TGF-β1对糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面组织中的表达,探讨外源性TGF-β1应用对创面愈合的影响。方法 18只SD大鼠随机分为单纯烫伤组(对照组)、糖尿病烫伤组(糖尿病组)和糖尿病烫伤TGF-β1干预组(用药组),每组各6只。糖尿病组和用药组大鼠经链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型,再制备深Ⅱ度烫伤模型,用药组大鼠建模成功后给予创面下局部皮内注射TGF-β1。烫伤后1、3、5、7、14、21 d记录创面未愈合面积并计算创面愈合率,组织学检查观察创面愈合情况,免疫组化检测创面组织TGF-β1表达。结果从烫伤后5 d起,对照组和用药组创面愈合率较糖尿病组升高,差异有统计学意义(P<0.05),对照组与用药组比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组创面局部TGF-β1含量较糖尿病组多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病大鼠烫伤创面较正常大鼠烫伤创面愈合速度慢,与创面局部TGF-β1含量减少有关。创面局部应用TGF-β1有利于糖尿病大鼠烫伤创面愈合。     

活血化瘀方对糖尿病模型新生肉芽组织中TGF-β1mRNA和TGF-β3mRNA的动态影响

目的探讨活血化瘀方对糖尿病大鼠模型创面肉芽组织不同时段(3、11d)转化生长因子-β(TGF-β)中TGF-β1 mRNA和TGF-β3mRNA表达水平影响,为"祛瘀利于生肌"的愈创理论提供科学依据。方法36只SD大鼠分别造成糖尿病溃疡模型和正常创面模型,随机分为活血化瘀组和糖尿病创面生理盐水对照组和正常创面生理盐水对照组。分别于创面修复3、11d取材,采用real-time PCR法检测新生肉芽组织中TGF-β1 mRNA和TGF-β3mRNA水平变化。结果创伤后3d和11d,中药活血化瘀组TGF-β1mRNA和TGF-β3 mRNA拷贝数均高于糖尿病创面生理盐水组(P<0.05),但低于正常创面生理盐水组(P<0.05)。结论活血化瘀方能在创伤后明显上调糖尿病大鼠模型新生肉芽组织中TGF-β1 mRNA和TGF-β3 mRNA表达,有利于创面愈合,证实了"祛瘀利于生肌"的愈创理论。     

抑郁对大鼠创面愈合过程中胶原含量的影响

目的 观察抑郁复合皮肤创伤大鼠创面肉芽组织的胶原含量,初步探讨抑郁影响创面愈合的可能机制.方法 根据建模方法将126只SD大鼠随机分为单纯皮肤创伤组、皮肤创伤复合抑郁组、抑郁复合皮肤创伤组,采用羟脯氨酸试剂盒检测创面组织的羟脯氨酸含量,苫味酸天狼猩红染色后偏振光显微镜下观察各组各时相点创面的胶原沉积情况.结果 抑郁复合皮肤创伤组大鼠创面肉芽组织中的羟脯氨酸含量及胶原沉积量持续低于其余两组(P<0.01,P<0.05),伤后18 d,与皮肤创伤复合抑郁组趋于一致.结论 抑郁复合皮肤创伤可显著降低创面组织羟脯氨酸的合成,减少胶原纤维沉积,从而延缓伤口愈合.     

