温胆汤对精神分裂症模型大鼠海马组织PI3K，Akt和GSK3β的影响

目的:研究温胆汤对精神分裂症模型鼠海马组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组和模型组灌胃生理盐水,氯氮平组灌胃氯氮平原药20 mg·kg~(-1);温胆汤高、中、低剂量组分别灌胃温胆汤生药40,20,10 g·kg~(-1); 1次/d,共21 d。在最后1次给药2 h后,除正常组外,其余各组采用一次性左侧腹腔注射MK8010. 6 mg·kg~(-1),以诱发精神分裂症。观察并记录大鼠的刻板行为,3 d后,处死并取其海马组织待测。依照Sams Dodd和Hoffman标准对大鼠的刻板行为评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定海马组织PI3K,Akt和GSK3β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马组织PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠刻板行为评分显著升高(P 0. 01),海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平显著下降(P 0. 01)。与模型组比较,温胆汤给药组能明显降低大鼠刻板行为评分(P 0. 05),升高海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:温胆汤通过改善精神分裂症模型鼠刻板行为、升高其海马组织PI3K,Akt,GSK3β的表达,调控PI3K/Akt/GSK3信号通路,从而达到治疗精神分裂症的目的。     

糖肾平胶囊通过PI3K/Akt信号通路干预高糖+LPS诱导足细胞凋亡的机制

目的:观察糖肾平对高糖环境下脂多糖(LPS)对足细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:利用雄性Wistar大鼠,分别用糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg-1),厄贝沙坦(17. 5 mg·kg-1)灌胃给药,制备相应药物血清。采用高糖,LPS体外刺激大鼠足细胞建立模型。并分为正常组(5%正常大鼠血清),高糖组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖),高糖+LPS组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),厄贝沙坦组(5%厄贝沙坦组大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS1 mg·L-1),糖肾平小剂量组(5%糖肾平小剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),中剂量组(5%糖肾平中剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),大剂量组(5%糖肾平大剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1)。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP),nephrin和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路中关键因子的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,高糖组和高糖+LPS组足细胞nephrin,CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显减少(P 0. 05,P 0. 01); B淋巴细胞瘤-2相关凋亡蛋白(Bad蛋白)及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01)。与高糖+LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); nephrin mRNA表达增加; Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少。糖肾平各组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少(P 0. 05,P 0. 01)。结论:糖肾平维持足细胞裂孔隔膜蛋白稳定表达,保护肾小球滤过屏障,同时进一步激活PI3K/Akt信号通路,抑制足细胞凋亡;是其多靶点防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

