血管紧张素-(1-7)对胰岛素分泌细胞株NIT-1增殖的影响

[目的]探讨血管紧张素[Ang-(1-7)]对小鼠胰岛素分泌细胞株NIT-1细胞增殖的影响.[方法]NIT-1细胞按以下分组分别处理24 h,采用CCK-8比色法检测细胞增殖.(1)11.1、25.0、30.0、35.0和40.0 mmol/L葡萄糖液,35.0 mmol/L甘露醇分别处理24 h;(2)0、10-7、10-6、10-5和10-4 mol/L Ang-(1-7)分别处理24 h;(3)高糖(HG,35.0 mmol/L)、HG+Ang-(1-7)(10-5 mol/L)、HG+Ang-(1-7)+Mas受体拮抗剂(A-779,10-5 mol/L)和HG+A-779组.[结果](1)较11.1 mmol/L组,葡萄糖浓度为35.0和40.0 mmol/L时,NIT-1细胞的增殖明显减低(1.02±0.07 vs 1.21±0.10;0.90±0.05 vs 1.21±0.10,P＜0.05).(2)在11.1 mmol/L葡萄糖培养条件下,10-7～10-4mol/L之间的Ang-(1-7)不影响NIT-1细胞的增殖.(3)与HG组相比,HG+Ang-(1-7)组细胞的增殖率明显增加(1.44±0.24 vs 1.14±0.07,P＜0.05),加入A-779共同孵育可逆转Ang-(1-7)的促增殖效应(1.20±0.02 vs 1.44±0.24,P＜0.05).[结论]Ang-(1-7)通过Mas受体拮抗高糖对NIT-1细胞增殖的抑制作用.     

低分子壳聚糖对缺氧/复氧大鼠心肌细胞中ClC-3表达的影响

目的: 研究低分子壳聚糖(LMCTS)对缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠心肌细胞中氯离子通道3(ClC-3)表达的影响,探讨LMCTS对大鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用及其与ClC-3通道的关系。方法: 原代培养的大鼠心肌细胞分为空白对照组,模型组和200、400及600mg·L^-1LMCTS组。除空白对照组细胞不做任何处理、正常培养外,其余各组细胞均进行低压缺氧处理1h,之后在37℃条件下复氧24h,构建心肌细胞H/R损伤模型,其中模型组不加药物,正常培养;而不同浓度LMCTS组细胞在构建模型前分别给予200、400和600mg·L^-1LMCTS。采用RT-PCR法检测大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA的表达水平;Western blotting法和免疫荧光法检测大鼠心肌细胞中ClC-3蛋白的相对表达水平。结果: RT-PCR法和Western blotting法检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),其中以600mg·L^-1LMCTS组心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平最低。免疫荧光检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞荧光强度明显增强;与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞荧光强度明显降低。结论: 大鼠心肌细胞中ClC-3表达水平与心肌细胞H/R损伤有关联,LMCTS可降低ClC-3表达水平,其可能通过降低ClC-3表达水平对大鼠心肌细胞H/R损伤发挥保护作用。     

