灸法对阿尔茨海默病小鼠胶质细胞相关蛋白表达的影响

目的:探讨胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙接头蛋白(Iba-1)在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病中的作用,以及心俞、肾俞麦粒灸法对其的影响。方法:鉴定APP/PS1双转基因AD传代小鼠的基因表型,选取1.5月龄雌性转基因阳性Tg6799小鼠随机分为模型组9只和治疗组8只,同龄、同背景的C57BL/6J野生型雌性小鼠9只为正常对照组。治疗组取双侧心俞、肾俞行麦粒灸治疗,每日1次,10次为1个疗程,共治疗9个疗程,每个疗程之间间隔2 d。应用免疫组化法检测小鼠额叶皮层及海马区GFAP、Iba-1的表达水平。结果:与正常组相比,模型组额叶皮层区和海马区GFAP、Iba-1的表达增强(P<0.01);经麦粒灸法治疗后,治疗组小鼠大脑额叶皮层和海马区GFAP、Iba-1表达较模型组减少(P<0.05)。结论:心俞、肾俞麦粒灸疗法可减少GFAP、Iba-1的表达,抑制AD病理过程中胶质细胞的过度激活、增生,抑制神经炎症反应。     

麦粒灸对双转基因阿尔茨海默病小鼠额叶皮层及海马区Aβ_(1-42)表达的影响

目的:探讨在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)病理早期采用麦粒灸"心俞""肾俞"穴对转基因AD小鼠的治疗作用。方法:采用PCR法鉴定淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因AD传代小鼠的基因表型,选取1.5月龄雌性转基因阳性Tg6799小鼠17只,随机分为模型组(9只)和治疗组(8只),同龄、同背景的C57BL/6J野生型雌性小鼠9只作为正常组。治疗组取双侧"心俞""肾俞"穴行麦粒灸治疗,每日1次,10次为一疗程,共治疗9个疗程。模型组、正常组均给予抓取、固定及放置未燃烧的艾炷等刺激。应用Morris水迷宫中逃避潜伏期、穿越平台的次数及目标象限停留时间百分比来评价小鼠的学习记忆能力,苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠脑组织形态学的改变,免疫组化法检测小鼠额叶皮层及海马区β-淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein,Aβ1-42)的表达水平。结果:经麦粒灸法治疗后,治疗组小鼠学习记忆能力提高,与模型组比较,逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增多,目标象限停留时间延长(均P0.05);治疗组穿越平台次数及目标象限停留时间与正常组比较差异无统计学意义(均P0.05)。与正常组相比,模型组AD小鼠大脑额叶皮层、海马区Aβ1-42表达阳性面积和总光密度明显增高(均P0.01);与模型组相比,治疗组大脑额叶皮层、海马区Aβ1-42表达阳性面积和总光密度明显减少(P0.01,P0.05)。结论:麦粒灸"心俞""肾俞"穴可显著改善APP/PS1转基因AD小鼠的学习记忆能力,抑制Aβ1-42的过度表达、聚集。     

灸法早期干预对5XFAD转基因小鼠β淀粉样蛋白_(1-40)表达的影响

目的探讨灸法早期干预对阿尔茨海默病模型(AD)小鼠脑内Ab_(1-40)的影响,对艾灸防治AD的作用机制进行探讨。方法 PCR法鉴定转基因AD传代小鼠的基因表型,选取1.5月龄雌性转基因阳性Tg6799小鼠随机分为模型组9只和治疗组8只,同龄、同背景的C57BL/6J野生型雌性小鼠9只为正常组。治疗组进行双侧心俞、肾俞麦粒灸治疗,治疗结束后,应用免疫组化法检测小鼠额叶皮层及海马区Ab_(1-40)的表达水平。结果与模型组比较,治疗组小鼠大脑额叶皮层和海马区Ab_(1-40)表达明显减少(P0.01,P0.05)。结论艾灸疗法早期干预可减少AD模型小鼠脑内Ab_(1-40)的表达,延缓AD病理过程的进展。     

