Exendin-4对抵抗素介导的βTC6细胞PDX-1表达损害及细胞凋亡的干预作用

目的 研究Exendin-4是否能拮抗抵抗素对胰岛βTC6细胞的毒性作用。 方法 βTC6细胞分为对照组、抵抗素(200 ng/mL)干预组和Exendin-4干预组(浓度5、10、50 nmol/L+抵抗素200 ng/mL),分别干预6、12、24 h。CCK-8法测定细胞增殖能力,DNA Ladder检测细胞凋亡,RT-PCR检测PDX-1基因表达,放射免疫法测定胰岛素分泌。 结果(1)与抵抗素干预组比较,Exendin-4低浓度(5 nmol/L)和短时间(6 h)未改善βTC6细胞的胰岛素分泌能力和增殖能力(P>0.05),且未减轻细胞凋亡; 适宜浓度(10～50 nmol/L)及干预时间的延长(12、24 h)均明显改善βTC6细胞的胰岛素分泌能力和增殖能力(P<0.05),10 nmol/L和50 nmol/L浓度组间差别无统计学意义(P>0.05),延长至24 h时2种浓度组均可明显减少细胞凋亡;(2)Exendin-4预干预6 h,各组βTC6细胞的PDX-1表达未见明显改变; 当干预时间延长,各浓度组的PDX-1表达逐渐增加,10 nmol/L和50 nmol/L浓度组间差别无统计学意义(P>0.05)。 结论 在一定干预时间和浓度范围内,Exendin-4可增加抵抗素作用下βTC6细胞PDX-1 mRNA的表达,增加胰岛素分泌和增殖能力,减轻细胞凋亡。     

脂多糖及TOLL样受体4阻断剂对蜕膜细胞中孕激素受体、IL-1β及COX-2的影响

目的:研究脂多糖(LPS)或拮抗剂TOLL样受体4阻断剂(Toll-like receptor 4 antagonist,TLR4 mAb)作用于体外培养的蜕膜细胞后其孕激素受体(progesterone receptor,PR)、IL-1β及COX-2的表达改变,以探讨LPS及其拮抗剂对蜕膜细胞中PR的影响,以及PR与炎症因子之间的关系。方法:分离培养早孕人蜕膜细胞,将细胞培养至第4代时随机分为6组,对照组:仅加培养液。研究1组:加入终质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究2组:加入终质量浓度为1 μg/ mL TLR4 mAb。研究3组:加入终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb。研究4组:终质量浓度为1 μg/mLTLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究5组:终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。均培养24 h 后,采用RT-PCR半定量技术检测蜕膜细胞中PR,IL-1β及COX-2mRNA的表达情况。结果: LPS使蜕膜细胞中PR mRNA的表达下调(P<0.05),使IL-1β和COX-2 mRNA的表达上调(P<0.05);TLR4 mAb则使LPS作用后的蜕膜细胞中PR mRNA的表达上调(P<0.05)、IL-1βmRNA的表达下调(P<0.05);高质量浓度TLR4 mAb使COX-2 mRNA的表达下调(P<0.05)。结论:LPS作用于体外培养的人蜕膜细胞后,PR mRNA表达下调;IL-1β,COX-2的mRNA表达增加;使用TLR4 mAb后能拮抗LPS对蜕膜细胞中PR,IL-1β以及COX-2的作用。     

