肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及E-cadherin、Vimentin和TGF-β表达的影响

目的 研究肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及癌、癌旁组织中上皮-间质转化(EMT)相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响.方法 40只小鼠随机分为肺复康组(17.2 g生药/kg)、5-Fu组(25 mg/kg)、Lewis肺癌模型组、正常组.检测肿瘤体积、肿瘤质量以及癌、癌旁组织中E-cadherin、Vimentin和TGF-β的蛋白表达情况.结果 与模型组相比,肺复康组肿瘤体积减小(P＜0.01),肿瘤质量降低(P＜0.01);肺复康组抑瘤率为36％.与正常组比较,模型组癌及癌旁组织E-cadherin表达降低(P＜0.01),Vimentin、TGF-β表达升高(P＜0.01);与模型组癌及癌旁组织相比,肺复康组癌及癌旁组织E-cadherin表达升高(P＜0.01),而Vimentin、TGF-β无显著性差异(P＞0.05).结论 肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用;并能上调E-cadherin的表达,从而促进肿瘤细胞间的同质粘附而抑制肿瘤的侵袭、转移.     

健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响

目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响。方法:以13.1 g·kg~(-1)的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10%无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20%健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L~(-1)组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平。结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50～100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β1组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P0.01)。结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用。     

臭牡丹提取物对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及对相关蛋白表达的影响

目的 研究臭牡丹提取物对H22实体移植瘤的抑制作用及与B淋巴细胞瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的相关性。方法 皮下接种H22瘤株建立小鼠H22实体移植瘤模型。60只荷瘤鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组和臭牡丹高、中、低剂量（2.18、1.09、0.55 g/kg）组,每组12只,各组分别给予生理盐水、5-Fu（25 mg/kg,1次/d）及不同浓度的臭牡丹提取物干预。连续给药14 d后处死,检测小鼠体质量变化、抑瘤率及脾脏和胸腺指数;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,臭牡丹高、中剂量组小鼠的肿瘤质量均显著降低（P<0.01）,胸腺和脾脏指数显著增加（P<0.05）;同时Bax蛋白的表达水平显著上调,Bcl-2蛋白的表达显著降低（P<0.01）。结论 臭牡丹提取物能够抑制H22实体移植瘤生长,其机制可能与上调Bax/Bcl-2比值和免疫调节有关。     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

降脂滴丸对大鼠实验性高血脂症的预防作用

目的 研究降脂滴丸对大鼠实验性高血脂症的预防作用。 方法 健康SD雄性大鼠60只随机分为6组:正常对照组、模型对照组、阳性对照组(洛伐他汀组)、降脂滴丸低、中、高剂量组。正常对照组给予基础饲料;模型对照组给予高脂饲料;阳性对照组给予高脂饲料,并灌胃给予洛伐他汀0.002 g/kg,1次/d;降脂滴丸低、中、高剂量组给予高脂饲料,并分别灌胃给予降脂滴丸(0.13、0.25、0.50 g/kg),1次/d,均自由饮水,每周称大鼠体重一次。各组按规定给药40 d后,禁食12 h,眼眶静脉取血,分离血清,测定血清TC、TG、HDL、LDL、APOA1和APOB。 结果 给药前,各组的TC、TG、LDL和HDL差异无统计学意义(P>0.05)。给药后与正常对照组比,模型组的TC、TG和LDL均显著升高(P<0.01),HDL显著低于正常对照组(P<0.05),说明高脂模型复制成功。与模型对照组相比,降脂滴丸中、高(0.25、0.50 g/kg)剂量组能明显降低动物体重(P<0.05),降脂滴丸0.50 g/kg剂量组对TC和TG均有不同的降低作用(P<0.05),还有升高APOA1的作用(P<0.05);中、高(0.25、0.50 g/kg)剂量组均有不同程度的降低APOB的作用(P<0.05、P<0.01)。 结论 降脂滴丸具有一定的降血脂的作用。     

裸鼠盲肠黏膜下注射HCT116细胞建立结肠癌原位种植及转移模型的研究

目的建立一种简便、可行、稳定的裸鼠盲肠黏膜原位种植癌及转移模型。方法将人结肠癌细胞株HCT116细胞注射接种于裸鼠盲肠黏膜下,HE染色及人癌胚抗原(CEA)免疫组化检测接种后不同时期的盲肠原位瘤,腹腔淋巴结、肝、肺组织转移情况。结果盲肠接种HCT116细胞后2周,90%裸鼠均长出直径2~5 mm的盲肠原位瘤;接种后4周开始有腹腔淋巴结转移,12周时淋巴结转移率100%;接种10周时见肝、肺有转移,12周时肝、肺转移率分别为60%、39%。结论利用盲肠黏膜下原位接种HCT116细胞法建立裸鼠结肠癌模型,可模拟结肠癌临床原位发生、发展演变过程,方法简便且成瘤率高,为深入研究结肠癌转移机制的基础研究提供理想、稳定的动物模型。     

