NKx2.5基因在孕鼠肥胖致胚胎心脏畸形中的表达及意义

目的探讨NKx2.5基因mRNA及其蛋白在肥胖孕鼠胚胎畸形心脏中的表达水平及相关意义。方法 3周龄SPF级SD雌鼠100只,随机分为两组:正常组(40只)给予基础饲料;高脂组(60只)给予高脂饲料。8周后,以高脂组体重超过正常组平均体重的20%且血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量显著高于正常组的作为肥胖雌鼠,随机抽取20只肥胖雌鼠和正常雌鼠分别与雄鼠交配获取肥胖组孕鼠和对照组孕鼠。取孕13、15、17、19 d胚胎鼠心脏,通过切片进行组织学观察以确定心脏畸形情况,采用RT-PCR法检测NKx2.5基因的mRNA表达,采用Western blot方法检测NKx2.5蛋白表达。结果肥胖组孕鼠胚胎心脏畸形率显著高于对照组孕鼠(P<0.01);肥胖组孕鼠各孕龄胚胎畸形心脏NKx2.5基因mRNA及其蛋白表达比对照组孕鼠正常胚胎显著降低(P<0.05)。结论孕鼠肥胖导致胚胎心脏畸形率升高;孕鼠肥胖抑制胚胎心脏NKx2.5基因和蛋白表达,可能导致心脏发生发育缺陷从而造成先天性心脏畸形。     

分泌型晚期糖基化终产物受体对妊娠糖尿病胚胎保护的实验研究

【摘要】目的 研究分泌型晚期糖基化终产物受体（sRAGE）在实验动物罹患妊娠糖尿病（GDM）时的表达差异及对子鼠发育的影响。方法 采用给SD孕鼠空腹一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）25mg/kg的方法建立宫内高血糖孕鼠模型。STZ注射后对小鼠随机分为实验组和对照组,每间隔24小时,实验组孕鼠行尾静脉注射重组sRAGE蛋白（5 mg/kg, 0.2 ml PBS）即为sRAGE组,对照组注射相同剂量的白蛋白溶液。分别于第3、13、19天检测孕鼠血糖、血清AGEs及脑、心脏组织中的RAGE蛋白水平。最后一日剖宫取胎,剥离胎盘,检测胎盘RAGE、NOX2、MCP-1、VCAM-1的mRNA表达水平,探讨血清中AGEs、RAGE表达水平与胚胎发育的关系。结果 实验组孕鼠血清中血糖和AGEs的浓度显著高于对照组(P＜0.05),相关性分析显示血糖与血清中AGEs水平呈显著正相关(r=0.693,P＜0.05);与正常对照组相比,实验组孕鼠的胎盘、脑及心脏组织中活性氧产生,炎症相关基因的mRNA和RAGE蛋白水平显著升高,而sRAGE处理可以部分降低这些活性氧产生、炎症相关基因的表达和RAGE的表达。对照组孕鼠胎盘、脑以及心脏组织中的RAGE蛋白表达极弱,实验组在3种组织中的RAGE表达则明显增强。在sRAGE注射干预后,RAGE蛋白表达与实验组相比显著降低,仍高于对照组。结论sRAGE静脉注射可显著降低孕鼠子代组织中NF-κB的活性,通过调控相关细胞因子发挥对胚胎的保护作用。     

nesprin-1基因在小鼠心脏发育过程中的表达

目的检测小鼠心脏发育过程中nesprin-1基因mRNA和蛋白的表达及亚细胞定位。方法取小鼠胚胎12.5 d(embryo 12.5day,E12.5)、E14.5、E16.5、E18.5以及新生鼠、成年小鼠心脏,应用RT-PCR、Western blot、免疫荧光技术检测胚胎各时间点、新生鼠、成年鼠心脏nesprin-1基因mRNA和蛋白表达及细胞定位。结果在小鼠胚胎E12.5、E14.5、E16.5、E18.5以及新生鼠、成年小鼠心脏组织中,nesprin-1基因mRNA及蛋白均有表达,其表达量随着心脏的发育而逐渐增加,E16.5和E18.5表达最高,成年鼠表达最低。免疫荧光显示,nesprin-1的分布在各个时期均位于核被膜及核周间隙中。结论nesprin-1在小鼠心脏发育过程中表达呈动态变化,在心脏传导系统和心肌细胞发育成熟时期呈高表达,因此推测nesprin-1可能在心脏传导系统和心肌细胞的发育中有重要作用。     

