低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞表型转化的影响

目的通过低密度脂蛋白(LDL)的刺激,观察LDL对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的诱导作用。方法采用不同浓度的LDL(0,25,50,100,150μg/ml)刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的水平,以台盼蓝染色检测LDL对系膜细胞的毒性作用,MTT比色法检测细胞增殖,透射电镜观察系膜细胞的形态学变化,免疫细胞化学染色及Western blot检测α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果在LDL作用下,倒置显微镜下细胞变为长梭形,透射电镜下细胞表面微绒毛减少。免疫细胞化学染色及Western blot显示α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN表达增强。结论在LDL刺激下,系膜细胞可以发生表型转化。     

姜黄素及OX-LDL对系膜细胞凋亡及FAP-1和bag-1表达的影响

目的：观察姜黄素和氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）对大鼠系膜细胞凋亡的作用及其对FAP-1和bag-1表达的影响。方法：采用不同浓度姜黄素和OX-LDL处理体外培养的大鼠系膜细胞后,通过流式细胞仪测系膜细胞凋亡,并采用Western-Bloting检测FAP-1和bag-1表达。结果：OX-LDL能刺激系膜细胞增殖并轻度诱导其凋亡,而姜黄素则显著促进大鼠系膜细胞凋亡,抑制OX-LDL的促增殖作用;OX-LDL对FAP-1表达有轻度诱导作用,而姜黄素显著诱导FAP-1和bag-1表达。结论：姜黄素能显著诱导系膜细胞FAP-1和bag-1表达,通过促进细胞凋亡途径抑制OX-LDL促进系膜细胞增殖作用。     

槲皮素对系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的观察槲皮素对系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响。方法用MTT法检测细胞增殖．流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，ELISA法测量纤雏连接蛋白（FN），Ⅳ型胶原（ColⅣ）在培养上清中的含量。结果在5-20μmol／L浓度范围内槲皮素能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0—G1期细胞增多，S期细胞减少，而较高浓度的槲皮素能剂量依赖性诱导系膜细胞的凋亡。同时槲皮素能减少系膜细胞在AngⅡ诱导下的FN和Col-Ⅳ的分泌。结论槲皮素可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0-G1期；并且高浓度槲皮素有诱导系膜细胞凋亡的作用，并能减少系膜细胞在AngⅡ诱导下的细胞外基质的分泌。     

极低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞增殖及分泌纤连蛋白的作用

目的　观察极低密度脂蛋白 (VLDL)对大鼠系膜细胞分泌纤连蛋白 (FN)及系膜细胞增殖的作用 ,探讨VLDL对系膜细胞的毒性作用。　方法　ELISA法测定细胞上清液FN的分泌 ;采用还原四氮唑盐复合物(XTT)检测系膜细胞增殖情况。　结果　 (1)不同浓度VLDL(10～ 5 0 0 μg/mL)、不同时间 (6～ 4 8h)与XTT光密度值 (D)呈线性关系 [r分别为 0 911(P <0 0 1) ,0 6 5 1(P <0 0 5 ) ]。当VLDL浓度达 10 0 0 μg/mL时 ,D下降。(2 )在VLDL浓度在 5 0 0 μg/mL左右时 ,随着刺激时间以及浓度的升高 ,VLDL大致可以依时间、浓度依赖关系促进系膜细胞FN分泌。　结论　VLDL可以促进系膜细胞分泌FN以及细胞增殖 ,提示其具有肾脏毒性作用。     

高糖诱导的MAPK激活对人肾小球系膜细胞的影响

目的：探讨高精对人肾小球系膜细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响及MAPK在人肾小球系膜细胞的纤维结合蛋白(FN)分泌和c-fos表达中的作用。方法：采用人肾小球系膜细胞进行体外培养，高精作为刺激因素，PD98059作为MAPK特异性抑制剂．同位素示踪法测定MAPK活性．ELISA法测定培养上清中FN含量，免疫细胞化学方法检测c-fos的表达．结果：高糖可增加MAPK活性、促进FN分泌、增加c-fos的表达、抑制MAPK后，可阻止高糖诱导的FN分泌以及c-fos表达：结论：高糖可激活人肾小球系膜细胞内的MAPK，促进FN的分泌，c-fos的表达及导致糖尿病肾病的发生。     