巨噬细胞炎症蛋白-1β对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖和凋亡的影响

目的 探讨β亚族趋化因子受体5(CCR5)在不同人舌鳞癌细胞株的表达情况以及其配体巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1β)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响.方法 采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)MIP-1β的相应受体CCR5的表达进行检测;根据MIP-1β刺激浓度的不同,细胞被随机分为4组:0 ng/mL组(对照组)、10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组.用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测MIP-1β在刺激12、24、48 h时,对CAL-27细胞增殖的影响;实验分组同前,分别用0、10、20、40 ng/mL IP-10处理24 h后收集细胞,用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测CAL-27细胞的凋亡情况.结果 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CCR5在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色;和对照组相比,MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用.在12 h、24 h时,3种浓度的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);48 h时,10 ng/mL、20 ng/mL的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),但40 ng/mL的MIP-1β对CAL-27细胞的增殖无影响(P>0.05);在24 h时,40 ng/mL MIP-1β组的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),而10 ng/mL、20 ng/mL MIP-1β组细胞凋亡率和对照组之间均无显著差异(P>0.05).结论 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用,但相对较高浓度的MIP-1β对CAL-27细胞的凋亡也有促进作用.随着较高浓度MIP-1β作用时间的延长,促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由MIP-1β的促凋亡作用的逐步发挥所引起的.     

HT-29细胞Toll通路相关分子表达与调控的研究

目的 探讨HT-29结肠癌细胞系经细胞因子TNF-а、IL-1β、IFN-γ及脂多糖(LPS)刺激后,Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白2(MD2)及人β防御素2(HBD2)在转录和蛋白水平的表达变化及其与NF-kB激活的关系.方法 HT-29细胞分为8组,分别加入RPMI 1640、TNF-а(20 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)、IFN-7(20 ng/mL)、LPS(50rig/mL)、TNF-а(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)干预.ELISA测定各组HT-29细胞上清液IL-8水平,RT-PCR检测各组细胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA水平,免疫印迹检测各组细胞TLR4和NF-kB蛋白表达.结果 细胞因子和细胞因子加LPS组上清液IL-8的表达高于对照组(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,IL-8的表达进一步升高(P<0.01).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和MD2 mRNA的水平(P<0.01);HBD2 mRNA水平在IL-1β,LPS协同TNF-а、IL-1β、IFN-γ组升高(P<0.05).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和NF-kB蛋白表达(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,NF-kB蛋白表达进一步增高(P<0.05).结论 细胞因子(TNF-а、IL-1β、IFN-γ)能够增加肠上皮细胞(IEC)的TLR4和MD2表达、增强其对LPS的反应性,造成IEC对常驻菌的过度反应,从而启动或加重肠道炎症;炎症信号(IL-1β、LPS+TNF-а、LPS+IFN-γ)刺激可诱导IEC的HBD2基因转录表达,增强肠道获得性免疫反应,影响肠道炎症进程.     

TLR9激动剂在胰腺星状细胞介导的胰腺癌耐药中的作用

目的:研究Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)激动剂在胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)介导的胰腺癌化疗耐药中的作用。方法:分离并培养小鼠胰腺星状细胞,采用免疫组化检测小鼠胰腺星状细胞TLR9的表达情况;应用MTT法检测TLR9激动剂OND1826对胰腺星状细胞增殖的影响;将胰腺星状细胞与胰腺癌MIAPaCa-2细胞进行Transwell共培养,分为对照组,共培养组,共培养+OND1826组,48 h后采用ELISA法检测上清液中的氧化亚氮(NO)及白介素-1β(IL-1β)表达量,加入10μg/ml吉西他滨继续培养24 h,采用MTT法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果:免疫组化结果显示胰腺星状细胞表达TLR9,TLR9激动剂可抑制胰腺星状细胞生长(P<0.05),与对照组相比,共培养组的NO、IL-1β表达量明显增加,肿瘤细胞凋亡明显减少(P<0.05);OND1826干预后NO、IL-1β表达量有所减少,而肿瘤细胞凋亡有所增加(P<0.05)。结论:TLR9激动剂可抑制胰腺星状细胞的增殖能力,进而抑制星状细胞介导的胰腺癌耐药。     