GATA-4基因在大鼠胚胎心脏中的表达

目的:检测GATA-4基因在大鼠胚胎心脏中的蛋白表达变化.方法:取大鼠胚胎12、15、19天心脏,应用Westernblot、免疫组化的方法进行半定量、定位分析.结果:免疫组化显示,GATA-4基因在房室肌、心内膜、心内膜垫、房室瓣及大动脉根部均有表达.Western blot显示.在胚胎12天心脏中,GATA-4基因已有较高表达;在胚胎15天表达明显上调,胚胎19天时表达又有所下降.结论:GATA-4随大鼠胚胎心脏的生长发育呈动态表达,GATA-4与心脏发育密切相关.     

水通道蛋白4、7、8基因mRNA在新生鼠小肠结肠炎模型中的表达

目的：研究水通道蛋白4、7、8基因mRNA在新生鼠小肠结肠炎模型中的表达变化及其临床意义。方法：选取1日龄新生SD大鼠20只,分为实验组（n=10）和对照组（n=10）。实验组鼠放入低氧舱通入99.99%CO2造成窒息持续5min,再迅速通入99%O2复苏持续5min取出,对照组为空气。所有新生鼠均放回母鼠身边喂养至第4天断头处死,取出十二指肠下端至直肠上端的肠道组织,进行荧光定量PCR检测,获取的数据用2-△△Ct相对定量公式及针对该公式开发的REST-2005软件进行运算,计算出R值（目的基因在样品与对照品间表达差异的倍数）及P值。R〈1（P〈0.05）表示基因相对表达下调,反之则上调,差异有统计学意义。结果：与对照组比较,实验组水通道蛋白4、7、8基因表达的R值分别为（0.117±0.129）、（0.140±0.156）、（0.134±0.140）,R〈1（P〈0.05）,水通道蛋白4、7、8mRNA的表达有显著性差异。结论：水通道蛋白4、7、8mRNA在新生鼠坏死性小肠结肠炎的肠组织中表达下降,可能与水通道蛋白构象改变或分布异位有关。     

NOMO1基因在大鼠胚胎心脏发育过程中的表达

目的:检测NOMO1基因在SD大鼠胚胎心脏发育过程中mRNA表达变化及定位,并探讨其在胚胎心脏发育的意义?方法:24只孕鼠随机分为6组,每组4只,分别于妊娠12 d(D12)?15 d(D15)?16 d(D16)?17 d(D17)?19 d(D19)?21 d(D21)时取出胎鼠,取其心脏,采用实时定量PCR(real-time PCR)技术检测心脏组织中NOMO1基因mRNA的表达丰度,并应用荧光原位杂交(FISH)的方法对其进行定位分析?结果:在妊娠D12?D15?D16?D17?D19?D21的胚胎心脏中NOMO1基因mRNA均有表达,且呈由弱到强再减弱趋势,表达高峰出现在D16;该基因主要表达于心外膜中,而在心肌层?心内膜?心瓣膜等处未见表达?结论:NOMO1基因的表达随大鼠胚胎的心脏发育呈动态表达,可能与心脏发育相关?     

大鼠胰腺发育过程中Munc13-1对胰岛素释放功能的影响

目的:研究大鼠胰腺发育不同阶段Munc13-1基因及蛋白表达的变化及Munc13-1在胰岛素释放过程中的作用. 方法:应用显微分离及提取技术获得大鼠胚胎发育12.5d(E12.5),E15.5,E18.5,新生大鼠,出生后21 d(P21)及成年大鼠胰腺组织;另外,从大鼠胚胎发育15 d开始给予孕鼠半量饮食,造成宫内发育迟缓动物模型,提取其新生大鼠胰腺组织. 采用RT-PCR, Real-time PCR和Western blot技术确定Munc13-1的表达情况,并测定不同发育时期血中胰岛素浓度. 结果:胰岛素基因从E12.5开始出现,Munc13-1基因从E15.5开始表达,随着胎龄的增长,二者表达量皆增多. E15.5和E18.5时munc13-1蛋白表达量较少,以后明显增多. 自E18.5即检测到血中胰岛素的存在,随着胚胎的发育,血胰岛素浓度逐渐升高. 宫内发育迟缓新生大鼠比正常新生大鼠血胰岛素浓度低,同时Munc13-1基因及蛋白表达量亦比正常对照组明显减少. 结论:Munc13-1在胰岛素释放过程中的作用,随着胚胎发育期胰岛素分泌的增多表达也增加,宫内发育迟缓新生大鼠胰岛素分泌减少时,Munc13-1的表达亦减少.     