麦粒灸对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及脑内淀粉样蛋白沉积的影响

目的:观察麦粒灸对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及脑内淀粉样蛋白(Aβ)沉积的影响,探讨麦粒灸防治AD的机制。方法:选取APP/PS 1双转基因AD小鼠17只,随机分为模型组9只和治疗组8只,同龄、同背景的C 57BL/6J阴性纯合子小鼠9只为正常组。治疗组取双侧"心俞""肾俞"行麦粒灸治疗,每日1次,10次为1个疗程,共治疗9个疗程。观察逃避潜伏期、穿越平台的次数及目标象限停留时间百分比来评价小鼠的学习记忆能力,刚果红染色法观察小鼠脑内Aβ沉积的变化。结果:与正常组比较,模型组逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,目标象限停留时间百分比减少(P0.05);模型组小鼠大脑额叶皮层和海马区呈现大小不一的Aβ沉积物。治疗后,治疗组小鼠学习记忆能力提高,与模型组小鼠比较,逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增多,目标象限停留时间百分比增加(P0.05);治疗组小鼠大脑额叶皮层区和海马区Aβ沉积较模型组减少(P0.05)。结论:麦粒灸疗法可显著改善APP/PS 1转基因AD小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与有效抑制大脑额叶皮层区和海马区Aβ沉积有关。     

麦粒灸对双转基因AD小鼠GFAP与Ab_(1-42)斑块共定位的影响

目的探讨麦粒灸治疗阿尔茨海默病(AD)的相关机制及对小鼠脑内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与b-淀粉样蛋白_(1-42)(Ab_(1-42))斑块的共定位的影响。方法 PCR法进行小鼠基因型的鉴定,将1.5月龄双转基因AD小鼠40只,随机分为治疗组和模型组各20只,同龄、同背景的阴性纯合子小鼠20只,为正常组。治疗组小鼠取双侧心俞、肾俞行麦粒灸治疗。采用免疫荧光法检测AD转基因小鼠GFAP与Ab_(1-42)斑块的共定位情况。结果模型组AD小鼠额叶皮层和海马区GFAP与Ab_(1-42)阳性细胞共表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组AD小鼠治疗后额叶皮层、海马区GFAP与Ab_(1-42)阳性细胞共表达率低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论早期麦粒灸疗法可以抑制AD小鼠星形胶质细胞的炎症反应,抑制Ab异常聚集,延缓AD病理过程的进展。     

“通督启神”法两种电针对APP/PS1小鼠额叶皮层小胶质细胞TNF-α表达的影响

目的：观察“通督启神”法不同电针对APP/PS1 小鼠学习记忆能力及额叶皮层MG与TNF-α表达的影响,探讨不同电针治疗AD的疗效差异及其作用机制。方法：APP/PS1小鼠随机分为模型组、脉冲电针组和音乐电针组,C57BL/6小鼠为正常对照组,每组8只。先取“人中”点刺,后取“百会”、“印堂”二穴,连接脉冲电针及音乐电针,留针20min。正常对照组与模型组同样方法束缚20min。治疗15天后,用Morris水迷宫检测小鼠的行为学变化,免疫组化观察小鼠额叶皮层小胶质细胞活化情况,Western Blot检测小鼠额叶皮层TNF-α的表达含量。结果：“通督启神”法不同电针均可显著改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力（P<0.05）,降低AD小鼠额叶皮层小胶质细胞标记物Iba-1的表达（P<0.05）及TNF-α蛋白的表达（P<0.05）,且音乐电针组均优于脉冲电针组（P<0.05）。结论：“通督启神”法不同电针可有效改善APP/PS1小鼠学习记忆能力,抑制小胶质细胞活化、减少TNF-α的分泌,且音乐电针在改善额叶皮层炎性反应方面优于脉冲电针,对AD有更好的治疗效果。     

清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及海马CA1区Akt、GSK3α、βAPP、Aβ表达的影响