肥胖症患者血清对人源单核细胞细胞上Toll样受体4/转录因子-κB信号通路的影响

目的 探讨肥胖症及伴相关代谢紊乱患者血清对人源单核细胞(THP-1)细胞表面Toll样受体4/转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的活化作用.方法 分别用10例单纯性肥胖及伴不同代谢紊乱患者血清干预THP-1细胞株24、48 h后,测定THP-1细胞表面TLR4和细胞内NF-κB p65磷酸化的表达水平及其分泌白细胞介素(IL-1)β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的能力.Western印迹检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清液中IL-1 β和TNF-α的水平.结果 THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化的蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力差异有统计学意义(P＜0.05);THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力随肥胖症代谢紊乱组分的增加而增高,并随干预时间的延长而增高(P＜0.05).正常对照组、单纯性肥胖组、肥胖伴高血糖组、肥胖伴血脂紊乱组以及肥胖伴3种代谢紊乱组血清孵育THP-1细胞48 h,TNF-α的浓度(ng/L)分别为(222±32)、(246±52)、(322±32)、(322±34)和(490±83),IL-1β(ng/L)分别为(94±19)、(133±19)、(174±22)、(180±30)、(279±38)(P＜0.05).结论 单纯性肥胖及肥胖伴不同组分代谢紊乱患者的血清可不同程度地诱导TLR4/NF-κB信号通路的活化,伴代谢紊乱组分越多的肥胖患者的血清诱导TLR4/NF-κB信号通路活化的能力越强.     

白细胞介素6对人单核/巨噬细胞系细胞表面Toll样受体4表达的影响

目的:观察白细胞介素6(IL-6)对人单核/巨噬细胞系(THP-1)细胞表面Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:流式细胞仪检测不同浓度IL-6(0ng/L、10ng/L、100ng/L、1μg/L、10μg/L、100μg/L)干预THP-1细胞24h,以及10μg/L的IL-6干预THP-1细胞不同的时间(0、3、6、12、24、48h)后细胞表面TLR4的表达水平。结果:各浓度IL-6均能不同程度的促进细胞表面TLR4的表达(P<0.05),以10μg/L组干预最为显著(P<0.01);10μg/LIL-6干预不同的时间后均可促进其表达,以干预24h后的差异最显著(P<0.01)。结论:IL-6可以促进人THP-1细胞表面TLR4表达,且具有一定的浓度和时间依赖性。     

促炎性细胞因子对大鼠胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白表达水平的影响

目的:探讨促炎性细胞因子对胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白水平的影响?方法:将大鼠胰岛细胞系INS-1细胞在加或不加促炎性细胞因子混合物(IL-1β 10 ng/mL?TNF-α 50 ng/mL?IFN-γ 50 ng/mL)的培养液中培养24 h,设立对照组?促炎性细胞因子干预组?流式细胞仪测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测INS-1细胞miR-29a/b/c表达以及抗凋亡基因骨髓细胞白血病蛋白1(myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)mRNA?B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2) mRNA的表达水平,Western blot技术检测Mcl-1?Bcl-2蛋白的表达情况?结果:①促炎性细胞因子干预的INS-1细胞miR-29a/b表达水平较正常对照组增加,差异有统计学意义(P < 0.05),miR-29c表达水平较正常对照组有上升趋势,但无统计学差异(P > 0.05);②促炎性细胞因子干预组INS-1细胞Mcl-1 mRNA?Bcl-2 mRNA表达水平较对照组减少,但差异无统计学意义(P > 0.05);③促炎性细胞因子干预组INS-1细胞抗凋亡蛋白Mcl-1?Bcl-2表达水平较正常对照组明显下降,差异有统计学意义(P < 0.01);④促炎性细胞因子干预组细胞凋亡率增高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:促炎性细胞因子刺激处理的INS-1细胞miR-29a/b表达均上调,抗凋亡蛋白Mcl-1?Bcl-2下调,凋亡率上升,推测促炎性细胞因子可能通过调节miR-29家族及抗凋亡蛋白的表达水平诱导胰岛β细胞凋亡,从而促进1型糖尿病的发生?     

