CD1d分子研究进展

传统观点认为, 肽类抗原是引起T淋巴细胞免疫反应的唯一物质.然而近年来研究发现,脂类、糖脂类抗原也可通过CD1d介导特异性激活自然杀伤T细胞(NKT细胞).CD1d是CD1家族中的一员,在胸腺细胞、B细胞亚群、表皮朗罕细胞、树突状细胞亚群、肠道上皮细胞中表达,是一类功能类似于MHCⅠ类分子又独立于MHCⅠ分子之外的具有抗原提呈作用的非多肽性跨膜糖蛋白分子.CD1d分子激活NKT细胞后具有抗肿瘤、抗病毒、抗病菌作用.因此,成为国内外学者研究热点.本文拟对CD1d分子的最新研究进展作一综述.     

PINK1通过磷酸化HDAC3对弥漫大B细胞淋巴瘤CD20表达的影响

目的 探究PTEN 诱导激酶（PINK1）通过磷酸化组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）CD20表达的影响。方法 采集DLBCL细胞系OCI-Ly7，取部分随机分为对照组，sh-PINK1组、sh-Con组，其中对照组细胞不作任何处理，sh-PINK1组细胞予以PINK1敲低处理，sh-Con组作抑制对照。比较各组细胞中PINK1、CD20 mRNA表达水平、HDAC3 、p- HDAC3 Ser424蛋白表达水平；分离sh-PINK1组、sh-Con组细胞质及细胞核，比较个两组细胞质及细胞核中PINK1、p- HDAC3 Ser424、CD20蛋白表达水平。取余下OCI-Ly7细胞系随机分为DMSO组、RGFP966组、Con组，其中Con自细胞不作处理，而RGFP966组细胞采用10μM HDAC3特异性抑制剂RGFP966处理24小时，DMSO组细胞作抑制剂对照。比较各组细胞中CD20蛋白表达水平。结果 Sh-PINK1组细胞PINK1mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组，CD20mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组（P＜0.05）。Sh-Con组细胞PINK1、CD20mRNA及蛋白表达水平与对照组相比差异无显著性（P＞0.05）。Sh-PINK1组细胞p- HDAC3 Ser424蛋白表达水平显著低于对照组（P＜0.05）。Sh-Con组细胞p- HDAC3 Ser424蛋白表达水平与对照组相比差异无显著性（P＞0.05）。在细胞核中，sh-PINK1组PINK1、p- HDAC3 Ser424蛋白表达水平均显著低于对照组（P＜0.05）。在细胞质中，sh-PINK1组CD20蛋白表达水平显著高于对照组（P＜0.05）。RGFP966组OCI-Ly7细胞CD20蛋白表达水平显著高于Con组（P＜0.05）。Con组OCI-Ly7细胞CD20蛋白表达水平与DMSO组相比差异无显著性（P＞0.05）。结论 在弥漫大B细胞淋巴瘤中，细胞核PINK1可磷酸化HDAC3的Ser424位点进而激活HDAC3，最终达到转录抑制CD20表达的作用，而敲低PINK1表达或阻断HDAC3表达可显著促进CD20表达。     

缺铁性贫血患儿123例免疫功能低下相关分析

目的　探讨缺铁性贫血患儿反复感染与机体免疫功能的相关性。方法　采用免疫萤光法检测缺铁性贫血患儿 12 3例与同期 10 1例健康儿童T细胞亚类。结果　本组患儿T细胞亚类CD3 、CD4 降低 ,CD 8升高 ,CD 4 /CD 8比值下降。结论　缺铁性贫血患儿反复感染与机体免疫功能受损有关     