目的:探讨清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力、海马CA1区神经元形态学的改变,以及对Akt、GSK3α、βAPP、Aβ蛋白表达的影响。方法:选取50只3月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠,随机分为模型组、多奈哌齐组(1.67 mg·kg~(-1))、清心开窍方高、中、低剂量组(每日给药剂量分别为19、9.5、4.75 g·kg~(-1)),另取10只同背景同性别同月龄的C57BL/6J小鼠作为对照组,对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续灌胃12周。采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,透射电镜观察小鼠海马CA1区神经元超微结构,尼氏染色法观察小鼠海马CA1区神经元损伤情况,免疫组织化学染色法检测海马CA1区Akt、GSK3α、βAPP、Aβ蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,模型组APP/PS1双转基因小鼠逃避潜伏期延长(P0.01),穿台次数减少,其海马CA1区神经元超微结构出现严重损伤,锥体细胞数量减少,排列紊乱,尼氏体着色变浅,Akt蛋白表达减少(P0.01),GSK3α、βAPP、Aβ表达增加(P0.01);与模型组比较,清心开窍方干预组逃避潜伏期均明显缩短(P0.01),穿台次数增多,同时比较小鼠在原平台停留的时间和路程百分比均明显增加(P0.05;P0.01),其神经元结构较完整,核膜清晰,胞浆内核糖体丰富,线粒体数量增多,且嵴结构完整,锥体细胞数量增多,排列紧密,尼氏体着色较深,同时Akt蛋白表达增加(P0.01;P0.05),GSK3α、βAPP、Aβ表达减少(P0.01;P0.05)。结论:清心开窍方能够改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力,其机制可能与Akt/GSK3α介导的信号通路相关,它能够激活Akt,抑制GSK3α,降低βAPP、Aβ的生成,减少神经元损伤。     

地黄饮子对APP/PS1小鼠IL-1、TNF-α和NF-κB p65的影响

目的研究地黄饮子(DHYZ)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠炎症因子和核转录因子(NF-κB)的影响。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型组、DHYZ组;另以同背景同月龄的C 57 BL/6 J阴性小鼠为空白组。DHYZ给予地黄饮子相当于生药9. 75 g/(kg·d)灌胃,模型组和空白组给予等量蒸馏水灌胃。各组灌胃30天后进行Mirror水迷宫空间探索试验后取材。HE染色法观察皮层及海马CA1区神经细胞的形态结构;尼氏染色法观察神经元;免疫组化方法检测炎症因子TNF-α、IL-1β; Western印迹检测法检验磷酸化NF-κB p65(pp65)的表达。结果 DHYZ降低APP/PS1小鼠皮层和海马组织的TNF-α、IL-1β(P <0. 01)和皮层区NF-κB pp65(P <0. 01),进而改善皮层及海马CA1区细胞的形态结构和增加皮层及海马区的尼氏小体数量。结论 DHYZ改善学习记忆能力可能通过抑制pp65,下调细胞炎性因子IL-1和TNF-α的释放水平,使皮层及海马神经元损伤减少。     

“益肾调督”电针法对阿尔茨海默病小鼠大脑海马老年斑形成的影响

目的:观察"益肾调督"电针法对APP/PS 1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马区老年斑(SP)及其相关蛋白表达的影响,探讨电针改善AD的机制。方法:APP/PS 1双转基因AD小鼠随机分为模型组、电针两疗程组和电针三疗程组,每组6只;6只雄性野生型小鼠为对照组。给予各电针组小鼠"百会"和双侧"肾俞"电针治疗,每天1次,7d为1个疗程,分别进行2个或3个疗程。Morris水迷宫实验观察各组小鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法检测海马区SP的表达情况,Western blot法检测海马区淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶1(BACE 1)和胰岛素降解酶(IDE)的表达水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期和搜索路径均明显增加(P0.01,P0.05),穿越原平台的次数明显减少(P0.01);与模型组相比,两治疗组小鼠的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径均明显缩短(P0.01),穿越原平台的次数明显增加(P0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径也明显缩短(P0.05,P0.01),穿越原平台的次数明显增加(P0.05)。对照组小鼠海马区无SP阳性斑块;模型组SP数目较对照组明显增加(P0.01);与模型组相比,两治疗组海马区的SP数目均明显减少(P0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组SP数目明显减少(P0.01)。模型组小鼠海马区APP、BACE 1表达水平明显高于对照组(P0.01),IDE表达水平明显低于对照组(P0.01);两治疗组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于模型组(P0.01),IDE表达水平明显高于模型组(P0.01);电针三疗程组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于电针两疗程组(P0.01,P0.05),IDE表达水平明显高于电针两疗程组(P0.05)。结论:"益肾调督"电针法可降低AD小鼠海马区APP、BACE 1表达,提高IDE的表达,从而减少海马区SP的沉积,改善其学习记忆和空间探索能力。     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠的影响及机制研究