姜黄素抑制星形胶质细胞和小胶质细胞中脂多糖诱导的趋化因子的表达

目的：观察姜黄素对脂多糖诱导的星形胶质细胞和小胶质细胞中角质细胞源性趋化因子（CXCL1）和干扰素诱导蛋白10（CXCL10）表达的抑制作用。方法：（1）确定脂多糖刺激细胞的时间：将培养的C6星形胶质细胞株随机分为对照组、脂多糖1 h、3 h、6 h组。对照组未加入任何药物刺激;脂多糖1 h、3 h、6 h组应用1 μg/mL脂多糖分别刺激细胞1 h,3 h,6 h。采用real-time PCR方法检测细胞中趋化因子CXCL1和CXCL10 mRNA的表达,确定合适的脂多糖刺激时间。（2）姜黄素处理细胞实验：①C6细胞随机分成5组：对照组、脂多糖组、姜黄素2.5 μmol/L、10 μmol/L、25 μmol/L预处理组。对照组未加入任何药物刺激;脂多糖组用1 μg/mL脂多糖刺激细胞3 h;姜黄素预处理组分别用2.5 μmol/L、10 μmol/L、25 μmol/L姜黄素预孵育30 min后,再加入1 μg/mL脂多糖刺激细胞3 h。②原代培养的星形胶质细胞,分组方法和处理方法同①。③原代培养的小胶质细胞,随机分成对照组、脂多糖组、姜黄素25 μmol/L预处理组,方法同①。处理结束后,采用real-time PCR方法检测细胞中趋化因子CXCL1和CXCL10 mRNA的表达。结果：（1）与对照组比较,脂多糖刺激C6细胞3 h时,CXCL1（P<0.001）和CXCL10（P<0.05）表达最高,因此选择脂多糖刺激细胞时间为3 h。（2）在C6细胞中,与脂多糖组比较,姜黄素25 μmol/L预处理组CXCL1和CXCL10的表达均显著降低（P<0.001）。（3）在原代培养的星形胶质细胞中,与脂多糖组比较,姜黄素10 μmol/L预处理组（P<0.05）、姜黄素25 μmol/L预处理组（P<0.001）CXCL1的表达均显著降低,姜黄素25 μmol/L预处理组CXCL10的表达显著降低（P<0.001）。（4）在原代培养的小胶质细胞中,与脂多糖组比较,姜黄素25 μmol/L预处理组CXCL1和CXCL10的表达均显著降低（P<0.001）。结论：姜黄素能抑制星形胶质细胞和小胶质细胞中脂多糖诱导的趋化因子CXCL1和CXCL10的表达,具有抗炎作用。     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的机制研究

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1（IGFBP-rP1）抑制血管内皮细胞生长因子（VEGF）体外诱导视网膜新生血管形成的机制。方法 猕猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞株（RF/6A）扩增培养、血清饥饿培养24 h后,分为对照组及50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组进行干预,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;分为对照组,10 ng/mL VEGF干预组,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1+10 ng/mL VEGF干预组进行干预,免疫细胞化学染色检测细胞中B-Raf蛋白表达,分光光度法检测细胞中Caspase 3活性的变化。结果 流式细胞仪检测显示,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组RF/6A细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫细胞化学染色检测与Caspase 3活性检测显示,与对照组比较,10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著升高、D405值显著降低（均P<0.05）;与10 ng/mL VEGF干预组比较,50、100、200 ng/mL IGFBP rP1+10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著降低、D405值显著升高（均P<0.05）,且各组间比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 IGFBP-rP1通过干预B-Raf蛋白表达,上调细胞Caspase 3活性,对抗VEGF的促视网膜血管新生效应,发挥抑血管新生因子的负向调节作用。     