复黄生肌愈创油膏对糖尿病模型创面TGF—β1与smad3、smad7水平的动态影响

目的：探讨复黄生肌愈创油膏（简称复黄膏）促进创面愈合的作用机制。方法：36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、复黄膏治疗组。复制Wister大鼠糖尿病创面模型,药物干预后分第3天和第11天两个观察时段,采用免疫组化技术观察不同时段创面中TGF—β1、smad3、smad7含量变化。结果：第3天时,复黄膏治疗组TGF—β1含量、smad3含量均明显高于模型组（P〈0．05）,但与正常组比较无统计学差异;smad7含量3组间比较无统计学差异。第11天时,复黄膏治疗组TGF—β1含量、smad3含量均明显低于正常组（P〈0．05）,但与模型组比较无统计学差异;复黄膏治疗组smad7含量明显高于正常组和模型组（P〈0．05）。结论：TGF—β1、smad3在复黄膏治疗组创面愈合早期表达上调,表明复黄生肌愈创油膏通过促进创面生长因子的表达及其信号转导,从而起到促进创面愈合的作用;而在创面愈合晚期,TGF—β1、smad3在复黄膏治疗组表达下调,smad7作为细胞内Smad信号的抑制剂表达上调,可能为复黄生肌愈创油膏促进了创面愈合的负反馈机制,及时中止成纤维细胞过度生长,防止瘢痕形成。     

罗哌卡因对皮肤损伤愈合及GM-CSF表达的影响

摘要：目的  观察罗哌卡因对皮肤损伤小鼠皮肤愈合及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）表达的影响。方法  将小鼠随机分为实验组（罗哌卡因）和对照组（生理盐水）,两组小鼠创面进行Masson染色,测定GM-CSF浓度和羟脯氨酸水平,记录创面的愈合率和愈合时间。结果  第5天,实验组绿染胶原纤维沉积量较对照组多;第10天,实验组较对照组创缘上皮增生明显。实验组小鼠第5天GM-CSF含量高于对照组（P < 0.05）。实验组小鼠创面愈合时间短于对照组（P <0.05）。实验组大鼠第5天和第10天创面愈合比例高于对照组（P <0.05）。实验组大鼠第5天和第10天创面羟脯氨酸水平高于对照组（P <0.05）。结论  罗哌卡因局部浸润可以促进小鼠全层皮肤损伤的愈合,其机制可能与局部浸润罗哌卡因能够促进GM-CSF的表达有关。

     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对糖尿病小鼠创面愈合的作用

目的 探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对糖尿病小鼠创面愈合的作用.方法 C57BL/6小鼠42只,链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病小鼠模型.腹腔麻醉后在糖尿病小鼠背部中线两侧各制作0.8cm×0.8cm创面,左侧创面外用GM-CSF凝胶(GM-CSF处理组),右侧创面则给予不含药物的凝胶(对照组).在创面形成后不同时相点,分别测量计算两组糖尿病小鼠创面的愈合率;组织Masson染色观察创面再上皮化程度和胶原纤维的沉积情况;碱性水解法测定反映局部胶原蛋白合成量的指标羟脯氨酸水平.结果 GM-CSF处理组创面愈合率较对照组明显增加,从创面形成后3d起两组差异显著(P＜0.01);Masson染色组织学观察显示,GM-CSF处理组创面形成后不同时相点的再上皮化速率和胶原纤维沉积均较对照组明显加快;创面形成后3 d起,GM-CSF处理组羟脯氨酸水平较对照组明显增高.结论 糖尿病小鼠创面外用GM-CSF凝胶,可诱导创面再上皮化和胶原蛋白合成,从而促进创面愈合.     

蜂胶对糖尿病大鼠创面表皮干细胞表达的影响

目的:观察蜂胶对四氧嘧啶糖尿病大鼠创面表皮干细胞动员的影响.方法:健康Wistar大鼠被随机分为4组:盐水对照组(n=18)、蜂胶对照组(n=18)、盐水模型组(n=22)和蜂胶模型组(n=18).模型组大鼠为尾静脉注射四氧嘧啶制造的糖尿病模型.造模4周后所有大鼠背部两侧制造直径1.8cm的圆形全皮层皮肤创面.分别用盐水或蜂胶处理伤口,观察各组的创面愈合时间.免疫组化法检测角蛋白14(K14)、角蛋白19(K19)、整合素β1的表达;Western Blot测定K19、整合素β1的蛋白表达水平.结果:与盐水处理相比,蜂胶能明显缩短创面愈合时间(P＜0.01),促进创面K14、K19、整合素β1的表达(P＜0.01).结论:蜂胶可以促进糖尿病大鼠创面表皮干细胞活性,加速创面愈合.     

