他莫昔芬与γ-干扰素联合抗人乳腺癌细胞株的作用及其机制研究

目的: 探讨他莫昔芬(TAM)与 γ-干扰素(γ-IFN)联合抗乳腺癌细胞株的作用及其机制。方法:在体外培养条件下，分别或联合应用γ-IFN,TAM或雌二醇（E2）作用于ER阳性的MCF-7人乳腺癌细胞株，用MTT比色法分析细胞生长抑制作用;用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期分布、凋亡率及用药前后Bcl-2,Bax,Fas,FasL及Caspase-8蛋白的变化;荧光分光光度仪检测Caspase-3活性。结果:TAM能抑制ER阳性乳腺癌细胞的生长，阻滞细胞周期于G0/G1期，并可诱导细胞凋亡;同时，TAM能拮抗外源性雌激素对MCF-7细胞的促生长作用。γ-IFN预处理细胞24h后，TAM抗乳腺癌细胞的作用增强。联用γ-IFN与TAM后，细胞Bcl-2蛋白表达下调，Caspase-8表达上调;但药物处理前后，细胞Bax，Fas，FasL蛋白表达水平及Caspase-3活性未见明显变化。结论:体外条件下，TAM通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡而发挥抗ER阳性乳腺癌细胞作用;γ-IFN能加强TAM的抗乳腺癌作用。两者作用机制可能系通过下调Bcl-2表达和上调Caspase-8的表达。     

肼苯哒嗪与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的研究

目的观察肼苯哒嗪对雌激素受体(ER)α阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因诱导表达作用；肼苯哒嗪联合三苯氧胺(TAM)对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法肼苯哒嗪处理ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测ERα mRNA表达；肼苯哒嗪、TAM分别或联合作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞，噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率。透射电镜观察细胞超微结构。结果肼苯哒嗪能诱导MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞表达ERα mRNA。当肼苯哒嗪浓度≥10μmol／L可抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为11．20％和8．71％；TAM对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、细胞周期无影响；联合用药组显著抑制细胞生长，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为48．8％和53．1％。对照组和TAM组细胞形态较好；肼苯哒嗪作用组细胞变性改变多见；联合用药组主要表现为细胞坏死，但未发现有凋亡小体的存在。结论肼苯哒嗪能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERα mRNA，恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性，联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长，诱导细胞凋亡，从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实验依据。     

5氮2脱氧胞苷与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的体外实验研究

目的观察5氮2脱氧胞苷（5-aza—CdR）对雌激素受体α（ERα）阴性人类乳腺癌细胞株MDA—MB-231和MDA—MB-435ERα基因诱导表达作用;5-aza—CdR联合三苯氧胺（TAM）对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法应用甲基化特异性PCR（MSP）检测MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞和20例ERα阴性乳腺癌组织ERα基因核心启动子区CpG岛甲基化情况;5-aza—CdR处理MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞,逆转录PCR（RT—PCR）检测ERαmRNA表达;5-aza—CdR、TAM分别或联合作用于MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞,M1T比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率。结果适当浓度的5-aza—CdR能诱导MDA—MB-231和MDA—MB一435细胞表达ERctmRNA,抑制细胞生长、阻滞细胞周期于G0／G1期,诱导细胞凋亡;TAM对MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞生长、细胞周期无影响;而两药联合时能显著抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,凋亡率分别为48、8％和53、1％。结论5-aza—CdR能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERctmRNA,恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性,联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实验依据。     

Bcl-2过度表达对大鼠成骨细胞Bax、Caspase-3表达的影响

目的：探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对大鼠成骨细胞Bax蛋白以及活性Caspase-3表达的影响。方法：将含有Bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染大鼠成骨细胞使之过表达，用免疫组化ABC法检测Bax、Caspase-3活性蛋白表达变化。结果：转染筛选后的阳性克隆细胞表现为Bcl-2表达显著增强。同时Bax蛋白表达下降接近显著性差异，活性Caspase-3表达无明显变化。结论：Bcl-2过度表达对活性Caspase-3表达无影响，但对Bax蛋白表达起下调作用，提示Bcl-2家族成员之间可以相互影响。     

西罗莫司诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡及其机制

目的探讨西罗莫司（SRL）在体外诱导人肝癌细胞株BEL-7402的凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的SRL（5、10、20、30、40和50nmol／L）作用于体外培养的人肝癌细胞株BEL-7402，应用流式细胞仪检测培养24、48和72h时的细胞凋亡情况；Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化；Western Blot法观察BEL-7402细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bcl-xl和Bax基因的表达变化；采用Caspase-3试剂盒检测Caspase-3酶的活性；JCl染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψbm）。结果SRL可诱导BEL-7402细胞凋亡，并与药物浓度和作用时间呈正相关。SRL作用BEL-7402细胞后48h，在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征，凋亡过程中线粒体膜电位下降及Caspase-3酶原蛋白激活，伴有Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论SRL能使抗凋亡蛋白Bcl-2、gcl-xl表达降低，促凋亡蛋白Bax表达上调，线粒体膜电位下降，激活Caspase-3酶原蛋白，从而诱导细胞凋亡。     