参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的:观察参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:45只SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组和参麦组,每组15只。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)造模。脓毒症模型组术前1h腹腔内注射生理盐水10mL/kg,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余操作同脓毒症模型组。参麦组术前1h腹腔内注射参麦注射液10mL/kg。术后24h取大鼠肾脏组织,采用TUNEL法检测并计算肾脏细胞凋亡指数(AI),免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:三组大鼠体质量差异无统计学意义(P>0.05),三组大鼠均可见肾脏细胞凋亡,细胞凋亡多发生于肾小球细胞。脓毒症组和参麦组肾脏细胞AI均高于假手术组(P<0.01),参麦组肾脏细胞AI虽低于脓毒症组,但差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,脓毒症组和参麦组肾脏细胞Bcl-2表达下降(P<0.01,P<0.05),Bax表达上调(P<0.01),Bcl-2/Bax比值减小(P<0.01)。与脓毒症组比较,参麦组Bcl-2明显上调(P<0.01),Bax表达下调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增大(P<0.01)。结论:参麦注射液能上调脓毒症模型大鼠肾脏细胞Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少脓毒症大鼠肾脏细胞凋亡。     

Exendin-4对棕榈酸介导的胰岛β细胞TLR4/JNK/Bax通路的干预作用

目的 探讨艾塞那肽（Exendin-4）对棕榈酸（PA）诱导的脂毒性保护效应是否通过胰岛βTc6细胞Toll样受体4（TLR4）/c-Jun氨基末端激酶（JNK）/ Bcl-2相关X蛋白基因（Bax）通路发挥作用。 方法 构建βTc6细胞脂毒性模型,分别予TLR4阻滞剂（CLI-095）、JNK阻滞剂（SP600125）和Exendin-4进行干预,观察βTC6细胞的胰岛素分泌水平和TLR4、p-JNK、JNK、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。 结果 （1）与对照组比较,PA可下调葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）（P<0.05）,上调TLR4、p-JNK表达（P<0.05）,下调Bcl-2/Bax（P<0.05）;（2）PA诱导的脂毒性损害在应用CLI-095或SP600125后,GSIS改善（P<0.05）,Bcl-2/Bax升高（P<0.05）;（3）Exendin-4干预后,GSIS改善（P<0.05）,TLR4、p-JNK蛋白表达下调（P<0.05）,Bcl-2/Bax上调（P<0.05）;抑制TLR4或JNK活性可增强Exendin-4改善脂毒性β细胞胰岛素分泌功能的作用,反之增加TLR4或JNK活性则拮抗Exendin-4对胰岛素分泌的改善作用。 结论 PA引起胰岛β细胞功能障碍可能与TLR4/JNK/Bax通路有关,Exendin-4对PA的上述作用具有部分拮抗作用。     

转化生长因子β1对肌成纤维细胞膜型基质金属蛋白酶1的影响

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对鼠肌成纤维细胞(C2C12细胞)分泌膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)的影响,探讨其内在机制.方法 用不同浓度的TGF-β1(0、1、5、10 ng/mL)干预C2C 12细胞5h,200 pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24 h,用Western blot和Northern blot方法测定MT1-MMP及其mRNA表达.结果 0、1、5、10 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞5 h,Western blot半定量检测MT1-MMP的结果分别为2.86±0.28、2.05±0.31、1.60±0.21、1.02±0.24,F=224.9,P<0.01;Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示逐渐变弱.5 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞4、12、24 h,Western blot半定量检测结果分别为1.02±0.29、0.80±0.21、0.4±0.12,各时间点值比较,均P<0.05.Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示随时间延长而逐渐变弱.200 pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24 h,再用5 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞5 h,半定量Western blot检测结果显示:内对照组0.82±0.12(siRNA-control+5 ng/mL TGF.131)、空白对照组1.61±O.21(siRNA-control)、实验组1.84±0.23(siRNA-Smad3+5 ng/mL TGF-β1),内对照组和实验组比较差异有统计学意义(P<0.05);Northern blot定性结果显示:MT1-MMP mRNA表达在实验组和空白对照组较强,而内对照组较弱.结论 TGF-β1抑制鼠C2C12细胞分泌MT1-MMP,呈剂量和时间依赖性:siRNA阻断Smad3表达可消除TGF-β1对MT1-MMP的抑制作用.     

