10个品系小鼠的AFLP分析

目的：实验用小鼠的遗传质量分析和品系鉴定。方法：应用AFLP技术对10个品系小鼠进行分析。结果：共应用25条单酶切引物、25对双酶切引物进行检测，其中17条单酶切AFLP引物、20对双酶切AFLP引物检测到10个品系小鼠的多态性变化。单酶切AFLP共扩出251条带，片段大小在100－2000bp，共得到89个多态位点，占总扩增带的35．5％。双酶切AFLP在50－600bp扩增出清晰条带，统计1507条带，共得到378个多态位点，占总扩增带的25．1％。对多态性片段进行统计，计算出不同品系间的相似指数和遗传距离指数。结果表明昆明鼠（KM）与TA2、BALB／c、BALB／c-nu关系较近；所有品系间关系最近的两品系为BALB／c和BALB／c-nu；关系较远的是DBA／2与T739、615、C57BL／6J，与小鼠品系来源及培育史相符。结论：通过筛选获得特异性AFLP标记，可用以区分遗传背景或外观形态很相似的品系。为小鼠的遗传质量分析和品系鉴定提供了参考资料。     

河南地方野生小鼠与近交系小鼠的扩增片段长度多态性分析

目的 从分子水平上阐明河南省兰考地区捕获的野生小鼠(LK)与4个小鼠品系(B6,BALB/c,DDK,PWK)之间的遗传差异及遗传关系,从而进一步确定该种野生小鼠的种属及培育野生来源近交系小鼠品系.方法 利用25对引物,对野生小鼠及4个小鼠品系进行扩增片段长度多态性(AFLP)分析.结果 检测到2035条扩增条带,多态性条带有507条,占总条带的24.91%,并且LK小鼠与PWK、DDK、BALB/c、C57BL/6J的遗传距离指数分别为0.01696、0.02790、0.02729、0.02759.结论 LK小鼠与PWK小鼠品系遗传关系最近,遗传距离指数最小;同时也证明了AFLP技术能够在物种鉴定、遗传背景分析及预测亲本杂交效果等方面具有明显的优越性.     

微卫星DNA分析国内24个近交系小鼠遗传状况

目的利用微卫星位点对国内24种近交系小鼠进行遗传状况分析。方法用前期筛选的富含多态性和等位基因数多的30个小鼠微卫星位点,合成荧光标记引物,对近交系小鼠基因组DNA进行PCR的扩增,经STR扫描对各近交系小鼠品系进行基因分型。结果在24个近交系小鼠品系中,有16个品系在品系内在30个位点上均具有相同基因型。而在不同品系间同一位点具有多态性,可初步对不同品系进行鉴别区分。其余品系内个别动物存在多态性。结论所选位点可以参考用于近交系小鼠遗传质量检测分析,并进行初步品系检测鉴定。     

微卫星技术对近交系小鼠遗传质量的分析

目的对14个品系近交系小鼠24个微卫星座位进行遗传分析,以期用微卫星位点分析法区分不同近交系小鼠。方法通过Mouse Genome Informatics数据库确定合适的微卫星位点和引物,对近交系小鼠基因组DNA进行扩增,分析不同品系小鼠在所选微卫星座位的基因片段,与数据库小鼠品系数据进行比较,并对14个品系近交小鼠进行了DNA多态性分析。结果24个微卫星位点在不同品系的小鼠之间具有多态性,不同品系小鼠之间的遗传距离为0.045~1.526;在不同的亚系之间也有具有多态性。结论微卫星标记方法能区分不同的近交小鼠品系、近交小鼠亚系,为小鼠遗传质量的检测提供了一个快捷简便的方法。     

微卫星DNA多态性在十种近交系小鼠遗传监测中的应用研究

目的：研究微卫星DNA多态性在近交系小鼠遗传监测中的应用。方法：选取小鼠不同染色体上的16个微卫星位点，应用PCR技术对常用的10个近交系小鼠进行了微卫星DNA多态性分析。结果：14个微卫星DNA具有稳定扩增效果，在同一品系不同个体之间表现单态性；在不同品系之间表现多态性。结论：运用所筛选的14个位点进行微卫星多态性分析，能够快速、经济地对近交系小鼠进行遗传监测。     