加减薯蓣丸通过Akt/GSK3β/Nrf2通路改善APP/PS1小鼠神经元凋亡

目的:探讨加减薯蓣丸对APP/PS1模型小鼠神经保护的效应和作用机制。方法:5月龄雄性APP/PS1小鼠20只和野生型小鼠10只,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组(14 g·kg-1·d-1),灌胃28 d,空白组、模型组给予等体积生理盐水;APP/PS1背景和野生型背景原代神经元,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组、衣霉素组和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)抑制剂组,空白组、模型组给予10%空白血清,加减薯蓣丸组给予5%加减薯蓣丸含药血清干预,衣霉素组和PI3K/Akt抑制剂组分别在加减薯蓣丸基础上加用2 mg·L-1的衣霉素和10μmol·L-1的LY294002。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达; Western blot检测内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78(GRP78),蛋白激酶样内质网激酶(PERK),磷酸化(p-) PERK,凋亡通路蛋白真核生物的翻译起始因子2的α亚基(e IF2α),p-eIF2α,增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和p-Akt,Akt,糖原激酶3β(GSK3β),Nrf2蛋白表达。结果:体内实验中,与空白组比较,模型组APP/PS1小鼠学习记忆能力显著下降(P 0. 01),海马Nrf2表达显著下调(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸干预4周后,加减薯蓣丸组APP/PS1小鼠学习记忆能力明显提升,海马Nrf2表达水平显著增加(P 0. 01)。体外实验中,与空白组比较,模型组GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清明显降低GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01);而衣霉素抑制加减薯蓣丸对内质网应激诱导凋亡的保护效应(P 0. 05);与空白组比较,模型组p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著下降,GSK-3β表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清干预后p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著增加,GSK-3β表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01); LY294002抑制加减薯蓣丸对p-Akt/Akt,Nrf2和GSK3β蛋白表达的影响(P 0. 05,P 0. 01)。结论:加减薯蓣丸通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路上调Nrf2蛋白表达,减轻内质网应激诱导的神经元凋亡,改善APP/PS1模型小鼠学习记忆能力。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:健康SD大鼠120只,随机取20只作为正常组,另100只大鼠用于制备慢性不可预见性温和应激(CUMS)抑郁模型。再将CUMS抑郁大鼠随机分为模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,氟西汀组,每组20只。柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组分别灌胃3.25,6.5,13 g·kg~(-1);氟西汀组灌胃盐酸氟西汀10 mg·kg~(-1);正常组和模型组灌胃等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。应用糖水偏好和强迫游泳实验评估抑郁行为,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠大脑海马组织中PI3K,Akt,GSK3β以及β-catenin蛋白水平及其磷酸化水平。结果:给药21 d后,与正常组比较,模型组糖水偏好显著下降(P0.01);强迫游泳不动时间显著延长(P0.01);PI3K,p-PI3K p110,p-PI3K p85蛋白水平均显著降低(P0.01);Akt,p-Akt Thr308,p-Akt Ser473,p-GSK3βSer9,β-catenin水平均显著降低(P0.01);GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高组大鼠糖水偏好显著增加(P0.01);强迫游泳不动时间显著缩短(P0.01);PI3K总蛋白,PI3K p110和PI3K p85亚基蛋白磷酸化水平均显著增高(P0.01);p-Akt Thr308和p-Akt Ser473水平均显著升高(P0.01);p-GSK3β Ser9,β-catenin水平显著增高(P0.01),而GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平却明显降低(P0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤通过提高大鼠海马组织PI3K蛋白水平及活性,激活Akt,抑制GSK3β活性,阻止β-catenin降解,即提高大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,保护海马神经元。     

复心汤对心力衰竭大鼠PI3K-Akt-GSK3β通路的影响

  目的：研究复心汤对阿霉素所致心力衰竭大鼠心肌肥厚模型中PI3K-Akt-GSK3β通路在心肌中表达的影响,探讨复心汤对抗心力衰竭的作用机制  方法：健康成年的雄性Wistar大鼠75只,随机分为空白组、模型组、卡托普利组、复心汤低剂量组、复心汤高剂量组,除空白组外,其余各组用阿霉素造模后,给予相应干预措施。4周后分别用免疫组化、Western blotting法检测心肌中PI3K、Akt及GSK3β的表达情况,并进行定量分析  结果：模型组PI3K、Akt阳性表达面积最高,复心汤低剂量组、卡托普利组、复心汤高剂量组较低,空白组最低；GSK3β蛋白表达情况最高为空白组,卡托普利组、复心汤高剂量组、复心汤低剂量组表达面积较模型组高  结论：复心汤治疗心力衰竭与PI3K-Akt-GSK3β通路有关。     