肾舒胶囊对人系膜细胞增殖及分泌肿瘤坏死因子-α和纤连蛋白的影响

目的 :研究肾舒胶囊对人系膜细胞 (HMC)增殖及分泌肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)和纤连蛋白 (FN)的影响。方法 :采用血清药理学方法 ,将肾舒胶囊含药血清加入培养的HMC中 ,MTT法测定HMC增殖情况 ,ELISA法测定HMC分泌TNF -α及FN情况。结果 :肾舒胶囊含药血清可明显抑制HMC增殖及其分泌TNF -α和FN ,且其抑制作用呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。结论 :肾舒胶囊可能通过抑制MC增殖及其分泌TNF -α等炎症介质和FN等细胞外基质 (ECM)防治肾小球硬化     

辛伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞增殖和促基质蛋白分泌的影响

目的：观察他汀类药物辛伐他汀和血管紧张素转换酶抑制剂西拉普利对体外培养系膜细胞增殖和基质蛋白分泌的影响。方法：体外培养人胎肾小球系膜细胞，给予高糖，辛伐他汀，西拉普利干预，观察不同刺激时间，不同刺激浓度及单用和联合用药对系膜细胞增殖以及细胞上清液中转化生长因子－β1（TGF－β1）、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原浓度的影响。结果：高糖环境能够促进体外培养系膜细胞的增殖，增加细胞上清液中TGF－β1，纤维连接蛋白，层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量，单用或联用辛伐他汀和西拉普利均可抑制高糖的上述作用，而且联合用药作用更强，结论：辛伐他汀和西拉普利均可抑制高糖刺激对系膜细胞促增殖和促基质蛋白分泌的作用，二者联用的作用更强。     

单核细胞趋化蛋白-1对系膜细胞增殖及纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原基因表达的影响

目的 观察单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对体外培养的大鼠系膜细胞增殖及纤维连接蛋白（FN）和Ⅰ型胶原（COLI）基因表达的影响。方法 采用不同浓度的MCP-1刺激体外培养的系膜细胞,于不同的时间应用MTT法测定系膜细胞增殖活性,半定量RT-PCR的方法测定细胞FN和COLⅠ mRNA的相对表达量。结果 随着MCP-1浓度的增高,刺激时间的延长,MCP-1明显促进系膜细胞的增殖、上调细胞FN和COLⅠ mRNA的表达（P〈0．01）,表现为剂量和时间依赖性。结论 MCP-1能促进大鼠系膜细胞的增殖及上调细胞FN和COLⅠ mRNA的表达。MCP1可能在系膜增生性。肾小球肾炎的发病过程中起一定的作用。     

低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素的影响

目的探讨低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素(ADM)的影响.方法利用培养的内皮细胞株ECV-304细胞,分别与不同浓度的低密度(50 100mg/L)、氧化低密度脂蛋白(50 100mg/L)及低密度脂蛋白(50 mg/L) 氧化低密度脂蛋白(50 mg/L)进行孵育,24 h后分别收集培养上清及细胞,用放免分析检测上清及细胞内肾上腺髓质素的含量.结果低密度脂蛋白对肾上腺髓质素的分泌无影响,而氧化型低密度脂蛋白能明显刺激ADM的分泌,二者合用的作用接近于100mg/L的OX-LDL.结论OX-LDL可能具有氧化LDL使其成为OX-LDL的作用,ADM的分泌可能是对细胞损伤的一种反应.     

蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组(LPS5mg/L)和蟾蜍灵干预组(LPS5mg/L和蟾蜍灵1×10-8mol/L),应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,通过MTT、流式细胞技术检测GMC增殖变化,RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA的表达,ELISA法检测GMC培养上清中纤维连接蛋白(FN)及TGF-β1的表达.结果:MTT结果显示蟾蜍灵浓度在1×10-8mol/L及以上时呈剂量依赖性抑制GMC增殖(P<0.01).细胞周期分析显示蟾蜍灵组S期细胞比例较脂多糖组降低(P<0.01).蟾蜍灵干预组与脂多糖组相比TGF-β1的mRNA相对表达量减少(P<0.05),FN,TGF-β1蛋白分泌量减少(P<0.01).结论:蟾蜍灵对LPS作用后肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌具有抑制作用.     

益肾化浊注射液对高糖培养肾小球系膜细胞表达FN及PAI-1 mRNA的影响

观察高糖对体外培养肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋自 (FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI 1)mRNA以及细胞增殖、分泌FN的影响 ,同时观察益肾化浊注射液对高糖引起上述各指标变化的影响。采用体外培养肾小球系膜细胞方法 ,用高糖及益肾化浊注射液作为刺激物 ,四甲基偶氮唑盐微量酶比色法 (MTT)检测细胞增殖 ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定细胞上清FN含量 ,Northem杂交检测FN、PAI 1mRNA表达水平。结果表明 ,高糖可促进分泌FN ,上调PAI 1mRNA的表达 ,明显抑制系膜细胞的增殖 ;而益肾化浊注射液可缓解高糖所引起的上述指标的改变 ,并可下调FNmRNA的表达。     

高糖对大鼠GMC表面β1整合素表达和ECM分泌的影响

目的观察高糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表面β1整合素表达和细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法应用不同浓度的葡萄糖刺激培养GMC,采用MTT法检测细胞增殖,RT PCR法检测GMC表面β1整合素的表达,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、层粘蛋白(LM)的分泌情况.结果高糖抑制GMC的增殖,促进β1整合素的表达,且与FN和LM的分泌呈显著正相关,并具有浓度依赖性.结论高血糖作为糖尿病肾病的启动因素可能是通过上调β1整合素mRNA的表达,从而促进ECM成分FN和LM的合成分泌.     

高糖对大鼠GMC表面β1整合素表达和ECM分泌的影响

目的 观察高糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表面β1整合素表达和细胞外基质(ECM)分泌的影响。方法 应用不同浓度的葡萄糖刺激培养GMC，采用MTT法检测细胞增殖，RT-PCR法检测GMC表面β1整合素的表达，ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、层粘蛋白(LM)的分泌情况。结果 高糖抑制GMC的增殖，促进β1整合素的表达，且与FN和LM的分泌呈显著正相关，并具有浓度依赖性。结论 高血糖作为糖尿病肾病的启动因素可能是通过上调β1整合素mRNA的表达，从而促进ECM成分FN和LM的合成分泌。     

低密度脂蛋白诱导大鼠系膜细胞增殖与COX-2表达的关系

目的观察LDL刺激下大鼠系膜细胞的增殖情况和COX-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。探讨COX-2表达和LDL、系膜细胞增殖之问的关系。方法以体外培养的大鼠系膜细胞为研究对象。应用不同浓度的LDL刺激系膜细胞。应用MTT法检测细胞增殖；应用KT-PCK和Westem Blot的方法检测COX-2 mKNA和蛋白的表达。分析COX-2 mRNA和蛋白的表达与LDL浓度、系膜细胞增殖的相关性。结果以浓度为3．125-100．000μg／mL的LDL刺激系膜细胞，可促进系膜细胞的增殖，在LDL 0．000-50．000μg／mL的浓度范围内，系膜细胞的增殖和LDL的浓度呈正相关；以浓度为3．125-100．000μg／mL的LDL刺激系膜细胞，可上调COX-2 mRNA和蛋白的表达。在LDL0．000-50.000μg／mL的范围内，COX-2 mRNA和蛋白的表达与LDL浓度、系膜细胞增殖呈正相关。结论LDL可以诱导系膜细胞增殖，上调COX-2表达，在LDL 0．000-50．000μg／mL的范围内，系膜细胞增殖与LDL浓度具有相关性，COX-2的表达与LDL浓度、系膜细胞增殖具有相关性。     