T细胞亚群及共刺激分子表达与系统性红斑狼疮免疫病理的关系

目的：探讨T细胞亚群及共刺激分子表达与系统性红斑狼疮免疫病理的关系。方法；采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测技术对系统性红斑狼疮（SLE）患者和正常人外周血T细胞亚群及外周血单个核细胞膜表面共刺激分子的表达进行分析。结果：（1）与正常人相比，SLE患者CD3^ ,CD4^ T细胞亚群显著减少，CD4／CD8比例失调，双标记CDr^ CD28^ ,CD8^ CD28^ T细胞亦显著减少；（2）患者共刺激分子CD28表达显著降低，4－1BB分子表达显著增高；（3）患者T细胞CD4／CD8与抗核抗体呈负相关，共刺激分子4－1BB与抗核抗体，尿蛋白呈正相关，而与CD4^ CD28^ T细胞亚群呈负相关。结论：T细胞亚群及共刺激分子表达异常在系统性斑狼疮发病机制中可能具有重要作用。     

新生儿感染性肺炎T细胞亚群与免疫球蛋白的关系探讨

目的 :探讨新生儿感染性肺炎T细胞亚群与IgG及其亚类的关系。方法 :对 111例感染性肺炎患儿和 3 0例对照组新生儿T淋巴细胞亚群、IgG及其亚类进行检测和分析。结果 :CD3、CD4细胞数量为肺炎组 <对照组 (P <0 .0 5 )。其中 ,CD3、CD4细胞数量为细菌性肺炎组 <对照组 (P <0 .0 5 )。CD8、CD4/CD8、IgG、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4肺炎各组和对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :当新生儿因感染而出现免疫功能紊乱时 ,应首先纠正细胞免疫缺陷 ,合理补充免疫球蛋白     

新生儿脐带血T细胞亚群的流式细胞仪检测

目的：检测我国新生儿脐带血T细胞亚群的变化.方法：使用全自动血液分析仪进行血常规检测;荧光素标记的抗CD4/抗CD8/抗CD3和抗CD4/抗CD25/抗CD3单克隆抗体对血液细胞表面分子进行免疫荧光染色,用流式细胞术进行各细胞亚群计数和分析.结果：新生儿脐带血中红细胞（RBC）计数、血红蛋白（Hb）含量、白细胞（WBC）计数、淋巴细胞百分比与成人外周血有显著性差异.新生儿脐带血组中CD3^＋T细胞、CD3＇CD4^＋T细胞、CD3^＋CD8^＋T细胞、CD4^＋CD8^＋T细胞、CD4^＋CD25^high调节性T细胞、CD4^＋CD25^intT细胞、CD4^＋CD25^-T细胞绝对计数及其在各自细胞亚群中的百分比均存在显著性差异.结论：中国正常新生儿脐带血与成人外周血的RBC、Hb、WBC及T细胞亚群检测结果存在显著性差异,这与新生儿免疫机制发育不完全是相符合的.     

人外周血NK细胞亚群的生物学特性

目的 探讨人外周血NK细胞亚群的生物学特征.方法 利用多种荧光标记抗体进行细胞表面和细胞内细胞毒效应分子染色,再利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析NK细胞亚群的多样性和生物学特征.结果 根据CD56和CD16分子表达与否将NK细胞分为CD56+、CD56+CD16+和CD16+三个亚群.CD56+、CD56+CD16+和CD16+NK细胞亚群表面CD95、NKG2D及细胞内穿孔素和颗粒酶B的表达存在明显差异,CD56+NK细胞亚群明显低于CD56+CD16+和CD16+NK细胞亚群,差异有统计学意义(P<0.05),而CD56+CD16+和CD16+NK细胞亚群之间则差异无显著性(P>0.05).结论 NK细胞乃异质性群体,随着CD56表达减少和CD16表达增加,其生物学功能逐渐成熟.     