活性氧与铁死亡通路相互作用在丙酮醛引起的小鼠胚胎成骨细胞损伤中起重要作用

目的 探讨活性氧和铁死亡在丙酮醛诱导小鼠胚胎成骨细胞（MC3T3-E1）损伤中是否存在相互作用。方法 应用丙酮醛损伤MC3T3-E1细胞建立模拟糖尿病骨质损伤的细胞模型。应用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）测定MC3T3-E1细胞的存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位;双氯荧光素（DCFH-DA）荧光显微镜照相法检测胞内活性氧水平;碱性磷酸酶试剂盒检测定碱性磷酸酶活性;茜素红染色观察成骨细胞晚期标志物-矿化结节的形成;铁离子试剂盒检测铁离子水平;Western blot检测成骨细胞的抑制铁死亡的标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的表达水平。结果 0.6 mmol/L 丙酮醛处理MC3T3-E1细胞24 h可明显减少GPX4的表达（P<0.001）,同时可使胞内铁离子浓度升高,细胞存活率降低,线粒体膜电位丢失,胞内活性氧水平升高,碱性磷酸酶活性降低和矿化结节减少（P<0.001）。应用2 mmol/L 活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸和丙酮醛共处理MC3T3-E1细胞24 h可增加GPX4的表达（P<0.01）,应用4 μmol/L铁死亡抑制剂铁抑素-1与丙酮醛共处理成骨细胞24 h可使胞内活性氧水平降低（P<0.001）;应用N-乙酰半胱氨酸或铁抑素-1与丙酮醛共处理成骨细胞24 h均能对抗丙酮醛引起的上述其他细胞损伤（P<0.001）。结论 活性氧与铁死亡通路相互作用在丙酮醛引起MC3T3-E1成骨细胞损伤中起重要的作用。     

ERKl/2介导依达拉奉保护H9c2心肌细胞对抗异丙肾上腺素诱导的损伤作用

目的 探讨胞外信号调节激酶1/2(ERKI/2)在依达拉奉(EDA)保护H9c2心肌细胞对抗异丙肾上腺素(ISO)损伤中的作用.方法 用不同浓度的ISO处理H9c2心肌细胞,建立B1肾上腺素受体持续兴奋诱导心脏毒性的体外模型.EDA在ISO处理心肌细胞前1h加人培养基中作为预处理.PD-98059 (ERKI/2抑制剂)在应用EDA前加入培养基中并作用1h,以抑制ERKI/2的磷酸化.CCK-8比色法检测细胞存活率; Western blot法检测总量及磷酸化ERK1/2蛋白的表达;罗丹明123(Rhl23)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP).结果 80μmol/LISO处理H9c2心肌细胞24h,可使磷酸化的ERK1/2及MMP的水平明显降低.EDA在10-40μmol/L浓度范围内预处理1h可以剂量依赖性地减弱80Rmol/LISO处理H9c2心肌细胞48h引起的毒性反应;40μmoUL EDA预处理1h可明显抑制ISO作用24h引起的ERKI/2磷酸化水平降低及MMP受损.ERK1/2抑制剂,PD-98059,可以取消EDA诱导的细胞保护作用,使细胞毒性及MMP受损加重.结论 EDA可保护H9c2心肌细胞对抗ISO诱导的损伤作用,其机制之一可能与拮抗ISO对ERK1/2的磷酸化抑制作用有关.     

容积激活性氯离子通道蛋白ClC-3表达下调促进H9c2心肌细胞肥大及其机制研究

目的 探讨容积激活性氯离子通道蛋白ClC-3表达下调对H9c2心肌细胞的影响及其机制.方法 用siRNA转染H9c2心肌细胞构建ClC-3表达下调的细胞模型;免疫荧光染色观察H9c2细胞表面积;qRT-PCR检测H9c2细胞心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的mRNA表达水平;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)水平,图像分析系统研究H9c2心肌细胞的调节性体积回缩能力(RVD);全细胞膜片钳技术检测H9c2细胞膜上氯电流的变化.结果 与空白组相比,siRNA转染H9c2细胞72 h能降低C1C-3 mRNA和蛋白的表达水平;而ClC-3下调与异丙肾上腺素相似,都增加H9c2心肌细胞表面积和心肌肥大标志性因子mRNA的表达,同时降低H9c2细胞的MMP和容积调节能力,抑制容积激活性氯离子电流的激活.结论 ClC-3表达的下调能诱导H9c2心肌细胞肥大,其机制可能与其损伤线粒体功能、降低细胞容积调节能力和抑制容积激活性氯离子电流的激活有关.     