INPP5E 基因影响小鼠胚胎神经管闭合的 分子机制研究

目的 探讨肌醇多聚磷酸5- 磷酸酶（INPP5E）基因影响小鼠胚胎神经管闭合的分子机制。 方法 采用前期复制的神经管缺陷（NTD）小鼠模型,在体视显微镜下观察胚胎表型、苏木精- 伊红染色情况, 测量胚胎顶臀长、体重等指标;重亚硫酸盐测序法检测NTD 组及对照组胚胎发育第11.5 天小鼠胚胎神经组 织中INPP5E 基因启动子区DNA 甲基化情况;实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting 检测胚胎神经组 织中INPP5E 蛋白和mRNA 相对表达量;超高效液相色谱串联质谱法检测胚胎神经组织中叶酸（FA）、5- 甲 基四氢叶酸（5-MeTHF）、5- 甲酰四氢叶酸（5-FoTHF）及同型半胱氨酸（Hcy）水平。结果 NTD 组小 鼠胚胎神经组织INPP5E 基因启动子区甲基化水平、INPP5E 蛋白和mRNA 相对表达量在胚胎发育第11.5 天 时较对照组低（P <0.05）。NTD 组胚胎神经组织的FA 和Hcy 水平较对照组升高（P <0.05）,而5-MeTHF 和5-FoTHF 水平较对照组低（P <0.05）。结论 INPP5E 基因在调节小鼠胚胎神经管闭合中起重要作用。FA 代谢紊乱引起的INPP5E 基因启动子区甲基化水平降低,可能通过影响其表达水平参与NTD 的发生。     

GSIS相关基因在大鼠胚胎胰腺发育后期表达模式

目的探讨大鼠胚胎发育晚期胰腺13细胞GSIS功能相关基因的表达趋势。方法利用显微分离方法分离胚胎15．5d（E15．5）和胚胎18．5d（E18．5）胰腺组织，提取RNA并与大鼠基因组芯片杂交。数据处理后，获得E15．5和E18．5胰腺组织基因表达谱。进而利用RT—PCR对芯片结果进行验证。结果在E15．5至E18．5，肝核因子（hepatocyte nuclear factor，Hnf）1α及4α特异表达，其下游基因胰岛素1（Insl），葡萄糖转运体2（Glut-2）、L型丙酮酸激酶（L—PK）和醛缩酶B（Aldolase B）表达上调，而葡萄糖激酶（GCK）无表达。RT-PCR方法进一步验证，Hnflα及Hnf4α在E18．5特异表达，至初生时，Hnflα表达下调，Hnf4α无表达，GCK明显表达。结论Hnflα及Hnf4α及其下游基因在大鼠胚胎胰腺发育后期出现高表达。     

氟他胺对胚胎期SD大鼠睾丸发育整体基因表达水平的影响

目的研究抗雄激素物质氟他胺（Flu）对胚胎期SD大鼠睾丸发育整体基因表达水平的影响。方法对F0亲代母鼠在孕12～17d时每日皮下注射Flu（6．25mg／kg），于胚胎期20d解剖孕鼠，取出实验组与对照组雄性胎鼠睾丸，提取mRNA，分别用cy5和cy3探针逆转录标记，与Rat 12KcDNA表达谱芯片杂交，荧光扫描分析；同时迅速取出雄性仔鼠右侧睾丸，做免疫组化检测；另将出生后第2d的雄性子代断颈取血清，用睾酮试剂盒测定激素水平。结果芯片结果显示实验组差异表达基因共31条，其中下调基因14条，已知功能基因9条；上调基因17条，已知功能基因7条；一共16条差异表达基因与睾丸组织功能及发育密切相关；免疫组化结果显示合成睾酮两种关键酶蛋白表达降低；且检测睾酮激素水平下降。结论所有证据表明F0亲代母鼠孕期染毒氟他胺能够影响胚胎期雄性SD大鼠的生殖发育，导致出生后雄性子代性分化和性发育异常。     

