HER2免疫组织化学1＋浸润性乳腺癌的基因扩增状态和mRNA表达分析北大核心CSCD

目的探讨HER2免疫组织化学（IHC）1＋乳腺癌患者的基因扩增状态和原位HER2 mRNA表达情况,为精准检测HER2及相关临床策略的修订提供初步参考数据。 方法抽取北京协和医院2011至2013年间手术获取的非特殊型浸润性乳腺癌HER2 IHC 1＋存档蜡块标本65例,制作组织芯片,分别采用荧光原位杂交（FISH）和RNAscope方法检测其HER2基因状态和原位mRNA表达水平。如原发灶HER2的FISH结果不确定或阴性但mRNA高表达,再以FISH复检其淋巴结转移灶的HER2基因状态。结果在65例标本中,FISH阳性4例（6.2%）,其中2例为HER2/CEP17〉2且平均HER2基因拷贝数〉4,另2例为HER2/CEP17〈2但平均HER2基因拷贝数〉6;在此4例FISH阳性标本中,2例为mRNA高表达（RNAscope 3分）,另2例为中度表达（RNAscope 2分）。另外,在全部标本中,3例HER2/CEP17〉2但平均HER2基因拷贝数〈4,其中2例mRNA高表达（RNAscope 3分和4分）,另1例mRNA中度表达（RNAscope 2分）。未见HER2基因状态及mRNA表达与临床病理特征（肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、脉管癌栓）之间存在明显相关性（P均〉0.05）。结论在本组HER2 IHC 1＋乳腺癌中检出了部分FISH阳性的标本,其mRNA也有一定程度的表达,可判断为抗HER2治疗的潜在获益者。鉴于精准分子分型对于乳腺癌临床处理及相关诊疗策略制定具有重要意义,后续有必要进行大样本量的验证。     

甲状腺未分化癌和乳头状癌超声成像特征的差异

目的 探讨甲状腺未分化癌和甲状腺乳头状癌超声成像特征的差异。方法 回顾性分析2001年4月至2014年6月在北京协和医院就诊并经病理证实的7例甲状腺未分化癌的临床和超声特征,并以同时期内性别、年龄相匹配的21例经病理证实甲状腺乳头状癌患者为对照,分析两组的超声特征差异。结果 甲状腺未分化癌的患者以女性为主(5/7,71.4%),平均发病年龄为(64.9±11.3)岁。分析超声特征结果显示,甲状腺未分化癌较甲状腺乳头状癌病灶大[(5.17±1.26)cm比(1.85±1.89)cm,P＜0.001]、纵横比＜1的比例高(100.0%比47.6%,P＝0.03)、微钙化程度高(100.0%比52.4%,P＝0.03)。两组在形态、边界、回声、均匀性、囊性变、血流状况、被膜受侵与否方面差异均无统计学意义(P均＞0.05)。结论 老年女性甲状腺内最大径大于5 cm结节如具备常见的超声恶性征象,同时又存在纵横比小于1和微钙化,应高度怀疑未分化癌。     

乳腺大汗腺病变中的肌上皮细胞改变2例临床病理观察

目的结合文献探讨乳腺大汗腺病变中的肌上皮细胞改变。方法对2例罕见乳腺大汗腺乳头状病变的临床表现、病理学形态、免疫组化等进行观察,并复习相关文献。结果例1 70岁,女性。病变为直径0.9 cm囊实性结节,镜下表现为界限清晰的硬化性乳头状病变,伴广泛的大汗腺化生。大汗腺化生区域,肌上皮细胞不明显,且p63及CD10染色完全阴性,而SMA、S-100、CK14、CK5/6染色均能够显示连续完整的外周及乳头轴心肌上皮细胞层。例2 60岁,女性。病变为直径4.5 cm囊实性结节。镜下结节呈囊性,囊腔周围可见厚的纤维性包膜,囊内肿瘤细胞排列成乳头状或筛状,可见明显的纤维血管轴心及大汗腺特征,局部有小灶性坏死及钙化。免疫组化染色p63、CD10、calponin、CK5/6、SMA、S-100、CK14在乳头轴心及囊腔外周均未发现肌上皮细胞,前哨淋巴结活检未见转移。2例最终诊断:例1,乳腺硬化性导管内乳头状瘤伴不典型大汗腺增生,例2,乳腺包裹性乳头状癌(大汗腺亚型)。随访7个月及41个月均无复发。结论乳腺良性大汗腺病变可发生异常的肌上皮细胞改变,出现部分甚至所有肌上皮细胞标记阴性以及肌上皮细胞的部分或完全缺失。除应用多种肌上皮细胞标记物外,乳腺大汗腺病变(尤其是大汗腺乳头状病变)的病理诊断需要结合组织结构、细胞形态等进行综合判断。     