姜黄素对肾小球系膜细胞增殖的影响及其意义

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响。方法:采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞活性(A值),并与地塞米松进行比较。结果:当姜黄素浓度≥6.25μmol/L时,系膜细胞增殖明显受到抑制,且表现为浓度依赖性;当姜黄素浓度≥50 μmol/L时,姜黄素抑制系膜细胞增殖的作用明显强于地塞米松(P<0.05)。结论:姜黄素能抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖,且作用强于地塞米松。     

肾舒胶囊对人系膜细胞增殖及分泌肿瘤坏死因子—a和纤连蛋白的影响

目的：研究肾舒胶绕对人系膜细胞(HMC)增殖及分泌肿瘤坏死因子—a(TMF—a)和纤连蛋白(TN)的影响。方法：采用血清药理学方法，将肾舒胶囊含药血清加入培养的IDMC中，MTT法测定HMC增殖情况，ELLSA法测定HMC分泌TNF-a及FN情况。结果：肾舒胶囊含药血清可明显抑制HMC增殖及其分泌TNF-a和FN，且其抑制作用呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。结论：肾舒胶囊可能通过抑制MC增殖及其分泌TNF-a等炎症介质和FN等细胞外基质(ECM)防治肾小球硬化。     

LEF 对肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的: 探讨来氟米特对转化生长因子－β1刺激的大鼠肾小球系膜细胞( GMCs) 增殖及细胞外基质
( ECM) 分泌的影响。方法: 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分正常对照组,TGF－β1( 5 ng /mL) 刺激组,TGF－β1 +
LEF( LEF 浓度分别为5μmol /L、25μmol /L、50μmol /L、100μmol /L) 组,培养24h、48h 和72h 后,MTT 法观察各组
肾小球系膜细胞在不同时间点的增殖情况; ELISA 法测定各组培养细胞上清液中纤连蛋白的含量。结果: ( 1) 与
对照组相比,TGF－β1可刺激系膜细胞增殖,不同浓度的LEF 均可以抑制TGF－β1刺激的系膜细胞增殖( P＜0．05) ,48h 后抑制作
用稳定。( 2) TGF－β1刺激组细胞上清液中纤连蛋白含量明显高于对照组( P＜0．05) ,不同浓度的LEF 组纤连蛋白含量明显低于TGF－β1
组( P＜0．05) 。结论: 来氟米特可以抑制TGF－β1刺激的肾小球系膜细胞的增殖,减少细胞外基质的分泌,为其治疗慢性肾脏病提供理论依据。     

益气化瘀法对大鼠系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的:观察益气化瘀法对大鼠系膜细胞(GMCs)增殖及细胞外基质分泌的影响.方法:用MTT法检测细胞增生,ELISA法检测转化生长因子β-1(TGF-β1)和细胞外基质Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN).结果:黄芪组、水蛭组和黄芪 水蛭组均可降低血清TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的含量;其中以黄芪 水蛭组最明显,水蛭组次之,均强于黄芪组.结论:益气化瘀法可以抑制系膜细胞增殖及细胞外基质分泌.     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

α-硫辛酸抑制高糖诱导的系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1的表达

目的:探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法:体外条件下采用正常糖浓度(5.6 mmol/L,NG)、高糖浓度(25 mmol/L,HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸(50、100、200、300 μmol/L)分别与大鼠系膜细胞共同培养不同时间(12、24、48 h).MTT法测定系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA的表达;ELISA法测定细胞培养上清ICAM-1蛋白的浓度. 结果:50～300 μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖.高糖刺激24 h时, 200 μmol/L的α-硫辛酸干预组ICAM-1的蛋白浓度[(288.4±23.4) ng/ml]明显低于HG组[(542.3±35.6) ng/ml,P<0.01].100 μmol/L及200 μmol/L的α-硫辛酸均可下调高糖诱导的ICAM-1 mRNA的表达.结论:一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低ICAM-1蛋白和mRNA的表达.