目的：采用APP/PS1双转基因AD模型小鼠通过两种行为学实验,观察补阳还五汤的抗阿尔茨海默病作用。方法：将60只APP/PS1小鼠随机分为5组,分别为模型组、多奈哌齐组、补阳还五汤高、中、低剂量组,以C57BL/6J 作为空白组。给药30 天后,开始进行行为学实验,包括新物体识别实验和避暗实验。用western blot方法检测小鼠海马炎症因子IL-6和TNF-α的表达。结果：与模型组相比,补阳还五汤高、中剂量组能够明显降低APP/PS1小鼠海马炎症因子IL-6和TNF-α的表达,并且能明显改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。结论：补阳还五汤能够明显降低APP/PS1双转基因AD模型小鼠炎症因子的表达,并且明显改善其学习行为能力,可能能够用于阿尔茨海默病的治疗。     

“益肾调督”针灸法对AD大鼠血清Aβ及海马APP表达的影响

目的探讨针加灸防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为4组:正常组、模型组、假手术组及针加灸治疗组。大鼠海马注射Aβ1-42复制AD模型,在百会和肾俞(双)进行针刺加灸,用ELASA法检测血清Aβ水平,用免疫组化方法检测大鼠海马CA1区APP蛋白的表达。结果模型组血清Aβ浓度,海马APP的表达比正常组、假手术组显著升高(P0.05),针加灸治疗组与模型组比较,能显著降低血清Aβ及海马APP的表达,有显著差异(P0.01)。结论 "益肾调督"针加灸法可能通过减少或抑制AD大鼠血清内Aβ水平,降低大鼠海马CA1区APP的表达,延缓阿尔茨海默病的病理进程,对AD起着有效的防治作用。     

基于P38 MAPK信号通路探讨艾灸督脉对APP/PS1双转基因AD小鼠自噬水平的研究

摘要：目的：观察p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路来探讨艾灸督脉“百会”“大椎”“风池”穴对APPswe/PS1de9（APP/PS1）双转基因阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）小鼠脑内β-淀粉样蛋白（amyloid β-peptide,Aβ）清除功能的影响。方法：将48只APP/PS1双转基因AD小鼠随机分为模型组、艾灸组、西药Ⅰ组、西药Ⅱ组,每组小鼠12只且相同年龄相同条件的C57BL/6J雄性小鼠作为对照组。艾灸组小鼠实按灸“百会”、雀啄灸“大椎”和“风池”,每次灸20min,一天一次,治疗2周;西药Ⅰ组每只小鼠腹腔注射雷帕霉素,2mg?kg-1?d-1,治疗2周;西药Ⅱ组在艾灸组治疗基础上同时给予3-甲基腺嘌呤腹腔注射,1.5mg?kg-1?d-1,治疗2周;模型组和对照组动物不给予任何干预并常规饲养2周。各组小鼠于治疗结束后,用免疫组织法、透射电镜法、Western blot法依次分别检测小鼠皮质和海马脑区Aβ1-42 表达水平、海马区自噬体形成和海马组织p38MAPK、Bcl-2、Beclin-1相关蛋白表达。结果：免疫组织化学结果显示,与对照组相比,模型组小鼠大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达阳性增多（P﹤0.01）;与模型组相比,艾灸组、西药Ⅰ组、西药Ⅱ组小鼠大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达阳性减少（P﹤0.01）;与艾灸组相比,西药Ⅰ组大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达差异无统计学意义（P﹥0.05）,西药Ⅱ组小鼠大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达阳性增多（P﹤0.01）。透射电镜结果显示,模型组海马区可见神经元变形、萎缩或不规则,细胞胞质内自噬泡减少;艾灸组海马区有部分神经元变形、萎缩、不规则,胞质内自噬泡增多;西药Ⅰ组胞质内自噬泡增多,神经元变形;西药Ⅱ组偶见少量自噬泡和较多变形神经元。Western blot结果显示,模型组p38 MAPK、Bcl-2蛋白表达较对照组显著升高（P﹤0.05）,而模型组Beclin-1蛋白表达较对照组显著下降（P﹤0.05）。与模型组相比,艾灸组、西药Ⅰ组、西药Ⅱ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达均明显下降（P﹤0.05）,但Beclin-1蛋白表达上升（P﹤0.05）。与艾灸组相比,西药Ⅰ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达稍微升高（P﹤0.05）,而Beclin-1蛋白表达稍微下降（P﹤0.05）;西药Ⅱ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达显著升高（P﹤0.05）,而Beclin-1蛋白表达显著下降（P﹤0.05）。与西药Ⅰ组相比,西药Ⅱ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达显著升高（P﹤0.05）,Beclin-1蛋白表达显著下降（P﹤0.05）。结论：通过加速自噬的作用,艾灸督脉可以清除APP/PS1双转基因AD小鼠脑区Aβ1-42 蛋白异常沉积,作用机制与艾灸督脉抑制P38 MAPK信号通路的异常激活可能有关。     