辽宁省6种常用近交系小鼠10个微卫星位点的遗传质量检测报告

目的 利用微卫星技术对辽宁省6种近交系小鼠进行遗传质量分析.方法 根据 Mouse GenomeDatabase和相关文献选取10个多态信息丰富的位点和引物,进行PCR扩增和PAGE电泳,对小鼠的遗传多态性进行研究.结果 不同品系小鼠同一位点的扩增结果表现出多态性,同一品系同一位点表现单态性,所有小鼠的10个位点都处于纯合状态;遗传距离分析表明,C57BL/10与C57BL/6J小鼠之间的遗传距离最近,为0.1021,遗传距离最远的是BALB/c与C57BL/10、C57BL/6J,分别为0.1635和0.1614.结论 运用所筛选的10个微卫星位点可以对近交系小鼠进行遗传质量检测,说明该方法具备可行性.     

多重PCR在近交系小鼠遗传检测中的应用

用 34对特异性引物对 AKR、BAL B/ c、C5 7/ BL、DBA/ 2、CBA、A/ WY、6 15和 T739等 8个品系近交系小鼠用 PCR方法进行遗传检测 ,并从中选用 6对引物 ,对这些品系小鼠进行二重和多重 PCR检测。结果二重PCR在和单一 PCR相同的反应条件下 ,扩增出两条与预其相同的条带 ,而三重 PCR则没有得到三条预期的条带 ,出现了干扰现象。通过二条条带的相对和绝对距离可以鉴别出 8个不同的近交系小鼠 ,表明二重 PCR可应用于近交系小鼠的遗传检测 ,二重 PCR遗传检测方法具有方便简单、省时的优点多重PCR在近交系小鼠遗传检测中的应用@…     

南江黄羊基因组DNA的AFLP和RAPD研究

目的研究南江黄羊遗传多态性和探讨AFLP标记在山羊遗传多态性方面应用的可行性.方法应用RAPD和AFLP两种方法对15只南江黄羊个体基因组DNA进行了分析,并比较两种方法的检测效果.结果RAPD标记检测得到的群体遗传相似系数和多态位点比率分别为0.942和26.98%;AFLP标记检测得到的群体遗传相似系数和多态位点比率分别为0.874和31.4%.结论AFLP方法和RAPD均适合于品系内个体间的遗传检测,并且为准确评价南江黄羊的遗传稳定性提供了相关的参数.     

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段     

单管双向等位基因专一性扩增方法在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的将新近建立的单管双向等位基因专一性扩增(single-tube bi-directional allele specific amplification,SB-ASA)方法用于分析近交系小鼠基因组中的单核苷酸多态性(SNP)。方法以5个近交系小鼠为研究对象,采用SB-ASA方法对其16个SNP位点进行检测,并通过双盲实验和测序验证该方法的可靠性;且考察了该方法中PCR反应各成分及扩增条件对结果的影响。结果16个SNP位点,SB-ASA都成功地对5个品系小鼠进行了分型,与测序结果完全一致;双盲实验结果显示通过3个SNP位点即可鉴别5个品系。结论SB-ASA方法可用于近交系小鼠SNP的遗传检测,可望作为一种新的分子生物学遗传检测方法推广应用。     

肺炎链球菌的扩增片段长度多态性快速检测方法的建立和应用

目的建立扩增片段长度多态性(AFLP)快速检测肺炎链球菌。方法针对肺炎链球菌的管家基因16SrRNA基因设计特异引物,优化反应条件,建立肺炎链球菌的AFLP检测方法。通过对20株肺炎链球菌和15株非肺炎链球菌进行检测,检验该方法的灵敏度、特异度和实用性。结果活菌计数方法表明建立的AFLP方法检测肺炎链球菌的灵敏度为1.5×103CFU/ml。检测20株肺炎链球菌均为阳性,15株非肺炎链球菌则全部阴性,特异度为100%。结论建立的AFLP方法检测肺炎链球菌灵敏度、特异度高,可用于肺炎链球菌的检测和流行病学调查。     

应用RAPD引物区分小鼠品系

目的 用随机扩增多态DNA（Random amplidfed polymorphic DNA,RAPD）方法区分10个常用小鼠品系。方法 从120条随机引物中筛选出稳定性、重复性好的4条多态性引物对10个常用小鼠品系进行RAPD扩增。扩增产物在含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透射仪上观察照相。结果 仅用这4条引物就可将10个品系小鼠完全区分开来,其中包括遗传背景或外观形态很相似的品系,如BALB／c与BALB／c-nu、KM与BALB／c也能区分出来。结论 筛选出的4条引物对实际工作具有指导意义,适用于小鼠常规遗传监测。     