祛瘀生肌法对大鼠糖尿病创面新生肉芽组织中Bax和Bcl-2的影响

目的:探讨祛瘀生肌法促进糖尿病皮肤溃疡大鼠模型创面愈合的辨证用药规律。方法:72只SD大鼠尾静脉注射四氧嘧啶造成糖尿病模型后,剪去背部全层皮肤造成糖尿病皮肤溃疡,将其随机分成生肌化瘀方1(生肌方:化瘀方=1:2)组、生肌化瘀方2(生肌方:化瘀方=1:1)组和生理盐水对照组。分别干创伤后第3天、第7天和第11天取创面新生肉芽组织。采用免疫组织化学法检测新生肉芽组织中Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:生肌化瘀方1组创面愈合时间较生肌化瘀方2组和生理盐水组短(P<0.05)。创面修复第3天,各组均未检测到Bax和Bcl-2表达。创面修复第7天和第11天,与生理盐水组和生肌化瘀方2组比较,生肌化瘀方1组新生肉芽组织中Bax和Bcl-2呈阳性表达(P<0.05)。结论:祛瘀生肌中药可调节糖尿病大鼠模型创面新生肉芽组织中Bax和Bcl-2蛋白表达,是祛瘀生肌法促进创面愈合的原因之一。重用化瘀药物有利于创面愈合。     

骨髓间充质干细胞促进大鼠皮肤创面愈合的作用及机制研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对大鼠皮肤创面的促愈作用及机制,为临床皮肤损伤修复提供新的治疗方法.方法 建立大鼠背部皮肤全层切割伤模型,将大鼠分为2组:空白对照组,MSCs处理组,分别于伤后3、6、9、12 d采用大体观察,常规组织学检查观察2组大鼠背部皮肤伤口愈合状况及RT-PCR观察转化生长因子(TGF-β1)、表皮生长因子(EGF)mRNA在愈合中的变化特点.结果 MSCs处理组大鼠皮肤愈合快,愈合指数高,创伤后第3天MSCs处理组大鼠皮肤TGF-β1上调明显,第6天EGF上调明显.结论 MSCs能促进大鼠皮肤创面愈合,其机制可能与其引起各种生长因子的合成和分泌有关.     

滇黄精对糖尿病大鼠创面愈合的促进作用

  目的：探讨滇黄精对糖尿病大鼠创面愈合的作用。  方法：取雄性SD大鼠,腹腔注射链脲佐菌素(STZ,45 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性药(西格列汀,9 mg/kg)组和滇黄精低剂量(2 g/kg)、高剂量(8 g/kg)组,每组6只；另设6只正常大鼠作为对照组。各组灌胃给予相应药物。连续干预4周后,在每只大鼠背部中央制备一个直径为2.0 cm的圆形全层皮肤缺损伤口,继续药物干预17 d。创面损伤后第3、7、14、17天,观察各组创面愈合情况及愈合率。创面损伤后第17天,取创缘皮肤组织,HE染色后光镜下观察形态学变化,并测量表皮层和真皮层厚度。  结果：创面损伤后第7、14、17天,滇黄精低、高剂量组的创面面积较模型组明显缩小,创面愈合率较模型组显著升高(P<0.05,P＜0.01)。创面损伤后第17天,滇黄精干预组的创面皮肤组织病变较模型组明显减轻,可见大量成纤维细胞与胶原纤维,炎症细胞浸润较少,新生血管较多,且高剂量组的促愈合作用更为明显。与模型组相比,滇黄精低、高剂量组表皮层厚度均显著增加(P＜0.01),滇黄精高剂量组真皮层厚度亦明显增加(P＜0.01)。  结论：滇黄精可减轻糖尿病大鼠创面皮肤组织病变,增加表皮层和真皮层厚度,促进创面愈合。     