葛根素通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调节HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:观察葛根素对胰岛素抵抗Hep G2细胞内磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号分子的影响。方法:通过0.5 mmol·L~(-1)棕榈酸联合9×10~(-4)U·L~(-1)胰岛素孵育24 h诱导Hep G2胰岛素抵抗细胞模型,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率以确定葛根素给药浓度。实验设正常组、模型组和葛根素各剂量组(40,80,160,320μg·L~(-1))。葡萄糖检测试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖的含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量,肝糖原测定试剂盒测定Hep G2细胞内肝糖原含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内PI3K,Akt,磷酸化(p)-Akt,GSK-3β,p-GSK-3β的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组Hep G2细胞葡萄糖消耗率明显下调(P0.05),细胞内糖原含量减少(P0.05),细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量增加(P0.05),PI3K和p-Akt蛋白表达下降(P0.05),GSK-3β蛋白表达增加(P0.05);与模型组比较,葛根素可呈剂量依赖性增加细胞葡萄糖消耗率(P0.05),增加细胞内肝糖原含量(P0.05),降低细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量(P0.05),增加PI3K蛋白表达,上调Akt蛋白磷酸活化水平(P0.05),下调GSK-3β蛋白表达并增强其磷酸失活水平(P0.05)。结论:葛根素可通过增强PI3K/Akt/GSK-3β信号转导过程,增加肝细胞内糖原含量从而改善Hep G2细胞的胰岛素抵抗状态。     

温胆汤对精神分裂症模型大鼠学习记忆及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的：探讨温胆汤对精神分裂症模型大鼠学习记忆及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法：将60只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯氮平组(20 mg/kg)及温胆汤低(10 g/kg)、中(20 g/kg)、高(40 g/kg)剂量组,各给药组灌胃给药,正常对照组与模型组灌胃相应体积生理盐水,1次/d,共14 d。除正常对照组外其余各组大鼠末次给药2 h后于左侧腹腔一次性注射MK-801(0.6 mg/kg)诱发精神分裂症模型,正常对照组腹腔注射相应体积生理盐水。Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;Western Blot检测海马组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达;qRT-PCR检测海马组织PI3K、Akt、mTOR mRNA表达。结果：与模型组比较,除温胆汤低剂量组外,各给药组大鼠造模后第4天定位航行实验逃避潜伏期显著缩短,空间探索实验穿越平台位置次数、穿越平台所在象限次数及平台所在象限停留时间显著增多,各给药组大鼠海马组织p-P13K/P13K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平均显著降低,温胆汤高剂量组及氯氮平组PI3K、Akt、mT...     

白及多糖对GU模型大鼠胃组织PI3K/Akt的影响

目的:探讨白及多糖对胃溃疡(GU)模型大鼠胃组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt) m RNA及蛋白,以及其介导细胞因子白细胞介素-2受体(IL-2R),白细胞介素-4(IL-4)表达水平的影响。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,模型组大鼠采用乙酸直接烧灼法复制GU模型,将GU模型大鼠按随机数字表法分为模型组、盐酸雷尼替丁组和白及多糖高、中、低剂量组共5组,每组10只。空白组和GU模型组大鼠给予10 m L·kg~(-1)·d~(-1)蒸馏水灌胃,白及多糖高、中、低剂量组分别予0. 5,0. 25,0. 125 g·kg~(-1)·d~(-1)白及多糖灌胃,盐酸雷尼替丁组给予0. 3 g·kg~(-1)·d~(-1)盐酸雷尼替丁灌胃,治疗15 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠血清一氧化氮(NO)含量及胃组织胃蛋白酶活性及细胞因子IL-2R,IL-4含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt m RNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,胃组织细胞因子IL-2R,IL-4含量及m RNA表达显著升高,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与GU模型组比较,白及多糖高、中、低剂量组IL-2R,IL-4含量及m RNA表达均降低,以白及多糖高剂量组降低显著,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平均降低,以白及多糖高、中剂量组降低显著(P 0. 05,P 0. 01)。结论:白及多糖可通过下调PI3K及Akt m RNA和蛋白表达水平,抑制细胞因子IL-2R及IL-4异常分泌而发挥保护胃黏膜的作用。     