外源性硫化氢通过调控瘦素/瘦素受体通路抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的探讨外源性硫化氢（H2S）能否通过调控瘦素/瘦素受体（LEPR）通路抑制高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损 伤。方法CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相检测凋亡细胞的形态学和数量改变;双氯荧光素 （DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相法检测线粒体 膜电位（MMP）水平;Western blotting法测定瘦素及瘦素受体蛋白的表达水平。结果应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3~ 24 h可以明显上调瘦素、瘦素受体的表达水平,在高糖处理9 h时瘦素、瘦素受体的表达水平达到峰值;在高糖处理HUVECs前, 400 μmol/L 硫氢化钠（NaHS,为H2S 的供体）预处理30 min 能明显抑制高糖对瘦素及瘦素受体表达的上调作用;400 μmol/L NaHS预处理HUVECs 30 min、50 ng/mL瘦素拮抗剂（LA）预处理HUVECs 1 h均可明显抑制高糖引起的HUVECs损伤,使细胞 存活率升高,细胞凋亡数量减少,胞内活性氧（ROS）堆积及MMP降低（P<0.01）。结论外源性H2S通过抑制瘦素/瘦素受体通 路对抗高糖引起的HUVECs损伤。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ致内皮损伤的保护作用

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致内皮细胞损伤的保护作用.方法 体外培养的ECV-304内皮细胞株,随机分为4组:(1)对照组:单纯DMEM培养基培养;(2)AngⅡ组:单纯DMEM培养基, 加入AngⅡ,终浓度为10-7mol/L;(3)Ang-(1-7)组:单纯DMEM培养基, 加入Ang-(1-7),终浓度为10-7mol/L;(4)混合组:单纯DMEM培养基, 加入Ang-(1-7)预处理30 min, 再加入AngⅡ, 两者终浓度均为10-7mol/L.各组作用6,12,24 h,倒置相差显微镜下观察各时间点细胞的形态变化,收集细胞,流式细胞仪测定细胞内的活性氧,硝酸还原酶法测定上清液中的一氧化氮.结果 AngⅡ组内皮细胞发生损伤性的形态学变化,活性氧生成增加,NO生成下降,与其他3组比较差异有显著性;Ang-(1-7)组与对照组比较, 细胞形态没有变化, 活性氧和NO含量差异无显著性;混合组与AngⅡ组相比, 细胞损伤明显减弱, 活性氧和NO含量与AngⅡ组比较差异有显著性,与对照组比较差异无显著性.结论 Ang-(1-7)对AngⅡ导致的内皮损伤有保护性作用.     

高糖和甲基乙二醛对血管周细胞增殖及Ang-1表达的影响

目的 研究高糖和葡萄糖降解产物甲基乙二醛(MGO)对血管周细胞增殖及血管生成素-1(Ang-1)表达的影响.方法 选用体外培养的第3代人脑血管周细胞作为实验细胞,在细胞培养液中分别加入1.5%、2.5%和4.25%葡萄糖(设立相应浓度的甘露醇对照组)及400μmol/L和800μmol/L MGO进行分组干预,以不含血清DMEM培养的细胞作为正常对照组.于处理后12、24、48和72 h,应用MTT法检测细胞增殖(D490 nm).于处理后6h和12h,Real-time PCR法检测细胞Ang-1 mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清中Ang-1蛋白表达.结果 4.25%葡萄糖组和甘露醇对照组、800μmol/L MGO组各时间点D490 nm均明显低于正常对照组(P<0.05).除1.5%葡萄糖和甘露醇对照组外,其余各干预组Ang-1 mRNA表达均显著低于正常对照组(P<0.05).各干预组相应时间点Ang-1蛋白表达均低于正常对照组;干预后6h均低于干预后12h;葡萄糖各浓度组均低于甘露醇对照组;800μmol/L MGO组低于400μmol/L MGO组;4.25%葡萄糖组低于1.5%和2.5%葡萄糖组;以上各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 高糖和MGO以浓度依赖方式抑制体外培养的血管周细胞增殖,并下调Ang-1表达.     