莪术醇对胃癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察莪术醇对胃癌细胞株BGC823细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养BGC823细胞,分别加入12.5、25、50、100 mg/L莪术醇培养液,对照组加入10 ml/L无水乙醇培养液,分别孵育24 h和48 h,采用MTT法分析增殖率;应用流式细胞仪检测各浓度莪术醇处理BGC823细胞48 h的凋亡率及细胞周期的分布;分光光度法检测Caspase-3活性;100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,用RT-PCR和Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax和Survivin mRNA和蛋白的表达水平.结果 莪术醇抑制BGC823细胞增殖,并且随浓度的增加和时间的延长而加强;不同浓度莪术醇处理BGC823细胞,均使处于G0/G1期的细胞显著增加,S期细胞明显减少(P＜0.05);细胞凋亡率随莪术醇浓度增加而升高(P＜0.05);Caspase-3活性呈浓度依赖性增加(P＜0.05);100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,Caspase-3、Bax表达均显著升高(P＜0.05),Survivin、Bcl-2表达均显著下降(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05).结论 莪术醇对胃癌BGC823细胞生长具有抑制作用,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进其凋亡.其作用与增强Caspase-3的活性,上调Caspase-3、Bax表达,下调Survivin、Bcl-2表达及降低Bcl-2/Bax比值有关.     

钙离子浓度对人乳腺癌MCF-7细胞Caspase-3,Bax及Bcl-2表达的影响

目的 研究细胞内Ca^2 浓度[Ca^2 ]i的升高对人乳腺癌MCF—7细胞株中Caspase-3,Bax及Bcl—2表达的影响。方法 在体外培养下，经不同浓度thapsigargin(TG)处理的MCF—7细胞株用荧光指示剂Fura-2/AM于单波长荧光分光光度仪上测定细胞内钙离子浓度。用免疫组织化学方法检测Caspase-3，Bax及Bcl—2的表达。结果 随着细胞内钙离子浓度的提高，Bax表达逐渐增强，Bcl-2表达逐渐减弱，而Caspase-3始终呈阴性表达。结论 细胞内钙离子浓度的升高对MCF—7细胞株可诱发不通过Caspase-3途径的细胞凋亡。     

葛根素抑制吡格列酮诱导的成骨细胞凋亡

目的观察葛根素对吡格列酮诱导的成骨细胞凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0.01-100μmol/L)和吡格列酮(20μmol/L)作用于MC3T3-E1细胞24 h后细胞增殖活性影响。流式细胞仪测定葛根素和吡格列酮对MC3T3-E细胞凋亡的影响。Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达情况。结果 1、与对照组相比,吡格列酮组的细胞增殖活性明显下降(P0.05),而0.1-10μmol/L葛根素组细胞增殖活性明显增强(P0.05)。2、与吡格列酮组相比,加入0.1-1μmol/L葛根素后细胞的增殖活性明显增强(P0.05)。3、加入1μmol/L的葛根素后,吡格列酮导致的细胞凋亡率上升受到抑制(P0.05)。4、吡格列酮处理后caspase-3、caspase-8、Bax蛋白的表达上调,Bcl-2蛋白的表达下调,而加入葛根素共同作用后,caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白的表达上调。结论葛根素可以抑制吡格列酮诱导的成骨细胞凋亡。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡及其机制

目的 观察矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)在体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的生物学效应,并初步探讨其分子机制.方法 分别采用不同浓度梯度的C3G处理SGC7901胃癌细胞,MTT比色法检测细胞生长率;激光共聚焦显微镜观察细胞形态改变;TUNEL法分析细胞凋亡率;Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、ICAD蛋白表达的情况.结果 C3G在体外能明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长增殖,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.01).激光共聚焦显微镜下可见Hoechst33258荧光染色细胞呈凋亡特征性改变;TUNEL法检测实验组细胞凋亡率均明显高于阴性对照组(P＜0.01);C3G可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax蛋白的比值,促使Caspase-3酶原蛋白活化,下调ICAD蛋白表达(P＜0.01).结论 C3G具有在体外抑制胃癌细胞增殖的作用,并能诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax降低导致Caspase-3活化、ICAD蛋白表达下降相关.     