臭牡丹含药血清通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞的影响

目的:从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路角度探讨臭牡丹含药血清对肝癌MHCC97-H细胞的影响及可能的机制。方法:臭牡丹15%含药血清作用于MHCC97-H细胞,细胞增殖/毒性法(CCK-8)观察臭牡丹含药血清对细胞增殖的影响,以筛选最佳作用时间和浓度; Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对PI3K/Akt信号通路中关键蛋白中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN),磷酸化Akt(p-Akt)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对核转录因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响。结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。其中高剂量组抑制作用最为明显,在24,48,72 h的最大抑制率分别达到28%,32%,43%;流式细胞术结果显示,与空白组比较,随着臭牡丹含药血清浓度的增加,细胞的生长均受不同程度抑制,细胞的凋亡比例亦相应增加,72 h干预组抑制作用显著(P 0. 01),臭牡丹含药血清组各时间段最大凋亡率达19. 48%,19. 72%(P 0. 05); Western blot结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清干预下各组PTEN表达量均升高(P 0. 05),PI3K,p-Akt蛋白表达均减少(P 0. 05); Real-time PCR结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清可以下调NF-κB mRNA表达,上调TNF-αmRNA的表达(P 0. 05)。结论:臭牡丹含药血清可以有效抑制MHCC97-H肝癌细胞增殖并促进其凋亡,可能与PI3K/Akt信号通路并影响其关键因子有关。     

派特灵对HeLa细胞增殖迁移能力及PI3K/Akt信号转导通路的影响

目的:探索派特灵对HeLa细胞增殖迁移侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的影响。方法:①将HeLa细胞分为空白组,派特灵组(3.906,2.604,1.953,1.563,1.302,1.116,0.977 g·L~(-1)),加药干预24 h,镜下观察细胞形态变化,并采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,计算派特灵对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。②将HeLa细胞分为空白组,顺铂组(0.01 g·L~(-1)),派特灵高、中、低质量浓度组(2.974,1.487,0.991 g·~(-1)),采用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法检测派特灵对HeLa细胞增殖能力的影响,使用划痕实验检测细胞的迁移情况,采用侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力的变化。③增设抑制剂LY294002组(0.006 g·L~(-1)),采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测派特灵对PI3K,Akt,重组人B细胞淋巴瘤因子-xl(Bcl-xl),B细胞淋巴瘤/白血病相关d蛋白(Bad)表达的影响。结果:①与空白组比较,镜下观察显示,用药组细胞数目减少,细胞形态不完整;MTT比色法显示,派特灵对HeLa细胞增殖有显著抑制作用(P0.01),计算得出派特灵对HeLa细胞的IC_(50)为2.974 g·L~(-1)。②CCK-8法显示,与空白组比较,培养24,36,48 h,所有用药组均对HeLa细胞增殖有抑制作用(P0.01);与顺铂组比较,各时间点派特灵中、低质量浓度组对HeLa细胞增殖抑制作用减弱(P0.01);划痕实验显示,与空白组比较,各加药组均能抑制HeLa细胞的迁移能力(P0.01),派特灵高质量浓度组细胞迁移率低于顺铂组(P0.05);Transwell实验显示,与空白组比较,各加药组HeLa细胞穿膜数减少(P0.01),与顺铂组比较,派特灵中、低质量浓度组细胞穿膜数升高(P0.01)。③Western blot显示,与空白组比较,派特灵高、中、低剂量及LY294002组的PI3K,Bcl-xl,Akt表达量下降(P0.05,P0.01),Bad表达量增高(P0.01);与派特灵高质量浓度组比较,派特灵低质量浓度组的PI3K,Akt,Bcl-xl蛋白表达升高(P0.01),Bad表达降低(P0.01)。结论:派特灵能抑制HeLa细胞增殖迁移侵袭能力,符合一定量效和时效关系,可能与其影响PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨莲甲散结方对肺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的：基于PI3K/Akt信号通路探究莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响，并探索其作用机制。方法：采用CCK-8法检测不同浓度的莲甲散结方对H1975细胞活力的影响。在CCK-8结果基础上将H1975细胞分为空白组和莲甲散结方低、中、高剂量组（3、6、9 g/L）。采用克隆形成、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EDU）细胞增殖实验检测H1975细胞的增殖能力；Transwell迁移和Transwell侵袭实验检测H1975细胞迁移和侵袭能力；Hoechst 33342染色法和流式细胞术Annexin VFITC/PI双染检测H1975细胞凋亡情况。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定H1975细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白，凋亡相关蛋白，磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路蛋白的表达水平。结果：莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞的48 h半数抑制浓度（IC50）为7.51 g/L。与空白组比较，莲甲散结方各剂量组克隆数目减少，EDU阳性数目减少（P <0.05,P <0.01）；与空白组相比，莲甲散结方各剂量组迁移能力下降，侵袭能力减弱（P <0.05,P <0.01）；与空白组相比，莲甲散结方各剂量组促进H1975细胞的凋亡率显著增加（P <0.01）。Western blot结果显示，与空白组相比，莲甲散结方中、高剂量组E-cadherin表达升高（P <0.05,P <0.01）,N-cadherin表达降低（P <0.01）。与空白组相比，莲甲散结方各剂量组Cleaved Caspase-3、Bax表达均升高（P <0.05,P <0.01）,Bcl-2表达均下降（P <0.05,P <0.01）。与空白组相比，莲甲散结方中、高剂量组p-PI3K表达下降（P <0.05,P <0.01），莲甲散结方各剂量组p-Akt表达均下降（P <0.05,P <0.01），且呈浓度依赖性。结论：莲甲散结方可以抑制肺腺癌细胞H1975的恶性表型，诱导H1975细胞的凋亡，抑制PI3K/Akt信号通路的活化，下调PI3K/Akt的蛋白磷酸化水平可能是其机制之一。     