疏血通注射液对局灶性脑梗死大鼠缺血周围区细胞凋亡和TLR4表达的影响

目的观察疏血通注射液(SXT)对局灶性脑梗死大鼠缺血周围区细胞凋亡和Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨SXT对缺血脑损伤的神经保护机制。方法采用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),随机分为3组:假手术组、模型组、SXT治疗组;分别在缺血12、24、48h及72h采用DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和免疫组化法检测缺血周围区神经细胞凋亡、TLR4mRNA和蛋白表达。结果在模型组中,TUNEL阳性细胞数、TLR4mRNA和蛋白表达在缺血12h逐渐增加,24h达到峰值后表达有所下降,较假手术组仍维持高位表达(P<0.01);在SXT治疗组中,上述表达在缺血24h后均较模型组降低(P<0.05),并随着治疗时间延长呈下降趋势(P<0.05)。结论在脑缺血损伤亚急性期,细胞凋亡与TLR4表达有关,SXT能抑制细胞凋亡,下调缺血周围区TLR4表达,这可能是其发挥神经保护作用的机制之一。     

松弛素对马兜铃酸诱导的肾小管上皮细胞MMP9/TIMP1表达的影响

目的：探讨松弛素（RLX）对马兜铃酸诱导的肾小管上皮细胞（HK-2细胞）分泌细胞外基质、细胞基质金属蛋白酶-9（MMP9）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP1）表达的影响。方法：体外培养人近端肾小管HK-2细胞,根据是否给予马兜铃酸刺激及RLX干预随机分为对照组（无干预）、马兜铃酸组（马兜铃酸10ug/mL刺激48h）、松弛素组（松弛素10ng/mL干预48h）、RLX+马兜铃酸组（RLX 10ng/mL干预48h后再给予马兜铃酸10ug/mL刺激48h）。ELISA法检测各组细胞上清中Ⅳ型胶原、纤连蛋白的表达。免疫印迹技术检测细胞MMP9、TIMP1蛋白的表达。结果：与对照组比较,马兜铃酸组HK-2细胞分泌Ⅳ型胶原[（87.62±4.46） ng/mL 比（26.80±0.59）ng/mL,P<0.05）]、纤连蛋白水平增加[（53.86±0.62）ng/mL 比（23.06±0.18 ）ng/mL,P<0.05）],TIMP1表达上调[相对表达量为（3.72±0.33）比（1.00±0.11）,P<0.05],MMP9表达下降[相对表达量为（0.39±0.00）比（1.00±0.23）,P<0.05]。RLX可降低马兜铃酸组细胞Ⅳ型胶原[（47.32±0.68） ng/mL 比（87.62±4.46）ng/mL,P<0.05）]、纤连蛋白 [（37.61±2.38）ng/mL比（53.86±0.62） ng/mL,P<0.05）] 水平。同时,和非治疗组相比,RLX治疗组TIMP1表达下降[相对表达量为（2.04±0.15）比（3.72±0.33）,P<0.05],MMP9表达升高[相对表达量为（0.71±0.02）比（0.39±0.00）,P<0.05]。结论：RLX可改善马兜铃酸诱导的细胞外基质的失衡,促进细胞外基质的降解。作用机制可能与下调TIMP1 表达及上调MMP9表达有关。     