石菖蒲活性成分对双转基因小鼠APP及神经突触超微结构的影响

目的　探讨石菖蒲活性部位β-细辛醚和丁香酚对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)表达及神经突触超微结构的影响。方法　3月龄SPF级雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠12只,随机分为4组:模型组、安理申(以安理申为阳性对照药)组、β-细辛醚组及丁香酚组,每组3只,用同龄同背景APPswe/PS1dE9转基因阴性小鼠3只作为正常对照组。用药4个月后,免疫组织化学染色方法检测大脑内海马及皮层APP表达水平,并采用透射电子显微镜观察海马CA1区神经元及神经突触的超微结构的变化。结果　模型组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比较正常对照组显著增加(P < 0.01)。与模型组比较,安理申组和β-细辛醚组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P < 0.01);丁香酚组皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P < 0.01)。透射电子显微镜观察,与正常对照组比较,模型组小鼠海马CA1区神经元神经毡内突触结构表现为大片的轴浆空泡化,突触数量减少,突触界面变短或融合消失,突触小泡数量明显减少,突触前膜、后膜及突触间隙大多模糊不清,突触后成分致密区厚度变薄,典型的突触结构已遭破坏,部分线粒体有轻微破损。安理申组、β-细辛醚组及丁香酚组小鼠海马CA1区神经突触结构与正常对照组比较无明显差异,与模型组比较在细胞器结构、轴浆空泡化、突触数量、突触界面、突触小泡数量及突触结构上均有不同程度的改善。结论　β-细辛醚及丁香酚可以抑制APP的过量表达,对与学习记忆密切相关的突触有一定的保护和修复作用。     

大补元煎通过上调BDNF/TrkB/CREB信号通路改善APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马突触可塑性

目的:观察大补元煎对APP/PS1痴呆小鼠海马突触可塑性及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的作用,并探讨其改善突触可塑性的可能机制。方法:将APP/PS1小鼠36只分为模型组、多奈哌齐组(6.5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和大补元煎组(13.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),野生鼠12只设为正常组,正常组和模型组给予等体积生理盐水,各组连续灌胃30 d。应用Morris水迷宫检测各组小鼠的学习记忆能力,应用尼氏染色和高尔基染色观察海马区神经元和突触的病理形态变化,应用免疫荧光(IF)观察海马突触后致密蛋白95(PSD95)及突触素(SYN)的蛋白表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马中BDNF,TrkB,CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程增加(P0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间减少(P0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体减少或消失,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量、树突棘密度减少(P0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平减少(P0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程减少(P0.05,P0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间增加(P0.05,P0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体数量增多,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量,树突棘密度增加(P0.05,P0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平增加(P0.05,P0.01)。结论:大补元煎改善APP/PS1双转基因小鼠突触可塑性的机制可能与其上调小鼠海马中BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。     