孕鼠维生素D缺乏对子鼠长骨维生素D受体蛋白表达的影响

目的:研究大鼠孕期维生素D(VitD)缺乏对其子鼠长骨中维生索D受体(VDR)蛋白表达的影响.方法:成熟雌性SD大鼠36只随机分为模型组和对照组各18只,模型组以不含VitD的大鼠饲料避光喂养,对照组以标准饲料正常光照喂养.2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕20天(E20d)、生后1天(B1d)和生后7天(B7d)子鼠左侧股骨.用Western blotting方法检测子鼠股骨VDR蛋白水平的表达.结果:VDR蛋白在E20d、B1d和B7d子鼠股骨的表达量,模型组均显著低于对照组(P均<0.05).结论:孕鼠VitD缺乏可下调子鼠长骨VDR蛋白表达水平,可能为子鼠骨骼发育不良机制之一.     

伤寒杆菌内毒素对GATA-3表达及前房相关免疫偏离形成的影响

目的　观察眼部炎症时前房注射抗原后GATA 3表达的变化以及对前房相关免疫偏离(ACAID)形成的影响。方法　将 5 μl光感受器间维生素A类结合蛋白 (IRBP) ( 10g/L)注射至SD大鼠前房诱导ACAID的动物模型 ,于前房注射IRBP前 4d( - 4d组 )、2 4h( - 2 4h组 )、0h( 0h组 )以及前房注射IRBP后 3d( 3d组 )、7d( 7d组 )从足底注射 2 0 0 μg伤寒杆菌内毒素 (LPS)。各组于前房注射IRBP后第 8天 ,采用酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测血清白细胞介素 4 (IL 4 )水平 ,以监测ACAID的形成 ,并取脾组织行逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western免疫印迹 ,检测GATA 3基因及蛋白表达的变化 ,进行半定量分析。每组 6只 ,每个样品实验重复 3次。结果　 - 2 4h组和 0h组LPS注射后 2 4h眼部炎症到达高峰 ,前房注射IRBP 8d后血清中测不出IL 4 ,GATA 3基因和蛋白表达无明显增加 ;- 4d组LPS注射 4d后眼部炎症消退 ,此时前房注射IRBP ,8d后血清中IL 4水平显著升高( 10 4pg/ml± 3 4pg/ml,P <0 0 1) ,GATA 3基因和蛋白表达增加 ;3d组前房注射IRBP 8d后血清中未测出IL 4 ,GATA 3基因和蛋白表达无增加 ;7d组前房注射IRBP 8d后血清中IL 4升高 ( 10 0pg/ml± 2 5pg/ml,P <0 0 1) ,GATA 3基因和蛋白表达增加。结论　LPS诱导眼部炎     

维生素D缺乏对大鼠肺发育影响的形态学研究

目的:研究维生素D(VitD)缺乏对大鼠肺发育的形态学影响.方法:雌性SD孕鼠随机分为正常对照组、VitD缺乏模型组及干预组3组,每组6只.对照组予光照及含VitD的正常饲料喂养;模型组及干预组予以避光、不含VitD的饲料喂养,2周后与成熟SD雄性大鼠交配,于孕17、18、19天干预组以活性VitD(0.5 mg/kg)灌胃,并恢复光照及正常喂养;模型组及对照组予以等体积生理盐水灌胃.各组取孕20天的胎肺及生后1天新生鼠肺组织,通过光镜观察和电镜技术.分析研究VitD缺乏对肺发育的形态学影响.结果:光镜下,孕20天模型组及干预组胎肺肺泡平均表面积、平均呼吸膜周径均小于同龄正常对照组(P<0.05),平均肺泡间隔厚度大于对照组(P<0.05);生后1天新生鼠模型组肺泡平均表面积、平均呼吸膜周径小于对照组(P<0.05),平均肺泡间隔厚度大于对照组(P<0.05),干预组肺泡平均表面积、平均呼吸膜周径大于模型组,平均间隔厚度小于模型组(P<0.05).电镜下,孕20天及生后1天的模型组的板层小体数量均明显少于对照组,且孕20天模型组糖原沉积丰富,生后1天模型组板层小体结构疏松,可见板层小体排空现象;干预组上述变化较模型组有所改善.结论:孕期VitD缺乏抑制了孕晚期胎鼠及新生大鼠的肺发育,补充活性维生素D可逆转上述抑制作用.     