小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离纯化及鉴定

目的:调节性T细胞(Treg)是近年来免疫学研究的热点.文中研究获取高纯度Treg的方法及其表型的鉴定.方法:流式细胞术(FACS)分析正常小鼠脾脏中CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25-3个细胞亚群的表型;采用二步磁性细胞分选法(MACS)纯化小鼠脾细胞中CD+CD25+Treg,并对分离后的细胞表型进行鉴定.结果:①依CD25表达水平不同将小鼠天然CD4+T细胞划分为3群,转录因子Foxp3、细胞毒T淋巴细胞相关分子-4( CTLA-4/CD152)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR )、CD69在CD4+CD25+细胞亚群呈显著性高表达(P<0.01),CD4+CD25+T细胞主要存在于CD45RB低表达细胞亚群,CD28的表达在CD4+CD25+细胞亚群明显下降(P<0.05).②使用二步MACS法从正常小鼠脾脏中分离CD4+CD25+T淋巴细胞的得率为1%～1.2%,纯度为87.29%～92.04%.FACS分析结果显示,Foxp3优先表达于CD4+CD25+T细胞亚群,表达率为(66.60±1.03) %,而在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群呈低水平表达,分别为( 23.97±2.00)%和(16.78±3.24%).CTLA-4在CD4+CD25+T细胞亚群表达率为(77.37±1.67) %,明显高于在CD4+ 和CD4+CD25-T细胞亚群的表达[(21.97±2.39)%和(18.04±3.16)%].纯化的CD4+CD25+T细胞亚群表现为CD127的低表达.结论:MACS阴性加阳性二步分选法避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+ Treg细胞表型及功能特征的细胞.     

尿路感染患者Th细胞亚群的变化和临床意义

目的:观察研究尿路感染患者Th细胞亚群的变化探讨其临床意义.方法:采用流式细胞仪技术,检测32例尿路感染患者外周血Th细胞亚群(Th1、Th2、Treg、Th17)与10例健康者相比.结果:尿路感染患者CD3+4+T细胞(Th细胞)比例较健康者显著上升,差异有统计学意义,CD3+T细胞、CD3+8+T细胞比例较健康者无显著差异,CD4+/CD8+T细胞比例上升.Th1、Th2、Th17细胞比例较健康者显著上升,差异有统计学意义.Treg细胞比例较健康者无显著差异.Th1/Th2较健康者降低,但无统计学差异.结论:尿路感染患者T细胞亚群和Th细胞亚群的失衡,存在着免疫紊乱.     

短期体外扩增对脐带血干／祖细胞归巢相关功能影响的研究

目的 探讨体外扩增对脐血(UCB)于/祖细胞(HSPC)的归巢相关功能的影响.方法 将从新鲜UCB中纯化CD34 细胞接种于无血清无基质悬浮扩增体系,分别于培养4、7、10和14d检测扩增细胞归巢相关黏附分子的表达、黏附功能和趋化功能变化.结果 [1]表达各种黏附分子的CD34 细胞亚群的数量在扩增过程中明显增加(7～32倍),而且扩增后CD34 细胞表面黏附分子CD11a、CD49d的表达与原代CD34 细胞比较升高,CD62L、CD54和CD49e的表达则有不同程度的下凋;[2]在前7d的扩增中,CD34 细胞与FN间的自发黏附率和SDF-1诱导黏附率均呈上升趋势,扩增10d后呈下降趋势.[3]在前4d的扩增中,CD34 细胞的趋化因子受体CXCR-4的表达及体外迁移能力呈上升趋势,扩增7d后呈下降趋势.结论 所建立的培养体系1周内可以提高UCB HSPC归巢相关功能,而继续扩增则不利于细胞这些能力的保持.     

rLukS-PV体外诱导人急性髓系白血病细胞THP-1分化作用研究

目的：研究金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞毒素亚组分( LukS-PV)对人急性髓系白血病细胞THP-1的诱导分化作用,为寻求白血病新的靶向治疗药物奠定基础。方法分别采用0、0．50、1．00、1．50μmol/L体外重组PV-杀白细胞毒素亚组分LukS-PV( rLukS-PV)体外刺激THP-1细胞24、48 h。倒置显微镜、瑞氏-吉萨姆染色镜检等方法观察rLukS-PV作用前后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞表面特异性抗原CD11b、CD14,荧光显微镜观察细胞吞噬功能。结果经rLukS-PV刺激的THP-1细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁,且呈梭形。细胞体积增大,胞质增多,核质比例缩小,细胞核呈肾形、三角形或不规则形,偏于一侧。细胞表面CD11b、CD14表达增加,以CD14增加较为显著,细胞对荧光颗粒吞噬功能明显增强。以上作用有明显的时间和剂量依赖性。结论 rLukS-PV具有诱导THP-1细胞向单核-巨噬细胞定向分化的作用,有望成为一种新的髓系白血病靶向治疗药物。     