黑逍遥散对AD模型小鼠海马区APP，PERK表达的影响

目的:研究黑逍遥散对阿尔茨海默症(AD)模型小鼠海马神经元内质网应激的影响,包括行为学、组织病理学及淀粉样前体蛋白(APP),类蛋白激酶内质网激酶(PERK)等因子的表达。方法:使用SPF级的4月龄双转基因(APP/PS1)雄性小鼠42只随机分为黑逍遥散高、低剂量组(6,3 g·kg~(-1)),盐酸多奈哌齐组(3. 25 mg·kg~(-1))及模型组4组,同种系同月龄C57BL小鼠10只作为正常组。首先适应环境1周,经不同药物干预治疗2个月后,用Morris水迷宫行为学检测每组小鼠的学习和记忆能力;再治疗1个月后,通过光镜来观察每组小鼠海马区组织病理学改变;免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠海马区细胞内质网组织中APP,PERK蛋白及mRNA的表达情况。结果:药物干预治疗后,与正常组比较,模型组小鼠的逃避潜伏期显著延长(P 0. 01);模型组小鼠海马区内神经元严重损伤;模型组APP,PERK的表达量显著升高(P 0. 01)。与模型组比较,各给药组小鼠逃逸潜伏期均明显缩短(P 0. 05,P 0. 01);海马区内神经元损伤程度均减轻; APP,PERK的表达均明显降低(P 0. 05)。结论:黑逍遥散能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力,可能与减少内质网过度应激反应等方面来减轻AD小鼠认知能力损伤有关。     

艾灸督脉组穴对血管性痴呆大鼠皮层和海马中晚期糖基化终产物受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1表达及神经元超微结构的影响

目的:观察艾灸督脉组穴对血管性痴呆(VD)大鼠大脑皮层和海马中晚期糖基化终产物受体(RAGE)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)、β淀粉样蛋白前体(APP)表达和神经元超微结构的影响,探讨艾灸治疗VD的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组,每组8只。采用结扎颈总动脉反复缺血再灌注法制备VD模型,艾灸组取"百会""大椎""风府"温和灸30min,每天1次,7d为1个疗程,共治疗4个疗程。采用Morris水迷宫法检测大鼠行为学变化,Western blot法检测各组大鼠大脑皮层和海马组织RAGE和LRP-1蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠皮层和海马组织RAGE、LRP-1、APP mRNA表达水平,透射电镜观察大鼠大脑皮层额叶和海马CA1区超微结构。结果:Morris水迷宫结果显示,造模后第4天,模型组和艾灸组大鼠的平均逃避潜伏期较正常组显著延长(P0.01)。治疗结束后,与正常组比较,模型组大鼠大脑皮层和海马组织中RAGE蛋白和mRNA表达显著升高(P0.01),LRP-1蛋白和mRNA表达显著降低(P0.01),APP mRNA表达明显升高(P0.01)。与模型组比较,艾灸组大鼠大脑皮层和海马组织中RAGE蛋白和mRNA表达显著降低(P0.01),LRP-1蛋白和mRNA表达显著升高(P0.01),APP mRNA表达明显降低(P0.01)。电镜结果显示,模型组皮层额叶和海马CA1区神经元线粒体明显扩张,外膜破坏、溶解,嵴排列紊乱或消失,胞质内水肿明显,糖原颗粒基本消失;艾灸组皮层额叶和海马CA1区神经元线粒体少数肿大、扩张,粗面内质网少数轻度扩张,糖原颗粒可见。结论:艾灸督脉组穴可能通过调节RAGE和LRP-1的表达水平降低脑内APP含量,改善VD大鼠大脑皮层额叶和海马CA1区神经元线粒体损伤。     