保肺饮对肺癌细胞EMT的作用及机制研究

目的:探讨保肺饮调控HGF逆转A549细胞EMT的作用及机制。方法:体外培养A549细胞,运用Western Blot方法检测保肺饮作用于A549细胞后对HGF、E-cadherin、vimentin蛋白表达的影响。结果:Western Blot结果显示不同剂量保肺饮作用下细胞E-cadherin表达增加,HGF、vimentin的表达降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:保肺饮能通过下调HGF的表达逆转A549细胞EMT进程。     

健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体MIF调控肝Kupffer细胞TGF-β1表达的研究

目的 通过细胞实验研究健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体(CT26-exo)中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对肝Kupffer细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 采用CT26-exo干预肝Kupffer细胞,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝Kupffer细胞中TGF-β1 mRNA表达;进...     

金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC及水通道蛋白5表达的影响

目的观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)、水通道蛋白5(AQP5)表达的影响,探讨其治疗气道黏液高分泌的可能机制。方法 24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、金水六君煎组和阿奇霉素组,每组6只。采用烟熏加气管内脂多糖滴入制作大鼠COPD气道黏液高分泌模型,成模后给予相应药物干预,连续2周。观察大鼠一般情况,小动物肺功能仪检测肺功能,HE染色观察肺组织病理,PAS染色检测气道杯状细胞数及黏液量,RT-PCR和Western blot分别检测肺组织MUC5AC、AQP5基因与蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肺组织HE染色符合COPD病理改变,肺功能及AQP5基因与蛋白表达明显降低(P0.05),气道杯状细胞数、黏液量增加及MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P0.05);与模型组比较,金水六君煎组大鼠肺功能明显改善(P0.05,P0.01),气道杯状细胞数、黏液量减少及肺组织MUC5AC基因与蛋白表达明显降低(P0.05),肺组织AQP5基因与蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论金水六君煎可促进肺组织AQP5表达,抑制MUC5AC表达,纠正黏蛋白/水盐比例失衡可能是其治疗COPD气道黏液高分泌的机制之一。     

基于网络药理学与分子对接技术探讨固脾消积饮对肝癌HepG2.2.15细胞焦亡的影响

目的 以半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）介导的细胞焦亡为基础，采用网络药理学及分子对接技术筛选中药复方固脾消积饮中抗肿瘤的活性成分，通过体外实验探讨该方干预肝癌HepG2.2.15细胞焦亡的分子机制。方法 利用中药系统药理学分析平台（TCMSP）筛选中药复方固脾消积饮的化合物及靶点，并获取对应的基因Symbol；从GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传（OMIM）数据库、PharmGKB数据库、TTD数据库搜集Caspase-1的靶点，运用Cytoscape构建化合物-基因靶点调控网络；采用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析，采用基因本体（GO）功能富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析预测该方有效成分对Caspase-1的作用机制，应用AutoDock Vina进行分子对接验证。制备固脾消积饮含药血浆，体外培养肝癌HepG2.2.15细胞；将HepG2.2.15细胞分为空白血浆组、VX-765组、VX-765+含药血浆组、含药血浆组，使用15%含药血浆干预48 h后，免疫荧光染色法检测细胞膜表面GSDMD-N的表达及分布情况，检测HepG2.2.15细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）的释放情况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中特征蛋白Caspase-1、消皮素D-N端（GSDMD-N）的表达水平。结果 网络药理学筛选得到丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、蛋白激酶B1（Akt1）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、V-Jun肉瘤病毒癌基因同源物（JUN）、TP53为主要作用靶点，化合物7-hydroxy-5，8-dimethoxy-2-phenyl-chromone、黄芩素、鼠李素、荠苎黄酮、异鼠李黄素、7-O-methylisomucronulatol、芒柄花黄素、毛蕊异黄酮、木犀草素、槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、黄芩苷为主要活性成分，GO富集分析涉及氧化应激反应、对金属离子的反应、与泛素-类蛋白连接酶结合、磷酸酶结合等多个生物过程，KEGG通路富集分析涉及MAPK、核转录因子（NF）-κB、p53、低氧诱导因子-1（HIF-1）等信号通路，分子对接表明靶点与成分具有较好结合性。体外实验表明，与空白血浆组相比，VX-765组的GSDMD-N荧光信号减少减弱，LDH、IL-1β、IL-18的释放量均减少，Caspase-1、GSDMD-N的表达显著下调（P<0.01）；固脾消积饮含药血浆组的GSDMD-N荧光信号增加增强，LDH、IL-1β、IL-18的释放量显著增加，Caspase-1、GSDMD-N的表达显著增高（P<0.01）。结论 固脾消积饮通过多靶点多通路调控Caspase-1以诱导肝癌HepG2.2.15细胞发生焦亡。