三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌临床病理特征差异及与雌激素受体β和表皮生长因子受体表达的关系

  目的  比较三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌在临床病理特征及部分免疫组织化学指标表达上的差异, 并探讨这些免疫组织化学指标的表达与三阴乳腺癌临床病理特征及预后的关系。  方法  2010年1月至2013年12月北京协和医院收治的经组织病理确诊的乳腺癌患者共863例, 其中三阴乳腺癌患者135例, 非三阴乳腺癌患者728例。分析三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌患者在发病年龄、病理类型、肿瘤大小、分化程度、肿瘤分期、是否有淋巴结转移、是否累及乳头以及手术方式等临床病理特征方面的差异。通过免疫组织化学法检测135例三阴乳腺癌患者与经单纯抽样法选取的135例非三阴乳腺癌患者中雌激素受体β(estrogen receptor β, ERβ)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、P53、Ki67的表达, 分析上述指标在两类乳腺癌中的表达差异。进一步通过单因素生存分析探讨三阴乳腺癌患者的预后相关因素。  结果  三阴乳腺癌中浸润性导管癌的比例高于非三阴乳腺癌(86.7%比65.2%, P < 0.001), 发病年龄低于非三阴乳腺癌[(46.0±10.6)岁比(51.0±13.3)岁, P < 0.05];三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌在淋巴结转移、临床分期、肿瘤大小、分化程度、手术方式方面差异亦有统计学意义(P < 0.05);三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌在肿瘤累及乳头的比例差异无统计学意义(P > 0.05)。免疫组织化学结果显示, 三阴乳腺癌中ERβ阳性表达率较非三阴乳腺癌显著降低(63.7%比75.6%, P < 0.05), 而EGFR阳性表达率显著升高(62.2%比33.3%, P < 0.05);P53、Ki67在三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌中的表达差异无统计学意义(P > 0.05)。与非三阴乳腺癌相比, 三阴乳腺癌的总体生存率(overall survival, OS)和无复发生存率(relapse-free survival, RFS)更低(P < 0.05)。三阴乳腺癌单因素生存分析结果显示, ERβ阴性表达与EGFR阳性表达均与三阴乳腺癌的不良预后相关(P < 0.05)。  结论  相较于非三阴乳腺癌, 三阴乳腺癌有明显不同的临床病理特征:发病年龄较低、原发肿瘤体积较大、分化程度低、易发生淋巴结转移、ERβ阳性表达率较低、EGFR阳性表达率较高、OS及RFS较低。ERβ和EGFR可能成为重要的三阴乳腺癌预后判断指标。     

结肠直肠癌RAS及BRAF基因突变检测的意义

结肠直肠癌的发病率位居全球恶性肿瘤第二位,每年有超过100万例的新增患者,且每年约有608 000例患者死于转移性结肠直肠癌及其相关的临床并发症[1]。即使采用细胞毒药物联合方案化疗,转移性结肠直肠癌患者的中位生存时间也仅从6个月延长至约2年。分子靶向治疗开启了肿瘤诊疗的个体化时代,同时也为转移性结肠直肠癌患者的治疗提供了新选择。仅2005年至2010年,美国临床肿瘤学会年度进展报告中就有5项与结肠直肠癌相关的靶向治疗研究入选年度重大研究进展,其中     

中国人群胰腺癌与胃癌HER2/neu基因表达

  目的  探讨胰腺癌与胃癌组织中HER2/neu基因表达状态及其在治疗与评估临床结局中的作用。  方法  应用免疫组织化学和多色荧光原位杂交技术, 检测北京协和医院手术切除的81例胰腺导管癌及癌旁胰腺组织和100例胃癌及癌旁胃组织标本中HER2/neu蛋白表达及基因状态的变化, 分析HER2/neu蛋白表达与基因状态间的关系及其与胰腺癌和胃癌临床病理改变间的关系。  结果  免疫组织化学显示, 81例胰腺癌组织中9例(11.1%)HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+), 100例胃癌组织中13例(13%)HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+); 荧光原位杂交结果显示, 81例胰腺癌组织中15例(18.5%)HER2/neu基因扩增, 100例胃癌组织中11例(11%)HER2/neu基因扩增。胰腺癌HER2/neu基因扩增与淋巴结转移有显著相关性(P=0.001)。胃癌组织中6例HER2/neu蛋白3+病例均显示HER2/neu基因扩增, 且胃癌组织HER2/neu蛋白表达与其基因扩增有显著相关性(P < 0.0001)。无论是癌旁胰腺组织还是癌旁胃组织均未检测到HER2/neu蛋白表达及基因扩增。  结论  胰腺癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增不一致, 而胃癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增有显著相关性。HER2/neu基因异常可能在胰腺癌及胃癌的发生发展中起着重要作用, 对胰腺癌及胃癌患者进行HER2/neu基因状态检测可能对其靶向治疗具有一定的指导意义。     