游离脂肪酸对βTC6细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响及吡格列酮的干预作用

目的：观察游离脂肪酸（FFA）对体外培养的βTC6细胞胰岛素分泌功能的影响及盐酸吡格列酮作用的干预。方法：体外培养βTC6细胞,0.5mmol/LFFA分别干预1h、48h,放射免疫法检测胰岛素。不同浓度的吡格列酮（0.1、1.0、10.0μmol/L）与FFA共同干预βTC6细胞48h,放射免疫法检测胰岛素浓度。结果：FFA干预1h后,βTC6细胞的葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）增加（P〈0.05）,FFA干预48h后,βTC6细胞的GSIS较干预前下降（P〈0.05）。FFA与吡格列酮共同干预时,随着吡格列酮浓度的升高,GSIS呈上升的趋势,1.0μmol/L和10.0μmol/吡格列酮与FFA共同干预组GSIS较FFA干预48h增加（P〈0.05）。结论：FFA对B细胞具有短期刺激作用及脂毒性作用,吡格列酮可以部分改善脂毒性作用。     

白桦脂酸抑制鼻咽癌细胞CNE-1生长及其机制探讨

目的 研究白桦脂酸(betulinic acid)对鼻咽癌细胞CNE-1生物学行为的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度(10、20、40、80、120、160 μg/mL)白桦脂酸处理CNE-1细胞,作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测CNE-1细胞增殖变化;不同浓度白桦脂酸(10、20、40 μg/mL)作用CNE-1细胞72 h后,流式细胞仪PI单染法和FITC-AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞周期和凋亡变化;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA表达水平的变化;Western blot 检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化.结果 MTT实验显示不同浓度白桦脂酸对CNE-1细胞均有抑制作用(均P＜0.05),抑制效果呈时间和剂量依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(37.46±2.51),(24.28±1.87),(21.15±1.42)μg/mL;流式细胞术结果显示10、20、40 μg/mL白桦脂酸组与空白组比较均出现G0/G1期阻滞[(59.21±2.47)%、(72.20±4.28)%、(77.13±3.57)% vs (42.94±2.63)%,均P＜0.05]和凋亡比例的增加[(14.95±2.11)%、(21.71±2.84)%、(38.49±3.26)% vs (4.02±0.96)%,均P＜0.05];RT-PCR结果显示对照组与白桦脂酸20、40 μg/mL组的Bcl-2与内参β-actin吸光度积分值之比(Bcl-2/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而减小,而Bax与内参β-actin吸光度积分值之比(Bax/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而增加;Western blot结果显示白桦脂酸下调抑凋亡基因Bcl-2蛋白的表达,同时上调促凋亡基因Bax蛋白表达.结论 白桦脂酸通过介导细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖.其诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2/Bax表达比例相关.     

IL-10对稳定转染HBx基因的HL-7702细胞增殖的影响

目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)在稳定转染乙型肝炎病毒X(HBx)基因的HL-7702肝细胞增殖的作用及机制.方法 CCK-8法测定HBx基因对HL-7702细胞增殖的作用及IL-10对HL-7702/HBx细胞增殖的作用;流式细胞术测定IL-10对HL-7702/HBx细胞凋亡的影响;RT-PCR法测定HBx基因对HL-7702细胞表达CDKN1B蛋白质mRNA的作用及IL-10对HL-7702/HBx表达CDKN1B mRNA的作用.结果 CCK-8法显示,HL-7702/HBx细胞比HL-7702细胞和HL-7702/MOCK细胞增殖速度明显加快(P<0.05);80 ng/mL的IL-10作用24 h可抑制HL-7702/HBx细胞增殖(P<0.05);流式细胞术显示,80 ng/mL的IL-10作用24 h对HL-7702细胞、HL-7702/HBx细胞及HL7702/MOCK细胞凋亡均无影响;RT-PCR法显示,HL-7702/HBx细胞CDKN1B mRNA表达量较HL-7702细胞和HL-7702/MOCK细胞降低(P<0.05),80 ng/mL的IL-10作用24 h后,HL-7702/HBx细胞较HL-7702/HBx空白组CDKN1B mRNA表达量上调(P<0.05).结论 HBx基因可促进HL-7702细胞增殖,IL-10可抑制HL-7702/HBx细胞增殖而对其凋亡无影响.HBx基因可能通过下调HL-7702/HBx细胞CDKN1B mRNA的表达量而促进细胞增殖,IL-10可能通过上调HL-7702/HBx细胞CDKN1B mRNA的表达量而抑制细胞增殖.     