益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠转化生长因子β1的影响

目的:探讨益气化瘀中药及其拆方(益气方和化瘀方)促进糖尿病溃疡创面愈合的分子机制。方法:将60只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、贝复济组、模型组和正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素和外科方法建立糖尿病大鼠全层皮肤缺损模型,给予不同中药煎剂口服及贝复济外用对照,运用免疫组织化学、图像分析和Western blotting的技术手段分别检测各组治疗后创面新生肉芽组织中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达水平。结果:糖尿病溃疡模型组TGF-β1表达水平低于正常对照组(P<0.01);各治疗组TGF-β1表达水平高于糖尿病溃疡模型组(P<0.01);益气化瘀组TGF-β1表达水平高于拆方组和贝复济组(P<0.05)。结论:TGF-β1表达水平下降可能是糖尿病创面难以愈合的机制之一,益气化瘀中药可能是通过提高创面TGF-β1的表达水平,促进创面愈合。     

转录因子CaRF在大鼠皮肤创面愈合中的作用

目的 探讨转录因子(calcium-responsive factor, CaRF)在大鼠皮肤创面愈合中的作用.方法 建立大鼠背部皮肤全层切割伤模型,随机将大鼠分为3组:盐水对照组,CaRF过表达处理组,CaRF RNAi处理组,以脂质体转染的方式将CaRF和CaRF RNAi导入创面组织,观察3组大鼠背部皮肤伤口愈合状况.结果 CaRF过表达组大鼠皮肤愈合快, 愈合质量好,CaRF RNAi 组大鼠皮肤愈合最慢,愈合质量差.结论 CaRF促进大鼠皮肤创面愈合,为临床创面愈合提供了新的思路.     

糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞生物学行为的改变

目的研究糖尿病深Ⅱ度烫伤对真皮成纤维细胞(FB)生物学行为的影响。方法以链脲菌素(STZ)诱导糖尿病的深Ⅱ度10%TBSA烫伤大鼠模型,观察创面愈合情况。流式细胞术检测真皮组织中FB细胞周期;TUNEL法检测FB凋亡;伤后0、3、7、21d检测皮肤组织的羟脯氨酸含量。结果糖尿病大鼠深二度烫伤后愈合延迟,糖尿病组烫伤后进入S期的成纤维细胞数量明显低于正常组(P<0.01,P<0.05),创面凋亡细胞数量高于正常组(P<0.01,P<0.05);烫伤前和烫伤后糖尿病组皮肤组织单位面积羟脯氨酸含量均低于正常大鼠(P<0.01,P<0.05)。结论在糖尿病病理状态下,皮肤损伤后主要的修复细胞FB增殖异常,凋亡增多,胶原含量减少,可能是创面修复延迟的原因之一。     

脱细胞人胎羊膜在促进大鼠皮肤全层切口愈合中的作用机制

目的研究脱细胞人胎羊膜（HAM）对大鼠皮肤全层切口愈合过程中转化生长因子β（TGF-β）及凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）表达的影响,探讨其促进全层切口愈合及无瘢痕愈合的发生机制。方法建立Sprague．Dawley大鼠全层皮肤缺损模型,然后将大鼠分为对照组和HAM组,每组15只。对照组大鼠切口用生理盐水冲洗后纱布包裹,HAM组大鼠切口外敷HAM并用纱布包裹。应用免疫组织化学技术分析切创后不同时相大鼠皮肤组织中TGF-β及TSP-1的表达。结果切口处理后第3天对照组大鼠皮肤组织TGF-β及TSP-1表达高于HAM组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HAM可减少大鼠皮肤全层切口早期愈合过程中TGF—β及TSP-1的表达,促进切口愈合,减少瘢痕增生。     