CC16及转录因子T-bet、GATA-3对支气管哮喘患者气道炎症的调控作用

目的探讨Clara细胞分泌蛋白(CC16)及转录因子T-bet、GATA-3在支气管哮喘患者气道炎症中的价值。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞(PBMC),用ELISA测定血浆中CC16、IFN-γ、IL-4的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet mRNA和Gata-3 mRNA表达水平。结果哮喘组CC16及IFN-γ分别为(21.96±7.31)ng/mL和(118.73±22.59)pg/mL,明显低于对照组[(64.88±25.27)ng/mL和(145.53±29.50)pg/mL,P均0.01],哮喘组IL-4高于对照组[(425.22±4.37)pg/mL比(69.72±10.15)pg/mL,P0.01]。哮喘组T-bet mRNA、T-bet/GATA-3表达水平(0.12±0.01,0.25±0.04)显著低于对照组(0.48±0.12,1.89±0.65)(P均0.01),GATA-3 mRNA表达(0.45±0.05)较对照组(0.30±0.08)明显升高(P0.01)。CC16与T-bet mRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关(r值分别为0.792和0.761,P均0.01);与GATA-3 mRNA无明显相关性(r=-0.146,P=0.551)。结论哮喘患者CC16水平降低,对气道炎症的保护性削弱,可能与T-bet/GATA-3和IFN-γ/IL-4的失衡有关。     

Si-GATA-3对AR小鼠PBMCs中Th1/Th2细胞亚群功能的体外调节

  目的  研究RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3在体外对变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）小鼠PBMCs中Th2、Th1细胞亚群功能的调节作用。  方法   构建RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3,并进行包装、纯化和滴定。BALB/C小鼠随机分为AR组和正常对照组。用卵蛋白构建BALB/C小鼠变应性鼻炎模型,抽取其外周血并分离外周血中单个核细胞（PBMCs）,随机分为3组,即si-GATA-3组、si-NC组和AR 组。进行细胞培养,然后分别用si-GATA-3、si-NC和生理盐水对3组变应性鼻炎小鼠的PBMCs进行干预72 h,用生理盐水代替si-GATA-3干预正常对照组小鼠的PBMCs。干预结束分离PBMCs和细胞培养上清液。分别用荧光定量qPCR和Western bloting方法检测PBMCs中GATA-3 mRNA、T-bet mRNA和GATA-3 、T-bet蛋白的相对表达量;用ELISA技术检测细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ的含量。  结果   构建出RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3,其滴度为5×108 TU/mL。制备出BALB/C小鼠的AR模型。Si-GATA-3组PBMCs中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白的相对表达量和上清液中IL-4的含量均明显低于AR组和si-NC组的表达量（P < 0.01）,AR组和si-NC组中3者的表达量均明显高于正常对照组（P < 0.01）;AR组3者表达量和si-NC组无差异（P > 0.05）。si-GATA-3组PBMCs中T-bet mRNA及其蛋白的相对表达量明显高于AR组和si-NC组的表达量（P < 0.01）,AR组和si-NC组中二者的表达量均明显低于对照组（P < 0.01）;AR组的二者表达量和si-NC组无差异（P > 0.05）。但si-GATA-3组细胞培养上清液中IFN-γ的含量高于正常对照组（P < 0.05）,AR组与si-NC组中IFN-γ明显高于正常对照组和si-GATA-3组（P < 0.01）;AR组与si-NC组之间IFN-γ的表达,差异无统计学意义（P > 0.05）。  结论   si-GATA-3能有效的下调Th2细胞中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白和IL-4的表达,并上调Th1细胞中T-bet mRNA和T-bet蛋白的表达,体外能有效地纠正小鼠AR模型中PBMCs中Th2/Th1的免疫失衡。     