糖原合酶激酶-3β与内质网应激相互作用参与高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）与内质网应激（ERS）相互作用是否参与高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损 伤。方法应用40 mmol/L葡萄糖作用HUVECs 24 h构建高糖血管内皮细胞损伤模型。应用Western blot法检测GSK-3β、糖调 节蛋白78（GRP78）、CHOP和cleaved caspase-3蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜 照相法测定细胞凋亡;DCFH-DA染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相 法测定线粒体膜电位（MMP）。结果应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3~24 h,磷酸化（p）-GSK-3β表达减少,与Con组比 较,差异具有统计学意义（P<0.05）;用高糖处理HUVECs 1~24 h,对促进GRP78 和CHOP蛋白表达呈显著的时间依赖性,与 Con 组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;氯化锂（LiCl,GSK-3β抑制剂）能减轻高糖引起的ERS,使GRP78 和CHOP蛋白 表达减少,与高糖组比较,差异具有统计学意义（P<0.01）;4-苯基丁酸（4-PBA,ERS抑制剂）减弱高糖对GSK-3β的激活作用, 使p-GSK-3β表达增多,与高糖组比较,差异具有统计学意义（P<0.01）。高糖处理HUVECs 24 h能引起细胞存活率降低、凋亡细 胞、cleaved caspase-3表达和ROS生成增多及MMP丢失等损伤;在高糖作用前,应用LiCl或4-PBA预处理60 min均减轻高糖引 起的上述损伤,与高糖组分别比较,差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论在高糖损伤的HUVECs,存在GSK-3β与ERS的相 互作用并参与高糖对HUVECs的损伤。     

ClC-3氯通道调节氧糖剥夺所诱导的小胶质细胞的表型转化

目的:研究ClC-3氯通道在氧糖剥夺所致小胶质细胞表型转化中的作用?方法:应用小胶质细胞株(BV-2)制备氧糖剥夺模型,分别给予氯通道阻断剂DIDS和NPPB预处理BV-2细胞?通过MTT活性测定确定BV-2细胞损伤及药物的有效浓度;通过实时荧光定量PCR法测定细胞表型相关分子,如M1型相关分子[肿瘤坏死因子-?琢(tumor necrosis factor-?琢,TNF-?琢)?白介素-1β(interleukin 1?茁,IL-1?茁)?CD86]和M2型相关分子[转化生长因子?茁(transforming growth factor β,TGF-β)?CD206]mRNA水平的表达;通过RNA干扰的方法下调ClC-3的表达,再给予氯通道阻断剂DIDS和NPPB干预,进一步检测细胞的MTT活性,观察药物作用效果?结果:预先给予DIDS(1和10 μmol/L)和NPPB(1 μmol/L)能够改善氧糖剥夺所诱导的BV-2细胞MTT活性下降,抑制M1型相关分子如TNF-?琢?IL-1?茁和CD86的表达并促进M2型相关分子(TGF-?茁和CD206)的表达;通过RNA干扰下调ClC-3的表达,能够消除DIDS和NPPB的作用?结论:ClC-3氯通道参与调控氧糖剥夺所致小胶质细胞的表型转化,阻断ClC-3氯通道抑制氧糖剥夺诱导小胶质细胞向M1型转化?     