电针通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路调节抑郁大鼠糖代谢紊乱

目的:探讨电针“足三里”改善应激后抑郁大鼠糖代谢紊乱的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组，每组10只。采用慢性束缚应激复制抑郁大鼠模型。电针组造模期间同时进行双侧“足三里”电针干预，每次30 min,每日1次，持续4周。造模前后记录大鼠体质量并计算体质量增加量；造模结束后行糖水偏好实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学；生化法检测大鼠血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平；HE染色、PAS染色观察大鼠肝脏组织病理形态及肝糖原含量；Western blot法检测肝脏组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、糖原合成酶激酶-3(GSK3β)、p-GSK3β蛋白表达量。结果:与空白组相比，模型组大鼠体质量增加量、糖水偏好指数降低(P<0.01),游泳不动时间延长(P<0.01),血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平升高(P<0.05),肝脏组织中p-Akt蛋白表达量及p-Akt/Akt比值降低(P<0.001),p-GSK3β蛋白表达量及p-GSK3β/GSK3β比值升高(P<0.01,P<0.00...     

黄芪甲苷对特发性肺纤维化自噬活性作用及PI3K/Akt/mTOR信号调控的影响

目的:研究黄芪甲苷对特发性肺纤维化自噬活性影响及其磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/mTOR信号的调控作用,探讨黄芪的抗肺纤维化机制。方法:c57bl/6小鼠分为假手术组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组、泼尼松组。博莱霉素(BLM)10 mg·kg-1诱导建立肺纤维化动物模型,以黄芪甲苷低、中、高剂量(25,50,100 mg·kg-1)干预,分别于3,7,14,28 d取材,进行苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态变化,马松(Masson)三色染色、羟脯氨酸测定观察胶原表达水平,免疫组化及蛋白质免疫印迹(Western bolt)分析自噬标记蛋白和PI3K/Akt/mTOR信号蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组肺组织炎症反应明显、胶原蛋白显著增加(P0.01),PI3K/Akt/mTOR信号增强,自噬活性下降,与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量明显抑制肺组织炎症反应,下调转化生长因子-β1(TGF-β1)(P0.01)和胶原蛋白(P0.05)表达,提高LC3Ⅱ/Ⅰ和(beclin-1)表达(P0.05),减少p62积累(P0.05),同时抑制PI3K,Akt,mTOR磷酸化水平(P0.05),减少ɑ-平滑肌动蛋白(ɑ-SMA)而提高E-钙黏素(E-cadherin)表达(P0.01)。结论:黄芪甲苷通过抑制肺组织炎性反应、下调TGF-β1表达,抑制PI3K/Akt/mTOR信号增强肺组织细胞自噬活性,阻止上皮间质转分化(EMT)过程。     