前房相关免疫偏离对内毒素诱发的大鼠眼葡萄膜炎的影响

目的　探讨前房相关免疫偏离 (ACAID)形成前后对内毒素诱发的葡萄膜炎 (EIU)的影响及机制。方法　将 5 μl光感受器间维生素A类结合蛋白 (IRBP) ( 10 μg/ μl)注射至SD大鼠前房诱导ACAID的动物模型 ,于前房注射IRBP后 3d( 3d组 ,n =18)、7d( 7d组 ,n =18)行足底注射 2 0 0 μg伤寒杆菌内毒素 (LPS)。同时进行迟发性超敏反应 (DTH)的检测以监测ACAID的形成。酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测血清白细胞介素 10 (IL 10 )水平 ,并取脾组织行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Western免疫印迹 ,检测GATA 3基因及蛋白表达的变化 ,进行半定量分析。LPS注射后 2 4h观察EIU的临床表现 ,并摘取眼球行组织学检查。LPS单纯注射组作对照组 (n =2 4 )。结果对照组和 3d组DTH呈阳性反应 ,血清中未测出IL 10 ,GATA 3基因和蛋白表达无增加 ;7d组DTH呈阴性反应 ,血清中IL 10升高 ( 7 1pg/ml± 1 3pg/ml,P <0 0 1) ,GATA 3基因和蛋白表达升高。临床检查可发现 ,对照组和 3d组于LPS注射后 2 4h眼部炎症达高峰 ,瞳孔中央完全被纤维素样渗出膜遮盖 ,7d组大鼠眼部充血、渗出明显减轻 ;组织学检查发现 7d组较对照组和 3d组虹膜及睫状体基质内、前房、后房和玻璃体内细胞渗出明显减少。结论　前房注射抗原 7d后 ,GATA 3及IL 10的表     

地塞米松对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达的影响

目的：观察地塞米松对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达的影响。方法：36只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和地塞米松组（C组），每组12只。以卵蛋白腹腔注射并雾化吸人制备大鼠哮喘模型，以动物呼吸机测定气道反应性评价造模效果。采用免疫组化半定量法测定肺组织GATA-3含量。结果：予乙酰胆碱（Ach）激发后，比较各组大鼠呼气相气道阻力（Re），显示造模成功；B组、C组的GATA-3表达量显著高于A组（P〈0．01）；C组GATA-3表达量和B组比较．差异有显著性（P〈0．01）。结论：支气管哮喘大鼠存在GATA-3高表达。地塞米松减低气道高反应性，抑制GATA-3的表达．纠正Th1/Th2失衡，从而对支气管哮喘有疗效。     

叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞Hes5基因表达的影响

目的：探讨叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞肌s5mRNA、蛋白表达的影响。方法：分离培养24h新生SD大鼠噙神经干细胞：将细胞分为4组：正常对照组、缺氧模型组、缺氧叶酸添加组、缺氧叶酸缺乏组;于增殖第3天将除正常对照组外的其他3组细胞进行缺氧培养,6h后取出,继续培养至第6天收集细胞;用台盼蓝染色计‘数缺氧损伤后的各组细胞密度;RT—PCR方法检测Hes5mRNA表达;Westernblot方法检测Hes5蛋白表达。结果：缺氧叶酸添加组细胞密度高于其他各组．缺氧叶酸缺乏组最低,差异均有统计学意义（P〈0．05）;RT—PCR结果显示,缺氧叶酸添加组的Hes5mRNA表达量高于其余3组,缺氧叶酸缺乏组表达最少,各组间差异有统计学意义（P〈0．05）;Westernblot检测表明．缺氧叶酸添加组Hes5蛋白表达高于其他各组,缺氧叶酸缺乏组Hes5蛋白表达量最低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：体外神经干细胞缺氧损伤造模成功;叶酸对缺氧损伤的神经干细胞增殖有促进作用,可为预防和治疗脑缺血缺氧损伤提供依据。