Establishment and biological characteristics of human multiple myeloma cell line CZ-1

Background There were only 3 multiple myeloma (MM) cell lines established in China. In this study, we succeeded in establishing a novel MM cell line and analyzed its biological characteristics. Methods Mononuclear cells isolated from the peripheral blood (PB) and bone marrow (BM) of a patient with advanced MM (λ light chain type ) were cultured in medium. Cell morphology was analyzed by Wright-Giemsa-staining and cytochemical staining, immunophenotyping by flow cytometry and cytogenetic analysis by chromosome RHG-banding technique. Quantitative fluorescent polymerase chain reaction (PCR) was used to detect Epstein-Barr virus (EBV) DNA. Results The established cell line could survive and proliferate in the presence of feeder cells or conditioned medium. The cells secreted λ light chain and were negative for EBV. The Wright-Giemsa-staining showed typical plasmablast or plasma cell morphology. The cytochemical staining of the cells showed the following reactivity patterns: positive for acid phosphatase, negative for myeloperoxidase.The immunoprofile of the cells was concordant with that of MM cells: positive for CD10, CD28, CD38,CD138, CD56, CD49d, CD44, CD54 and CD58, negative for CD19, CD40, CD95, CD95L, CD34, CD2 and CD5. The cytogenetic analysis showed complex chromosome abnormality of i(1q ),8q ,13q ,i(17q),i(18q)and M.There was no difference in morphology, immunophenotype and cytogenetics between cells from PB and BM. Conclusions An MM cell line secreting λ light chain named CZ-1 was established. The cells from both PB and BM have the same biological characteristics.     

肝细胞肝癌(HCC)中PDGF-A的表达及其临床意义

 目的    阐明血小板源性生长因子A(platelet-derived growth factor A,PDGF-A)在人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法  在手术切除的50例HCC组织中,应用定量RT-PCR的方法检测PDGF-A mRNA水平,并分析其与临床病理分期之间的关系。采用Western blot检测正常肝细胞株L02和7株肝癌细胞株中PDGF-A蛋白质水平。运用免疫组化方法在43例HCC石蜡组织中检测PDGF-A蛋白质水平。再利用免疫荧光双染色方法检测HCC组织中间质区域炎症细胞中PDGF-A与炎症细胞标志物(CD4、CD8、CD19和CD68)共表达情况。结果    与相应癌旁肝组织相比,HCC癌组织PDGF-A mRNA水平升高,约50%(24/50例)癌组织PDGF-A mRNA水平是癌旁肝组织的2倍及以上,这种差异在BCLC 0期和C期的HCC病例中更为显著。PDGF-A蛋白质见于L02、SMMC-7721、HCCLM3和MHCC97-H细胞株,而HepG2、Hep3B、Huh7和BEL-7402细胞株未检测到该蛋白质。近60%的HCC病例中,肝癌细胞表达PDGF-A,阳性染色有两种分布方式:弥漫于胞质内及在细胞质/细胞膜局部聚集。PDGF-A也大量分布于肿瘤间质区域和紧邻癌组织间质区域的炎症细胞(CD4+、CD8+、CD19+和CD68+)中。结论    HCC癌组织PDGF-A基因表达高于癌旁肝组织,在早期和进展期(BCLC 0和C期)病例更为明显;PDGF-A蛋白表达于HCC癌细胞和间质炎症细胞。     

西宁地区居民鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中细胞毒蛋白的表达及其与EB病毒感染的关系