氯通道阻断剂NPPB拮抗离体灌注大鼠心脏钙矛盾处理引起的心肌损伤

目的观察氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对钙矛盾处理造成离体灌注大鼠心脏功能障碍和心肌细胞死亡的影响。方法钙矛盾处理由3 min无钙液、30 min有钙液接替灌注完成,实验同步记录左室压,并检测心肌损伤面积的大小。结果与正常对照组相比,钙矛盾组左室舒张末压（LVEDP）显著抬高,左室发展压（LVDP）、心室变化速率（dp/dt）为0,心脏几乎不存在活性组织;于无钙液灌注前2 min、无钙液灌注期和复钙后前5 min给予20μmol/LNPPB处理后,10例心脏的心肌损伤面积均显著缩小,其中4例LVDP大于2 mm Hg,LVEDP有降低趋势、dp/dt有升高趋势;与正常对照组相比,20μmol/L NPPB处理的对照心脏于灌流结束时左室功能、心肌损伤面积没有显著改变。结论 NPPB具有减轻钙矛盾处理引起的心肌损伤,保护心功能作用,提示氯通道参与是钙矛盾处理引起的心肌损伤。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白引起细胞损伤后坏死样凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）对β-淀粉样蛋白（Aβ325—35）诱导的HT-22细胞损伤后坏死样凋亡（necroptosis）的保护作用及可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝法（MTT）观察不同浓度的A[325—35（1-20μmol／L）作用于HT-22细胞24h,及不同浓度EPO（1—50U）预处理3h后再加入20μmol／LAβ25—3524h对HT-22细胞活力的影响;Hoechst33258核染色法观察细胞形态,蛋白免疫印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达。结果不同浓度的Aβ25—35作用HT-22细胞24h后均引起细胞活力的下降,且活力下降呈剂量依赖性;不同浓度的EPO对20μmol／LAβ25—35引起的细胞活力下降具有抑制作用。10μEPO可有效地抑制20μmol／LAβ25—35诱导的caspase-3的裂解片段表达增加。核染色表明EPO可抑制对细胞损伤后necroptosis。结论EPO对Aβ25—35诱导的细胞损伤后的neeroptosis具有保护作用,可能通过抑制caspase-3的裂解片段表达来实现。     

氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸在内皮素-1对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的影响

目的观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在内皮素-1(ET-1)对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用。方法实验设7组,对照组、1g·L-1二甲基亚砜(DMSO)组、200pmol·L-1ET-1组、200pmol·L-1ET-1+1g·L-1DMSO组和200pmol·L-1ET-1+50、100、200μmol·L-1NPPB3个实验组。采用倒置光学显微镜观察牛角膜内皮细胞形态。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法观察细胞增殖,计算细胞存活率。采用免疫细胞化学检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并采用计算机图像分析测定平均光吸收值。应用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果 NPPB能够使细胞形态发生异常,细胞内分裂相减少。50、100μmol·L-1NPPB使培养牛角膜内皮细胞MTT光吸收值、细胞存活率和PCNA阳性细胞的平均光吸收值较200pmol·L-1ET-1组均显著降低,并具有浓度依赖性。而NPPB浓度达到200μmol·L-1时,细胞趋于死亡。经100μmol·L-1的NPPB处理后,与对照组和200pmol·L-1ET-1组相比,出现明显的凋亡峰,G1期细胞比例明显增高,S期及G2/M期细胞比例则明显降低,增殖指数明显下降。结论 NPPB浓度依赖性抑制ET-1对培养BCECs的增殖作用,使细胞周期停滞在G1期。     

NPPB对人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨氯通道阻断剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的诱导作用,并阐明其可能的机制。方法：体外培养脑胶质瘤SHG-44细胞,分为对照组及50、100和200 μmol·L^-1 NPPB组。采用MTT法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用免疫组织化学法和蛋白免疫印记法分别检测SHG-44细胞中凋亡蛋白的表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24和48 h,100和200 μmol·L^-1 NPPB组SHG-44细胞活力明显降低（P < 0.01）。流式细胞术检测,100和200 μmol·L^-1 NPPB组细胞凋亡率分别为24.64%和41.85%,高于对照组（4.17%）（P < 0.01）。免疫组织化学和蛋白免疫印记法检测,100 μmol·L^-1 NPPB组SHG-44细胞中caspase-3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05或P < 0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：NPPB可以通过下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达,使caspase-3活化,进而引起SHG-44细胞凋亡。     

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系。方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化。结果:鱼藤酮(0.3～30μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。1～10μmol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3 h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高。鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆。结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。     

5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸对人脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的作用及其机制