Toll样受体4在人肺泡上皮细胞株中的表达及其在细胞炎症反应中的作用

目的 明确人Ⅱ型肺泡上皮细胞是否表达Toll样受体4(TLR4),探讨TLR4在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用.方法 将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒(E1A+组)和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组(E1A-组),分别以不同浓度的脂多糖(LPS,0、0.1、1、10μg/ml)、白细胞介素1β(IL-1β,0、0.1 ng/ml)、香烟提取物(CSE,0、10%、20%、40%)刺激.刺激后12、24 h,用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞IL-8 mRNA和TLR4 mRNA的表达,用蛋白质印迹技术测定核因子κB(NF-κB)亚单位P65蛋白的表达.结果 10μg/ml LPS、0.1 ng/ml IL-1β或20%CSE刺激24 h后,E1A+组IL-8 mRNA表达量(2.82、1.87、4.70)明显高于正常对照组(0.95、0.78、1.02,均P<0.05)和E1A-组(0.97、0.81、1.12,均P<0.05).10μg/ml的LPS刺激后12、24 h,E1A+组细胞TLR4 mRNA表达水平分别为4.52、7.99,明显高于正常对照组(1.91、3.81,均P<0.05)和E1A-组(2.00、3.88,均P<0.05);IL-1β也可增加TLR4 mRNA表达.CSE刺激对各组细胞TLR4 mRNA表达水平均无明显影响.3种刺激因子均可引起各组细胞NF-κB亚单位P65蛋白表达水平增高.结论 人Ⅱ型肺泡上皮细胞表达TLR4,LPS、IL-1β引起IL-8释放可能与TLR4介导的NF-κB激活有关.     

芒果苷减轻IL-1β诱导的软骨细胞凋亡

目的：软骨细胞凋亡是骨关节炎重要的发病机制,芒果苷具有抗炎和抗凋亡等多种药理作用,然而芒果 苷对软骨细胞凋亡的作用尚不清楚。本研究探讨芒果苷对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响。方法：将小鼠软骨细胞 ATDC5随机分为control组、IL-1β组、MFN-L组、MFN-M组、MFN-H组及MFN+LY294002组。Control组细胞不加 任何干预;IL-1β组细胞用IL-1β(10 ng/mL)处理24 h;MFN-L、MFN-M、MFN-H组细胞先分别用5、10、20 μmol/L 的芒果苷预处理 1 h,再用 IL-1β(10 ng/mL)处理 24 h;MFN+LY294002 组细胞先加入 LY294002(25 μmol/L)处理 1 h, 再加入芒果苷(20 μmol/L)处理1 h,最后再用IL-1β(10 ng/mL)处理24 h。用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细 胞凋亡,比色法检测caspase-3活性,蛋白质印迹法检测Bcl-2,Bax及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路 相关蛋白质的表达。结果：与control组相比,IL-1β组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著上升,caspase-3活性显著 增加,Bax蛋白质表达水平显著上调,Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白质表达水平显著下调(均P<0.05)。与IL-1β组相比, MFN-L、MFN-M、MFN-H组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著下降,caspase-3活性显著下降,Bax蛋白质表达水 平显著下调,Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白质表达水平显著上调(均P<0.05)。与MFN-M组相比,MFN+LY294002组细 胞凋亡率显著上升,Bax蛋白质表达水平显著上调,Bcl-2蛋白质表达水平显著下调(均P<0.05)。结论：芒果苷可减 轻IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,其保护作用是通过激活PI3K/Akt通路实现的。