目的 探讨西宁地区居民鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中细胞毒蛋白的表达及其与EB病毒(EBV)感染的关系.方法 以西宁地区和西安地区鼻腔NK/T细胞淋巴瘤各55例石蜡标本为研究对象,同部位B细胞淋巴瘤20例为对照,采用免疫组织化学方法检测CD45RO、CD3、CD20、CD56、TIA-1确定肿瘤细胞的免疫表型.采用原位杂交技术检测EBV编码的mRNA(EBER).结果 西宁地区55例鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中CD45RO阳性55例(100％),CD3阳性50例(90.9％),TIA-1阳性36例(65.5％),CD56阳性30例(54.5％),EBER阳性50例(90.9％);西安地区55例鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中CD45RO阳性55例(100％),CD3阳性52例(94.5％),TIA-1阳性32例(58.2％),CD56阳性33例(60％),EBER阳性35例(63.6％);两地CD20均阴性.20例面部B细胞淋巴瘤中CD45RO、CD3、TIA-1、CD56均阴性,CD20均阳性,EBER阳性2例(10％).结论 西宁地区鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中EBV感染率明显高于西安地区,提示EBV感染与西宁地区鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的相关性更强.TIA-1对NK/T细胞淋巴瘤的标记有很好的敏感性和特异性,但无地区性.     

人胎儿脐带间充干细胞培养及其鉴定

目的建立人脐带间充质干细胞（MSC）培养方法,观察其生长情况并进行抗原特异性鉴定.方法获取足月胎儿人脐带,剪碎成组织块,用组织块贴壁法获取MSC.1周时去除组织块,用0.125%胰蛋白酶消化传1～5代.观察形态学变化.用CD44、CD34抗体染色鉴定培养细胞.结果培养第1周,有少量梭形细胞从组织块内迁出,传代后细胞生长加快,细胞形成仿锤形.CD44抗体染色为阳性,CD34染色为阴性,证明其具有MSC特性.结论通过组织块剪碎贴壁法和组织化学染色鉴定获得了MSC,可用于后续研究.     

CD133在人NSCLC组织和细胞系中表达的初步研究

目的观察经典的肿瘤干细胞标记分子CD133在人NCSLC组织和肺癌细胞系中的表达情况。方法用CD133多抗经免疫组化染色观察12例不同类型NSCLC组织中CD133的表达,经免疫荧光染色观察CD133在H446、SPC-A1肺癌细胞中的表达。用AC133单抗经流式和激光共聚焦观察人NSCLC组织、肺癌细胞系中糖基化CD133抗原(AC133抗原)的免疫活性。结果CD133多抗染色发现CD133在NSCLC组织、正常肺组织、H446细胞和SPC-A1细胞中普遍表达。AC133单抗染色发现不同类型NSCLC组织均有少量AC133( )细胞,而在H446、SPC-A1肺癌细胞及正常肺组织中未检测到AC133( )细胞。结论不同类型NSCLC组织中有少量的AC133( )细胞,为深入研究肺癌发生、发展的分子机制提供了新的靶点。     

克隆化的人骨髓间充质干细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的:分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),建立克隆化扩增的细胞系并初步鉴定其分化特性和细胞的分子标记.方法:利用间充质干细胞贴壁生长的特性,显微镜下挑取原代单个成纤维样生长单位中的细胞,逐步扩大培养,最终得到克隆化扩增的hMSCs.选择有利于其生长的血清,低密度培养,传70%～80%生长汇合时传代保种.RT-PCR检测其Oct-4、SDF1、CD49a、CK19、c-met基因的表达;流式细胞术检测细胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD44、CD29、CD90、HLA-1和HLADR;体外向骨、软骨、脂肪细胞方向诱导分化鉴定其分化潜能.结果:建立了人骨髓间充质干细胞系并在体外实现了克隆化扩增,该细胞系在体外连续培养达60个细胞倍增时间仍保持多向分化的潜能.细胞不表达CD34、CD45、CD14、HLA-DR,但表达Oct-4、SDF-1、CD49a、CK19、c-met、CD44、CD29、CD90、HLA-1.体外能诱导出骨、软骨、脂肪细胞.结论:得到了一个可稳定传代的克隆化扩增的人骨髓间充质干细胞系,该细胞系在体外可以分化为骨、软骨、脂肪细胞,并表达Oct-4、CK19和c-met.     