目的：探讨氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸（NPPB）对人脑胶质瘤SHG-44细胞生长的影响,初步阐明NPPB抑制胶质瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的可能机制。方法：培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白对照组和50、100及200  μmol•L^-1 NPPB组,MTT法检测各组SHG-44细胞的增殖活性,细胞分析仪分析细胞周期变化及凋亡率。结果：MTT检测,与空白对照组比较,50   μmol•L^-1 NPPB 组在48 h时细胞增殖活性降低（P<0.05）,200  μmol•L^-1 NPPB组3 h时细胞增殖活性增高（P<0.05）,100和200   μmol•L^-1 NPPB组24和48 h时细胞增殖活性明显降低（P<0.01）。细胞周期检测,与空白对照组比较,50  μmol•L^-1 NPPB组G1期细胞百分数明显减少,G2/M期细胞百分数明显增多（P<0.01）,100和200  μmol•L^-1 NPPB组细胞增殖停滞在G1期（P<0.01）。细胞凋亡检测,与空白对照组比较,100和200  μmol•L^-1 NPPB组细胞凋亡率明显升高,分别达到24.64%和41.85%（P<0.01）。结论：高浓度NPPB可以抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,提示氯通道在人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖与凋亡中起一定的作用。     

嗅鞘细胞上清液对抗过氧化氢诱导的星形胶质细胞损伤的线粒体机制

目的： 研究嗅鞘细胞上清液（olfactory ensheathing cell conditioned medium, OECCM）对星形胶质细胞的保护作用及其线粒体机制。方法： 先用500 μmol/L H₂O₂ 损伤星形胶质细胞20 min;再以50%的OECCM继续培养细胞24 h。MTT法检测星形胶质细胞的活性,Hoechst 33342 染色法和蛋白质印迹法检测细胞凋亡及凋亡相关蛋白caspase-3的表达;用JC-1染色法检测线粒体的膜电位。结果： OECCM能减少H₂O₂诱导的细胞凋亡,减少caspase-3的表达,并且使线粒体膜电位增高。结论： OECCM可以对抗500 μmol/L H₂O₂诱导的星形胶质细胞凋亡,其机制可能与稳定线粒体膜电位有关。     

迷迭香酸激活Parkin介导的线粒体自噬并抑制高糖诱导的心肌细胞肥大

目的 评估迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞线粒体自噬水平以及细胞肥大的影响。方法 体外培养H9c2大鼠心肌母细胞,分为对照组（葡萄糖5.5 mmol/L）、高糖组（葡萄糖25 mmol/L）、高糖+迷迭香酸组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L）、高糖+迷迭香酸+Parkin-siRNA组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L+Parkin-siRNA转染）;Western blot法测定PINK1、Parkin、LC3II/LC3I蛋白表达水平,透射电子显微镜下观察线粒体自噬体形成情况,流式细胞术检测活性氧物质（ROS）与凋亡水平,分光光度法检测细胞线粒体呼吸链复合酶活性,荧光酶标法检测线粒体膜电位水平,3H-亮氨酸标记法检测细胞蛋白质合成速率,光学显微镜下检测心肌细胞表面积。结果 迷迭香酸可提高高糖培养下心肌细胞内PINK1、Parkin、LC3-II/LC3-I蛋白表达水平（P<0.05）,增多线粒体自噬体数量,并抑制高糖诱导的ROS生成、恢复线粒体呼吸链复合酶活性与线粒体膜电位水平（P<0.05）,抑制高糖诱导的细胞凋亡（P<0.05）,并降低心肌细胞表面积与蛋白质合成速率（P<0.05）。利用Parkin-siRNA抑制心肌细胞线粒体自噬,则阻断了迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞氧化应激与心肌细胞肥大的保护作用（P<0.05）。结论 迷迭香酸可通过激活Parkin介导的线粒体自噬,对高糖诱导心肌细胞的氧化应激损伤有保护作用,并改善心肌细胞肥大。