五味子醇甲对APP/PS1小鼠学习记忆和NF-κB p65的影响

目的研究五味子醇甲(SCH)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠行为学和NF-κB p65的影响。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型(APP/PS1)组、五味子醇甲(SCH+APP/PS1)组;另以同背景同月龄的C 57 BL/6 J阴性小鼠为空白(WT)组。SCH+APP/PS1组给予SCH悬浊液灌胃(2.6 mg·kg^-1·d^-1),模型组和空白组给予等量蒸馏水灌胃。各组灌胃30 d进行Mirror水迷宫空间探索试验后取材。HE染色法观察皮层及海马CA1区神经细胞的形态结构。运用DCFH-DA法检测脑组织活性氧(ROS)含量。Western印迹检测法检验磷酸化核转录因子(NF-κB p65,pp65)的表达。结果与APP/PS 1组相比,APP/PS 1+SCH组有效区停留距离及时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);APP/PS 1+SCH组穿越有效区次数和平台区停留距离增加,均差异有统计学意义(P<0.01)。APP/PS 1+SCH组HE染色观察皮层有部分神经细胞萎缩、减少,较APP/PS1组明显好转,海马细胞排列整齐度尚可、较均匀。与APP/PS1组相比,APP/PS1+SCH组能降低ROS含量,差异有统计学意义(P<0.05)。APP/PS 1+SCH组皮层及海马pp65蛋白相对表达量下调(P<0.05,P<0.01)。结论SCH可能通过降低ROS含量和抑制pp65保护脑组织形态结构和提高APP/PS1鼠空间探索记忆能力。     

观察电针“百会”、“涌泉”两穴对不同月龄APP/PS1双转基因小鼠海马Aβ淀粉样沉淀及超微结构的影响

目的观察电针"百会"、"涌泉"两穴对5月龄和10月龄淀粉样前体蛋白/早老蛋白1(amyloid precursor protein/presenilin-1,APP/PS1)双转基因鼠海马β淀粉样蛋白(AmyloidβProtein,Aβ)沉积及超微结构的影响。方法分别将4月龄和9月龄的APP/PS1双转基因小鼠按随机分配法分为模型组、电针组和药物组,以相同月龄同窝阴性小鼠作为对照组,4月龄每组12只,9月龄每组11只。电针组取"百会"、"涌泉"两穴,每次留针时间为15分钟,隔日1次,治疗5周;药物组予多奈哌嗪片0.92 m L/g灌胃,取脑透射电镜片并观察。结果 5月龄透射电镜结果显示:在微血管、神经元突触及神经元超微结构上对照组优于模型组。10月龄透射电镜结果显示:模型组海马出现Aβ淀粉样沉淀——老年斑。结论 5月龄小鼠行为学出现阿尔茨海默病样改变;10月龄APP/PS1双转基因小鼠海马出现老年斑;电针治疗APP/PS1双转基因小鼠可能对海马超微结构有保护作用。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马IRS-1和p-IRS-1表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响.方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照罗格列酮组(10mg.kg-1·d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,l00mg.kg-1·d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠.灌胃3个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法进行检测.结果:IRS-1和p-IRS-1免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较对照组明显增加(P＜0.01),p-IRS-1明显减少(P＜0.01);与模型组相比,姜黄素各干预组可减少IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01),并升高p-IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01).Westem blot检测海马IRS-I和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组织化学检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组织化学和Western blot结果相反.结论:姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并增加IRS-1 mR-NA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗AD作用.     

电针对APP/PS1转基因小鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白-1及其mRNA表达的影响

目的:研究电针是否是通过影响LRP1mRNA水平、提高LRP1的表达,从而促进脑内Aβ清除。方法:将4月龄APP/PS1转基因鼠,随机分为模型组、电针治疗组,以同窝同背景转基因阴性小鼠为正常对照组。电针干预"涌泉"、"百会"0.1 m A,15 min/次,隔日1次,治疗6周。治疗后,以免疫组化法观察脑组织LRP1阳性表达,以Western blotting法检测海马LRP1表达,以Real-time PCR法检测海马LRP1mRNA表达。结果:LRP1表达于脑微血管内皮细胞、胶质细胞、神经元等处。模型组海马LRP1蛋白、LRP1mRNA相对表达量低于正常对照组(P0.05),电针治疗组海马LRP1及LRP1mRNA比模型组有上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:电针干预可能影响5月龄APP/PS1转基因小鼠海马内所有细胞LRP1及LRP1mRNA表达,可能是电针干预AD发病的潜在靶点,但实验方案还需进一步完善。