三羟基异黄酮诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的：探讨三羟基异黄酮（Genistein）诱导体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及相关机制。方法：体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,不同浓度Genistein作用后,MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果：在Genistein作用下,增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制;细胞凋亡率增加,与对照组相比具有显著性差异（P〈0.05）;Bcl-2的表达下调、Bax、Caspase-3表达增加。结论：Genistein可通过诱导凋亡抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡调控基因的表达有关。     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

Frequency of complications of manipulation of the spine

Summary A survey of all members of the Swiss Medical Association of Manual Medicine was undertaken for the year 1989. Informative data were given by 425 respondents on the frequency of complications of manipulation as related to the spine. The number of thoraco-lumbar manipulations during 1989 (225 working days) was 805 for each respondent, and the number manipulations of the cervical spine 354. Thus, the total number of thoraco-lumbar manipulations was 342 125, and the total number of cervical manipulations was 150 450. The overall incidence of side-effects of transient complications due to cervical spine manipulation such as disturbance of consciousness or radicular signs was 1: 16716. Seventeen patients (ratio 1: 20 125) after manipulation of the lumbar spine presented, in addition to increased pain, a transient sensorimotor deficit with precise radicular distribution. Nine of the 17 patients (ratio 1: 38013) developed a progressive radicular syndrome with sensorimotor defict and radiologically verified disc herniation and had to be referred for surgery. Side effects and complications of cervical and lumbar spine manipulation are rare. Taking in to account the yearly number of manipulations performed by a single physician in Switzerland and the rate of complications, it can be calculated that a physician practicing manual medicine will encoutner one complication due to manipulation of the cervical spine in 47 years and one complication due to lumbar spine manipulation in 38 years of practice. However, it is important that a careful clinical assessment is carried out to avoid complications due to manipulation carried out on the basis of inappropriate indications. Furthermore, the decision as to which technique is indicated for any particular functional disorder of the spine should be made on the basis of rational criteria resting on a knowledge of clinical biomechanics, functional anatomy and neurophysiology. The authors recommend a prospective morbidity study to be carried out among physicians, chiropractors, osteopaths and physiotherapists, taking into account the different indications and therapeutic techniques in relation to complications.     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7–, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20–, MUC2–). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

Oddi括约肌肌电活动实验模型的建立

目的建立研究Oddi括约肌肌电活动的动物模型和实验方法。方法将双极金属钩状电极通过浆膜层置入Oddi括约肌，记录不同条件干预下家兔的Oddi括约肌肌电活动信号，调整电生理实验参数并经放大、滤波及计算机处理后，对其大小、波形、幅度进行分析。结果不同条件干预下的家兔Oddi括约肌的肌电活动在波形、频率、幅度等方面均有明显的不同，具有明显的规律性。重复实验可得到相似的结果。结论使用双极金属钩状电极配以合理的电生理实验参数调整可以稳定地采集到在体的家兔Oddi括约肌肌电活动信号。这为今后广泛、深入地研究Oddi括约肌肌电活动搭建了一个技术平台。     

骨盆骨折的治疗进展

对于骨盆骨折的治疗 ,传统方法以卧硬板床 ,股骨髁上持续骨牵引 ,骨盆兜等保守治疗为主 ,常常引起下肢不等长 ,骶髋痛 ,步态失常等而严重影响生活质量 ,同时长期卧床易引发肺部感染、褥疮、应激性溃疡、泌尿系统结石等并发症而危及生命。下面就骨盆骨折的治疗进展作一综述。1     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。     

复合小剂量阿曲库铵对顺苯磺酸阿曲库铵起效时间的影响

目的观察顺苯磺酸阿曲库铵同时复合阿曲库铵用于全凭静脉诱导的起效时间。方法择期全麻手术患者80例,随机均分为A、B、C、D四组。A组单用3ED95(0.15 mg/kg)顺苯磺酸阿曲库铵作为对照组;另三组分别用3ED95顺苯磺酸阿曲库铵复合阿曲库铵0.05 mg/kg(B组)、0.10 mg/kg(C组)或0.15 mg/kg(D组)。采用TOF-Watch SX肌松监测。静注咪唑安定0.05mg/kg、芬太尼5μg/kg、依托咪酯0.3 mg/kg及相应剂量肌松药,记录起效时间,进行气管插管条件评级。结果B、C、D组肌松起效时间依次加快,均明显短于A组(P<0.01),但B、C、D组之间差异无统计学意义。结论复合小剂量阿曲库铵能缩短3ED95顺苯磺酸阿曲库铵的起效时间。     

静脉皮瓣成活过程的实验研究

我们以兔为实验动物，通过微循环观察及血管内灌注填充剂，研究静脉皮瓣的成活过程。这一过程可分为２个阶段。第一阶段（术后７２小时内）为静脉血营养期：静脉血由静脉干通过小静脉吻合支、微静脉干间吻合支及终末微静脉吻合支回流至另一静脉。术后４８小时内毛细血管内无血液运动。第二阶段（术后７２小时～６周）为动脉血营养及血管改造期：术后７２小时新生血管开始向皮瓣内生长。术后７２无皮瓣动脉同主要来自皮瓣周围正常组织内的新生血管吻合使动脉血分布于整个皮瓣，这是静脉皮瓣成活的关键     

鼻尖、鼻翼缺损修复方法的探讨

１９５７年以来共收治鼻尖、鼻翼缺损１１９例，据情分别采用以下四种方法修复：①全层皮片移植２７例；②游离耳廓复合组织片移植３６例；③鼻唇沟皮瓣移转１２例；④上臂内侧皮管移植４４例，效果较为满意。我们在文章中就选用的原则、手术方法及注意事项等进行了探讨