糖尿病大鼠肾脏TGF-β受体蛋白表达的实验研究

目的：探讨持续高血糖对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子βⅠ型受体(TGFβRⅠ)和转化生长因子βII型受体(TGFβRII)蛋白表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠20只随机分为正常对照组（C组）和糖尿病组（D组），实验第9周用免疫组化和图像分析系统检测两组肾脏TGFβRI和TGFβRII蛋白表达水平。结果：与对照组相比，糖尿病组TGFβRI和TGFβII蛋白表达分别增加100%和118%（P<0.01）。结论：持续高血糖显著增加糖尿病大鼠肾脏TGFβRI和TGFβRII受体蛋白表达，可能对糖尿病肾病的发生发展发挥重要作用。     

祛瘀生肌法对SD大鼠创面模型新生肉芽组织中转化生长因子-β的动态影响

目的：探讨祛瘀生肌法对SD大鼠愈创模型肉芽组织中转化生长因子-β（TGF-β）水平的动态影响。方法：采用生肌化瘀方干预SD大鼠背部全层皮肤缺损模型，分别于不同干预时段（3d、7d、11d）取材，EnVision二步法免疫组化测定，并图像扫描定量分析TGF-β1、TGF-β3、水平变化。结果：第3、第7天生肌化瘀方组TGF-β1水平均高于生理盐水组（P〈0．05），第11天生肌化瘀方组TGF-β1水平低于生理盐水组（P〈0．05）；第3天生肌化瘀方组TGF—β3水平低于生理盐水组，而第7、第11天TGF-β3水平高于生理盐水组（P〈0．05）。结论：生肌化瘀方有调节创面TGF—β1、TGF—β3分泌的作用，以益于加速创面愈合、减少瘢痕形成。     

活性氧簇诱导硬皮病小鼠模型时效性的基础研究

目的应用活性氧簇(ROS)成分次氯酸(HCl O)构建硬皮病小鼠动物模型,观察其皮肤纤维化和肺间质病变发生的时效特点。方法 36只6周龄雌性Balb/c小鼠随机平均分至造模组和对照组。造模组随机分3组,每组6只,分别予小鼠背部中央区皮肤皮下注射HCl O 300μl,每日1次,分别持续4、5和6周;对照组随机分3组,每组6只,注射等量PBS,1次/日,分别持续4、5和6周。注射时间结束2周后处死小鼠,取注射部位周围、腹部皮肤及小鼠肺组织进行HE染色和Masson染色,镜下观察和测定各组皮肤厚度、胶原纤维含量,新鲜皮肤组织测定羟脯氨酸含量。结果 3组对照组(4、5、6周)小鼠背部和腹部皮肤均未出现表真皮层增厚和弹性降低,3组间皮肤厚度比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,连续注射4周HCl O的造模组小鼠背部均出现弥漫增厚,弹性降低,真皮层明显增厚,腹部皮肤真皮层有所增厚;连续注射6周HCl O的小鼠皮肤厚度较4周显著增加(P<0.05),胶原纤维增粗更加明显,并伴有纤维断裂,真皮层炎性细胞浸润,真皮血管壁增厚甚至闭塞。与对照组相比,连续注射4周的造模组小鼠未见明显肺间质病变,而6周造模肺组织出现肺泡间隔增厚,其间成纤维细胞增生,小血管壁增厚等纤维化表现。3组对照组(4、5、6周)小鼠之间背部皮肤的Masson染色胶原纤维组织化学指数比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,造模组背部皮肤的Masson染色胶原纤维组织化学指数升高,(P<0.05),且6周造模组的表达水平高于4周造模组,(P<0.05)。3组对照组(4、5、6周)小鼠之间背部皮肤的羟脯氨酸含量比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,造模组背部皮肤的羟脯氨酸含量升高(P<0.05),且6周造模组的表达水平高于4周造模组,(P<0.05)。结论ROS构建的硬皮病小鼠动物模型随诱导时间的延长可出现注射区域外皮肤弥漫纤维化和硬皮病肺间质病变,该模型更加符合硬皮病皮肤和肺部病理改变特点。     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对糖尿病小鼠创面愈合的作用