基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路研究心宝丸对慢性心力衰竭大鼠心肌肥厚的影响

目的探讨心宝丸是否能够通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路抑制慢性心力衰竭（CHF）大鼠模型心肌肥厚。方法将60只雄性SD大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组。除假手术组外所有大鼠采用腹主动脉缩窄法复制CHF模型，假手术组只分离腹主动脉，不结扎，术后4周心宝丸药物干预组［40、80、120 mg/（kg·d）］和贝那普利组［1.05 mg/（kg·d））］开始灌胃给药8周，假手术组和模型组用等体积生理盐水灌胃8周。术后12周用超声心动图检测大鼠心脏功能，全部大鼠禁食24 h后处死， HE染色法观察心肌组织形态，小麦胚凝集素染色（WGA）观察心肌细胞大小， ELISA法检测血清NT-proBNP值， Real-time PCR法检测肥厚相关基因ANP、Myh7 mRNA表达水平，Western Blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白表达水平。结果与假手术组比较，模型组大鼠术后第12周左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）降低（P<0.01），左心室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.05），心肌细胞横截面积（CSA）增大（P<0.01），血清NT-proBNP水平升高（P<0.01），ANP、Myh7 mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达水平上调（P<0.01，P<0.05），GSK3β表达水平下调（P<0.01）；与模型组比较，心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组LVEF升高（P<0.05，P<0.01），心肌细胞大小减小（P<0.01），Myh7 mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01），血清中NT-proBNP水平降低（P<0.01），p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平下调（P<0.01），GSK3β表达水平上调（P<0.01），心宝丸中、高剂量组FS升高（P<0.05），心宝丸中、高剂量组和贝那普利组LVIDs减小（P<0.05），心宝丸高剂量组和贝那普利组ANPmRNA表达水平降低（P<0.01）；HE染色结果显示：心宝丸可以改善心肌肥厚，心肌细胞排列紊乱，间隙增宽的病理变化。结论心宝丸可以抗心肌肥厚，提升心脏功能，其机制可能与抑制PI3K/Akt信号的磷酸化激活，抑制GSK3β的磷酸化有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响

目的 观察固本解毒方对肺癌A549细胞上皮间质转化（EMT）的影响,从磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路探讨其作用机制。方法 制备固本解毒方含药血清,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率并筛选固本解毒方浓度用于后续实验。分为空白组、固本解毒方组（2.5%、5%、10%含药血清）、PI3K/Akt通路激活剂（SC79）组、固本解毒方+SC79组。划痕实验检测细胞迁移力,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化（p）-Akt、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、p-GSK-3β蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测N-cadherin、Vimentin mRNA表达。结果 与空白组比较,固本解毒方组含药血清（2.5%、5%、10%、20%、40%）A549细胞活力降低（P<0.05）,选择固本解毒方含药血清10%、5%、2.5%作为高、中、低浓度进行后续实验。与空白组比较,固本解毒方组A549细胞迁移力降低。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,固本解毒方组A549细胞N-cadherin、Vimentin mRNA表达显著降低（P<0.01）。Western blot结果显示,与空白组比较,固本解毒方组（含药血清5%、10%）A549细胞E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.01）,固本解毒方组N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达显著降低（P<0.01）,p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。与SC79组比较,固本解毒方组（含药血清10%）E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3β、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β表达显著降低（P<0.01）。与固本解毒方组（含药血清10%）比较,固本解毒方+SC79组（含药血清10%）E-cadherin蛋白表达显著降低（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3β、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论 固本解毒方可抑制肺癌A549细胞迁移和EMT,其机制与调控PI3K/Akt信号通路有关。     