Drug-resistant gene based genotyping for Acinetobacter baumannii in tracing epidemiological events and for clinical treatment within nosocomial settings

Background Acinetobacter baumannfi has emerged as an important pathogen related to serious infections and nosocomial outbreaks around the world. However, of the frequently used methods, pulsed-field gel electrophoresis （PFGE） and amplified fragment length polymorphism （AFLP） in Acinetobacter baumannfi genotyping lack the direct molecular proof of drug resistance. This study was conducted to establish a typing method based on drug resistant gene identification in contrast to traditional PFGE and AFLP in the period of nosocomial epidemic or outbreak. Methods From January 2005 to October 2005, twenty-seven strains of Acinetobacter species from Intensive Care Units, the Second Affiliated Hospital in Ningbo were isolated, including both epidemic and sporadic events. Susceptibility test, PFGE, AFLP and drug resistance gene typing （DRGT） were carried out to confirm the drug resistance and analyze the genotyping, respectively. PFGE was used as a reference to evaluate the typeability of DRGT and AFLP. Results Twenty-seven strains of Acinetobacter displayed multiple antibiotic resistance and drug resistant genes, and β-1actamase genes were detected in 85.2% strains. The result of DRGT was comparable to PFGE in Acinetobacter strains with different drug resistance though a little difference existed, and even suggested a molecular evolution course of different drug-resistant strains. AFLP showed great polymorphism between strains and had weak ability in distinguishing the drug resistance. Conclusion Compared to AFLP and PFGE, DRGT is useful to analyze localized molecular epidemiology of nosocomial infections and outbreaks, which would benefit clinical diagnosis and therapy.     

白细胞介素－2受体表达在近交系小鼠遗传监测中应用的研究

采用免疫组织化学方法，通过检测骨组织移植后宿主淋巴细胞白细胞介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）的表达，判定近交系小鼠Ｈ－２基因的纯合性，以期作为近交系小鼠遗传监测的方法。选用Ｃ５７ＢＬ／６系小鼠，实验前进行了标准的组织相容性基因检测（皮肤移植法），观察期为５０ｄ，每１０ｄ为一个观察点。结果显示，与皮肤移植结果一致。该方法似可作为近交系小鼠的遗传监测的手段之一。     

血液中肺炎链球菌的AFLP快速检测方法的建立

目的 建立扩增片段长度多态性（AFLP）快速检测血液中肺炎链球菌的方法。方法 针对肺炎链球菌的管家基因16SrRNA基因设计特异引物,优化反应条件,建立肺炎链球菌的AFLP检测方法。通过对模拟临床血液感染细菌标本的检测,评价该方法的特异性和灵敏度。结果 7个模拟临床血液感染肺炎链球菌标本经AFLP法检测,结果均为阳性;15个模拟临床血液感染非肺炎链球菌标本经该法检测,结果均为阴性;该法检测血液标本中肺炎链球菌的灵敏度为1．5×10_4cfu／mL。结论 建立的AFLP方法检测血液中肺炎链球菌简便快速,特异性好、灵敏度高,适合肺炎链球菌血流感染的早期诊断。     

江苏省113株大肠杆菌O157:H7的扩增片段长度多态性分析

目的:分析江苏省不同地区和年代分离的Escherichia coli O157:H7(E. coli O157:H7)之间的同源性?方法:用扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析法对113株 E. coli O157:H7菌株进行分子分型,采用软件BioNumerics Version 4.0对分型数据进行处理和分析?结果:113株E. coli O157:H7共分37个型别,不同来源的菌株存在相同的基因型别,不同的地区和物种之间存在着相互传播?结论:AFLP可以用于对不同来源的E. coli O157:H7进行分子分型?     

耐药鲍曼不动杆菌扩增片段长度多态性分析指纹图谱数据库的建立

目的:建立鲍曼不动杆菌扩增片段长度多态性分析(AFLP)指纹图谱数据库。方法:采用NCCLS 2004年版抗生素敏感性判断方法研究药物敏感性,采用AFLP技术研究鲍曼不动杆菌基因型,以AFLP结果建指纹图谱立数据库。结果:药敏结果和AFLP指纹图谱数据库进行的聚合分析结果具有一致性。结论:AFLP指纹图谱数据库具有实用价值。