INPP5E 基因影响小鼠胚胎神经管闭合的 分子机制研究

目的 探讨肌醇多聚磷酸5- 磷酸酶（INPP5E）基因影响小鼠胚胎神经管闭合的分子机制。 方法 采用前期复制的神经管缺陷（NTD）小鼠模型,在体视显微镜下观察胚胎表型、苏木精- 伊红染色情况, 测量胚胎顶臀长、体重等指标;重亚硫酸盐测序法检测NTD 组及对照组胚胎发育第11.5 天小鼠胚胎神经组 织中INPP5E 基因启动子区DNA 甲基化情况;实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting 检测胚胎神经组 织中INPP5E 蛋白和mRNA 相对表达量;超高效液相色谱串联质谱法检测胚胎神经组织中叶酸（FA）、5- 甲 基四氢叶酸（5-MeTHF）、5- 甲酰四氢叶酸（5-FoTHF）及同型半胱氨酸（Hcy）水平。结果 NTD 组小 鼠胚胎神经组织INPP5E 基因启动子区甲基化水平、INPP5E 蛋白和mRNA 相对表达量在胚胎发育第11.5 天 时较对照组低（P <0.05）。NTD 组胚胎神经组织的FA 和Hcy 水平较对照组升高（P <0.05）,而5-MeTHF 和5-FoTHF 水平较对照组低（P <0.05）。结论 INPP5E 基因在调节小鼠胚胎神经管闭合中起重要作用。FA 代谢紊乱引起的INPP5E 基因启动子区甲基化水平降低,可能通过影响其表达水平参与NTD 的发生。     

胃肠癌相关的趋化因子及其受体

结肠癌和胃癌的浸润生长和远处转移是患者死亡的重要因素，关于胃癌和结肠癌的发生发展机制尚不清楚。近年研究发现趋化因子及其受体不仅在炎症过程中有重要作用，在胃肠癌的发生发展中亦发挥着重要的作用，其可能在肿瘤细胞侵袭转移的过程中起着诱导和趋化的作用。趋化因子和其受体可能成为将来胃肠癌治疗的一个新靶点。     

羟基脲诱导神经管畸形小鼠模型及与其他小鼠模型的比较研究

目的本研究拟通过干扰新的叶酸相关代谢-核苷三磷酸还原成相应的脱氧核苷三磷酸通路中的关键酶-核苷酸还原酶,诱导构建神经管畸形(NTDs)小鼠模型,并且与前期构建的NTDs小鼠模型进行比较。方法实验小鼠选用C57BL/6J小鼠,购自北京华阜康公司,雌鼠60只,雄鼠30只,小鼠年龄7~8周,体重18~20 g,常规饲养于SPF级动物房。小鼠饲养一周后,晚上18∶00按照雄雌(1∶2)进行合拢,早上分笼将有阴栓的小鼠标记为孕0.5 d(E 0.5)。按照随机分组的方法将小鼠分为6组。其中实验组5组,在神经管闭合前的孕7.5 d(E 7.5),给予5种剂量的羟基脲进行腹腔注射;正常对照组,采用0.9%的氯化钠水溶液注射。采用不同剂量的羟基脲(HU)腹腔注射C57BL/6J孕鼠,诱导构建最佳小鼠NTDs模型,筛选出HU的最佳造模剂量为NTDs组。利用Western blot方法和免疫组化方法观察神经上皮细胞增殖和凋亡的情况,与前期诱导的NTDs小鼠模型中的结果进行对比。结果HU可诱导出NTDs的小鼠模型,免疫组化检测结果显示,畸形胚胎中的PCNA的阳性细胞低于正常胚胎组;Caspase3的阳性细胞高于正常组(P<0.05)。PCNA蛋白在NTDs组中的表达水平明显低于正常对照组(P<0.05),Cleaved Caspase-3蛋白在NTDs组中的表达水平明显高于正常对照组(P<0.05),并且与前期诱导模型的结果一致。结论本研究通过干扰核苷酸还原酶,引起了神经管发育过程中细胞增殖和凋亡的失衡,从而诱导构建出NTDs小鼠模型,为进一步研究NTDs的机制提供了新的动物模型。