健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响

目的:研究健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗大肠癌肝转移的作用机制。方法:随机抽取10只BALB/C-nu裸鼠作为空白组,其余裸鼠建立人大肠癌细胞肝转移裸鼠模型,建模3 d后取存活裸鼠30只,随机分为模型组,健脾消癌方组(41.6 g·kg-1),人参皂苷Rg3组(5.2 mg·kg-1),各组裸鼠灌胃相应药物及生理盐水4周后脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN),磷酸化第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(p-PTEN),Akt,磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果:健脾消癌方及人参皂苷Rg3组肝转移率明显低于模型组(P0.05);与空白组比较,模型组中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组肝组织中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组p-PTEN,p-Akt表达差异无统计学意义。与空白组比较,模型组PTEN,Akt蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达量明显升高(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达差异无统计学意义。结论:健脾消癌方可拮抗大肠癌肝转移,其作用机制可能与升高PTEN蛋白表达,降低p-PTEN,p-Akt蛋白表达有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

当归补血汤通过PI3K/Akt通路对AngⅡ诱导肥大心肌细胞的保护作用

目的:研究当归补血汤对肥大心肌细胞的保护作用及其与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)/一氧化氮(NO)信号转导通路的关系。方法:体外培养H9C2心肌细胞,采用α-肌动蛋白(α-actin)抗体进行免疫组化法鉴定心肌细胞;用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2心肌细胞肥大模型,通过BCA蛋白测定法测定心肌细胞总蛋白含量,比较空白组和模型组蛋白含量的不同,以验证AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的模型;取同代生长状态良好的细胞分为空白组,模型组,LY294002阻断剂组和10%含药血清组,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组心肌细胞p-Akt,Akt,p-e NOS,e NOS等信号通路的相关蛋白表达,硝酸还原酶法检测各组细胞培养液中NO浓度。结果:免疫组化法鉴定细胞,棕黄色细密颗粒位于细胞浆,其鉴定结果符合心肌细胞特征;BCA测定细胞蛋白,模型组较空白组蛋白表达增加(P0.05),AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的模型建立;Western blot结果显示模型组较空白组p-Akt,Akt,e NOS蛋白表达减少(P0.05);含药血清组较模型组p-Akt,Akt,e NOS蛋白表达增加(P0.05),LY294002阻断剂组可消减含药血清的作用。结论:当归补血汤含药血清对AngⅡ诱导心肌细胞肥大起保护作用,其机制之一可能是通过调控心肌细胞PI3K/Akt信号通路实现的。     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的影响

目的:探讨蠲痛饮对子宫内膜异位症(EMS)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶分子(mTOR)信号通路蛋白的影响。方法:采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型,随机将48只大鼠分为正常组、模型组、蠲痛饮低、中、高剂量组、通路阻滞剂组(LY294002) 6组,分别给予蠲痛饮高、中、低剂量(42. 9,14. 3,4. 8 g·kg~(-1))灌胃,通路阻滞剂组予PI3K通路阻滞剂LY294002(0. 04 g·kg~(-1))腹腔注射,正常组及模型组每天按照10 mL·kg~(-1)给予生理盐水灌胃,各组持续用药28 d。应用透射电镜观察大鼠异位内膜组织超微结构,免疫组化法检测异位内膜组织PI3K,Akt,mTOR蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测核糖体蛋白S6激酶(p70S6K) mRNA相对含量。结果:与正常组比较,模型组异位内膜PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达都明显升高(P 0. 05);与模型组比较,蠲痛饮中、高剂量、通路阻滞剂组干预后PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达明显降低(P 0. 05)。透射电镜下可见蠲痛饮低、中、高剂量组和通路阻滞剂组均能促进腺上皮细胞萎缩或欠整齐,微绒毛减少或消失,胞核固缩,胞内线粒体肿胀或减少,间质细胞凋亡。结论:PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子宫内膜异位症发生;蠲痛饮可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达及p70S6K mRNA表达,从而抑制上皮间质细胞活性,促进细胞凋亡,治疗子宫内膜异位症。