电生理实验参数并经放大、滤波及计算机处理后，对其大小、波形、幅度进行分析。结果不同条件干预下的家兔Oddi括约肌的肌电活动在波形、频率、幅度等方面均有明显的不同，具有明显的规律性。重复实验可得到相似的结果。结论使用双极金属钩状电极配以合理的电生理实验参数调整可以稳定地采集到在体的家兔Oddi括约肌肌电活动信号。这为今后广泛、深入地研究Oddi括约肌肌电活动搭建了一个技术平台。