层黏连蛋白对胰腺癌细胞内在性耐药的影响及其机制

  目的  探讨层黏连蛋白(laminin, LN)对胰腺癌细胞内在性耐药的影响, 并探讨其作用机制。  方法  选择胰腺癌细胞系AsPC-1, 检测LN对盐酸吉西他滨(健择, gemcitabine, Gem)的细胞毒性及对Gem诱导细胞凋亡能力的影响。通过Western blot等方法检测LN对下游信号通路的影响; 在AsPC-1中, 过表达黏着斑激酶相关非激酶(focal adhesion kinase-related non-kinase, FRNK)或应用PF-573, 228抑制黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)磷酸化与活性, 检测FAK及其下游信号的抑制对LN作用的影响。  结果  在胰腺癌细胞系AsPC-1中, LN处理使Gem的细胞毒性及Gem诱导细胞凋亡的能力显著降低。Gem作用72 h后, LN处理组细胞存活率为57.71%±6.08%, 形成的克隆数目为55.33±5.01;而在无LN包被组, 细胞存活率与形成的克隆数目分别为36.65%±4.14%及31.43±4.62(P均 < 0.05);LN处理组Annexin V标记阳性细胞百分数(41.00%±5.46%)较无LN处理组(55.70%±3.44%)显著下降(P < 0.05)。LN能够时间依赖性上调AsPC-1细胞的FAKTyr397位点及Akt磷酸化水平, LN还可以显著增加AsPC-1细胞的survivin蛋白表达水平及BAD Ser-136位点磷酸化水平。过表达FRNK或应用PF-573, 228能够显著抑制FAK磷酸化水平及其下游通路的活化, 并能够对抗LN对胰腺癌内在性耐药的效应。应用PF-228可以使LN处理后Gem诱导的AsPC-1细胞凋亡率从26.77%±0.49%升高至38.53%±2.83%(P < 0.05)。  结论  细胞外基质蛋白LN能够诱导胰腺癌细胞系对Gem产生内在性耐药。LN影响胰腺癌细胞内在性耐药的具体机制可能与FAK磷酸化及其下游PI3K-Akt通路活化、Bad Ser-136位点磷酸化与survivin表达水平改变有关, FAK靶向治疗与Gem联合在胰腺癌治疗中具有重要的潜在应用价值。     

Cyclin D1在乳腺浸润性小叶癌的表达及其意义

  目的  探讨Cyclin D1在乳腺浸润性小叶癌中的表达及其意义。  方法  采用免疫组化染色方法对75例具有经典型乳腺浸润性小叶癌结构的标本进行Cyclin D1免疫组化检测。  结果  Cyclin D1阳性表达率为93.33%(70/75), 其中41例(54.67%)呈弥漫强阳性表达(3+, 6~7分), 21例(28%)呈中阳性表达(2+, 4~5分), 8例(10.67%)呈弱阳性表达(1+, 2~3分); 仅有5例(6.67%)呈阴性表达(0~1分)。Cyclin D1的阳性表达在患者年龄是否≥ 50岁、肿瘤最大径是否≥ 2 cm、淋巴结是否有转移、是否累及乳头间质及其下大导管、雌孕激素受体有无及P53是否突变等因素的分组中无统计学差异(P > 0.05);而Cyclin D1阳性表达程度与淋巴结是否有转移具有一定的负相关性(P < 0.05)。  结论  Cyclin D1在乳腺浸润性小叶癌中呈过表达状态, 该蛋白过表达提示其在基因水平上可能出现了某种程度的异常, 这一假设尚需进一步行基因检测加以证实。     

RNA干扰质粒对胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2表达的影响

  目的  探讨RNA干扰质粒抑制胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2的表达对胰腺癌细胞生长和凋亡的影响, 并初步探讨其作用机制。  方法  选择胰腺癌细胞系Panc-1, 构建特异性抑制AKT2表达的RNA干扰质粒, 瞬时和稳定转染胰腺癌细胞, 采用MTT法及软琼脂克隆形成实验检测胰腺癌细胞生长能力, Heochst染色及Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况, 通过Western blot方法检测凋亡蛋白caspase-3表达; 并进行裸鼠移植瘤体内转染实验。  结果  采用RNA干扰质粒沉默胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2, 能够有效抑制胰腺癌细胞Panc-1体外生长能力、促进细胞凋亡, 诱导凋亡激酶caspase-3的表达; 动物体内实验结果显示, 干扰质粒能够有效抑制胰腺癌细胞系Panc-1在动物体内的成瘤能力。  结论  RNA干扰质粒抑制原癌基因AKT2表达, 可有效抑制胰腺癌细胞生长, 促进凋亡, 针对原癌基因AKT2的基因治疗对胰腺癌具有重要的潜在应用价值。