Human ovarian neoplasm cell CD147 stimulates production and activation of matrix metalloproteinases in co-cultures with mouse fibroblasts

Objective: To investigate the expression of CD147 on human ovarian neoplasm cell lines and its influence on production and activation of matrix metallproteinases (MMPs). Methods : The expression of CD147 on different human ovarian neoplasm cell lines was studied by western blotting. Co culture was carried out to investigate the stimulative effect of the positive expression CD147 cell HO-8910 on the production of MMPs of fibroblast cell in vitro. Zymography and immune blotting were used to study the production and activity of positive MMPs, at the time, to explore the relation between CD147 and MMPs. Results: CD147 was positively presented in 2 ovarian neoplasm cell lines (HO-8910, 3-AO), but in SKOV3, TC-1,NIN3T3 cell was negative. MMP-2 and MMP-9 were detected by HO-8910 cell line, mouse fibroblast cell and co-culture cells ； but the expression in co-culture cell is obviously higher than individual cultures of each type alone. CD147 stimulated MMPs in dose-dependent manner. Conclusion: CD147 causes increased production and activation of MMP-2, MMP-9. CD147 is probably a indirect marker of some ovarian cancer cells with invasion and metastasis.     

激发型抗CD40单抗介导恶性肿瘤细胞凋亡及其机制探讨

目的 探讨激发型CD40单克隆抗体对人B淋巴细胞恶性肿瘤的生物学效应及其机制。方法 将激发型CD40单克隆抗体5C11加入肿瘤细胞的体外培养体系，采用细胞计数，流式细胞仪等方法分析单克隆抗体5C11对不同肿瘤细胞株的作用。结果 5C11能引起CD40表达的多发性骨髓瘤（MM）细胞株XG2和恶性淋巴瘤细胞株Daudi发生同型聚集，抑制其生长并介导凋亡；CD40分子介导的XG2和Daudi细胞凋亡作用与可溶性TNF产生无关。结论 激发型CD40单克隆抗体通过诱导B细胞恶性肿瘤细胞的凋亡。抑制肿瘤细胞的体外生长。     

人成纤维细胞饲养层的制备及其对胚胎干细胞生长支持作用

 目的 为建立不含动物细胞成分的人胚胎干细胞( human embryonic stem cell, hESc)体外培养系统，本实验欲用人包皮成纤维细胞(human postnatal foreskin fibroblasts, hPFF)制备细胞饲养层并观察其对hESc体外生长的支持功能及生物学特性的维持作用。方法 利用儿童阴茎包皮环切术后遗弃包皮组织分离培养成纤维细胞，纯化增殖细胞，采用35Gyγ射线照射灭活法制备成饲养层。将hESc（HS181细胞株）接种在该饲养层上，连续传代至20代，倒置显微镜观察其形态学变化，测定其细胞碱性磷酸酶活性，类胚体形成实验及干细胞转录因子表达，严重联合免疫缺陷的小鼠(severe combined immune deficiency mice, SCID)体内畸胎瘤形成及体内全能分化特性实验对hESc生物学特性进行鉴定。 结果 hPFF体外培养过程中生长增殖旺盛，连续传20代以上能保持正常细胞形态学和生物学特性。经γ射线照射使其停止增殖，24h内能较好地保持细胞活力和形态学特征，具备饲养层细胞基本条件。HS181 hESc在hPFF上传到20代任能较好地保持未分化状态，细胞呈克隆性生长，高度表达碱性磷酸酶及Oct-4、Nanog等胚胎干细胞转录因子；悬浮法培养连续传20代的hESc可获得由3个胚层细胞所形成的类胚体（Embryoid bodies, EB）结构, 可检测到CD90、Flt-1、Nestin基因的表达，证明得到的类胚体中含了3个胚层细胞，说明hESc具有体外多能干性特征。体内全能分化实验显示：将第20代的hESc接种到SCID小鼠体内,6周后可形成畸胎瘤,组织学切片分析其包含了源于全部3个胚层的各种分化细胞,直接证明其具有体内多向分化的全能性。结论 hPFF可作为一种来源丰富，取材方便的人源化饲养层细胞，能有效地支持hESc体外生长。克服了目前hESc建系和体外培养过程中使用动物细胞饲养层带来的异种蛋白污染和致病微生物的危险，初步解决了hESc临床应用的生物安全性问题。