目的探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对糖尿病小鼠创面愈合的作用。方法C57BL/6小鼠42只,链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病小鼠模型。腹腔麻醉后在糖尿病小鼠背部中线两侧各制作0.8 cm×0.8 cm创面,左侧创面外用GM-CSF凝胶(GM-CSF处理组),右侧创面则给予不含药物的凝胶(对照组)。在创面形成后不同时相点,分别测量计算两组糖尿病小鼠创面的愈合率;组织M asson染色观察创面再上皮化程度和胶原纤维的沉积情况;碱性水解法测定反映局部胶原蛋白合成量的指标羟脯氨酸水平。结果GM-CSF处理组创面愈合率较对照组明显增加,从创面形成后3 d起两组差异显著(P<0.01);Masson染色组织学观察显示,GM-CSF处理组创面形成后不同时相点的再上皮化速率和胶原纤维沉积均较对照组明显加快;创面形成后3 d起,GM-CSF处理组羟脯氨酸水平较对照组明显增高。结论糖尿病小鼠创面外用GM-CSF凝胶,可诱导创面再上皮化和胶原蛋白合成,从而促进创面愈合。     

复黄生肌愈创油膏对糖尿病大鼠创面肉芽组织中TGF—β1与smad3、smad7 mRNA

目的：探讨复黄生肌愈创油膏（简称复黄膏）对糖尿病创面愈合的促进作用及可能的作用机制。方法：将雄性Wistar大鼠随机分为正常创面对照组、糖尿病模型组、复黄膏治疗组。制备糖尿病合并皮肤创面模型,模型组给予生理盐水纱布外敷,治疗组给予复黄膏外敷,1次／d。造模后分别于第3天和第11天分批处死动物,采用实时荧光定量PCR技术,观察不同时段创面中TGF-β1与smad3、smad7 mRNA含量变化。结果：在创面修复的第3天,治疗组TGF—β1、smad3 mRNA表达均明显高于模型组（P〈0．05）,且与正常组比较无统计学差异;第11天,治疗组TGF-β1、smad3 mRNA表达均明显低于正常组（P〈0．05）,但与模型组比较无统计学差异。第3天时,smad7含量各组比较无统计学差异;而第11天时,治疗组明显高于模型组（P〈0．05）,虽然与正常组比较无统计学差异,但药物干预组smad7 mRNA含量高于正常组。结论：复黄生肌愈创油膏在糖尿病溃疡创面愈合过程中可能动态调节smad3、smad7及TGF—β1 mRNA的表达,从而起到促进创面愈合的作用,同时可一定程度上减少瘢痕形成。     

高糖环境对浅二度烫伤创面VEGF表达及创面血管化的影响

目的建立糖尿病大鼠浅二度烫伤模型和不同浓度的高葡萄糖体外培养体系,研究高糖环境对促血管化生长因子的表达及创面血管化的影响。方法①90只清洁级SD大鼠分为对照组和STZ诱导的速发型糖尿病组,两组同时形成10%体表总面积(TBSA)的浅二度烫伤模型,分别取烫伤后第1、3、7、10、14天创面皮肤组织样本,测定糖含量、FGF-2、血管内皮生长因子(VEGF)表达,检测微血管密度。②人脐带静脉内皮细胞分别在正常环境及30、50mmol/L葡萄糖中培养7d,ELISA法检测内皮细胞释放VEGF水平。结果糖尿病组大鼠烫伤创面组织局部糖含量及VEGF表达均明显高于对照组,而其微血管密度显著低于对照组;体外培养的血管内皮细胞,高糖组释放VEGF水平显著低于正常环境组。结论在糖尿病浅二度烫伤创面愈合过程中,存在促血管化生长因子高表达与血管内皮细胞低反应性的分离现象。