哮喘大鼠肺泡灌洗液中IL—5和PLA2的变化与支气管上皮IC …

目的：探讨白细胞介素－５（ＩＬ－５）、磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）及细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）在哮喘气道炎症细胞浸润中的作用及其相互关系。方法：采用卵蛋白等致敏大鼠哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＩＬ－５、ＰＬＡ２含量的变化,以及二者与ＩＣＡＭ－１表达之间的关系。结果：与对照组比哮喘组ＢＡＬＦ中ＩＬ－５含量和ＰＬＡ２活性显著增高,尤其是ＩＬ－５增高更显著;支气管上皮细胞ＩＣＡＭ－１的表达     

MIF基因修饰的FBL3红白血病细胞的生物学性质

目的：研究巨噬细胞游走抑制因子（ＭＩＦ）基因修饰的ＦＢＬ３红白血病细胞的生物学性质变化,为探讨其体内诱导抗肿瘤免疫反应的作用奠定基础。方法：以腺病毒介导,将ＭＩＦ基因导入小鼠ＦＢＬ３红白血病细胞,观察其体外生物学性质变化。将ＭＩＦ基因修饰的ＦＢＬ３细胞（ＭＩＦ－ＦＢＬ３）接种小鼠体内,观察其致瘤性和局部病理学变化,同时检测细胞因子ｍＲＮＡ表达。结果：腺病毒能有效地将ＭＩＦ基因导入ＦＢＬ３细胞,ＭＩ     

EB病毒核抗原-1特异性核酶对成淋巴细胞系肿瘤形成能力的影响

目的 探讨腺病毒载体介导的ＥＢ病毒核抗原－１（ＥＢＮＡ－１）特异性核酶对成淋巴细胞系（ＬＣＬｓ）在严重的联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠体内致瘤性的影响,方法 用分子克隆技术构建ＥＢＮＡ－１核酶（ＲＺ１）及其无活性诱变体（ＲＺ１ ｍｕｔ）的重组腺病毒表达载体（Ａｄ．ＲＺ１和Ａｄ．ＲＺ１ｍｕｔ）。通过同源重组方式在２９３细胞生成腺病毒,并通过噬斑形成进行分离建立ＬＣＬ。将感染重组腺病毒的ＬＣＬ细胞注射于     

双亚基共表达人白细胞介素12重组腺病毒载体的构建与应用

目的构建双亚基共表达人白细胞介素１２（ＩＬ－１２）重组腺病毒载体,为其临床研究提供实验基础。方法利用ＲＴ－ＰＣＲ分别克隆出人ＩＬ－１２两个亚基ｐ４０和ｐ３５的全长编码ｃＤＮＡ,经脑心肌炎病毒的内部核糖体结合位点（ＩＲＥＳ）序列连接后置于ＣＭＶ启动子下游,将其插入Ｅ１区替代的腺病毒载体ｐＡｘ１ｃｗ,构建成人ＩＬ－１２的双顺反子共表达重组腺病毒载体;与ＥｃｏＴ２２Ｉ酶切的Ａｄ５腺病毒ＤＮＡ－末端肽复合物共转染２９３细胞,经同源重组制备人ＩＬ－１２的重组腺病毒。结果扩增到的人白介素１２重组腺病毒滴度为２．１×１０９ｐｆｕ／ｍｌ,体外感染２９３细胞、ＨｅｐＧ２细胞和人原代皮肤成纤维细胞后,经ＥＬＩＳＡ检测证实人ＩＬ－１２的表达（３０～５０ｎｇ／１０６细胞／２４小时）,所表达的ＩＬ－１２体外能刺激人淋巴母细胞的增殖和ＩＦＮ－γ的产生。结论所制备的人ＩＬ－１２双亚基共表达重组腺病毒载体能有效表达具有生物学活性的人ＩＬ－１２,可望进一步用于临床研究。     

SMU1对正常人体外PBMNC功能效应的影响

目的：研究ＳＭＵ１（自制抗ＣＤ３）对正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）的体外功能效应,方法：（地）以ＳＭＵ１６种不同浓度、ＩＬ－２、ＭＣＤ３（丝裂性抗ＣＤ３）孵育ＰＢＭＮＣ,观察细胞密度和形态变化,ＭＴＴ法测定细胞增殖力;（２）分别用ＳＭＵ１０．５ｍｇ／Ｌｆ、５ｍｇ／Ｌ、ＩＬ－２２００ｋＵ／Ｌ培养ＰＢＭＮＣ３ｄ,ＥＬＩＳＡ法测定上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α及Ｇ－ＣＳＦ水平。结     

特发性肺纤维化患者IL—6水平与T细胞功能的检测

采用生物活性检测法，观察特发性肺纤维化（ＩＰＦ）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）自泌白细胞介素６（ＩＬ－６）水平及白细胞分化抗原３（ＣＤ３）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）诱导下的Ｔ细胞功能，结果表明：ＩＰＦ患者ＩＬ－６自泌水平明显高于正常对照组（Ｐ〈０．００１）；在体外ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导下，ＩＰＦ患者Ｔ细胞对抗原免疫应签能力与Ｔ细胞在体内的活化过程大致相符，且对ＩＬ－６分泌呈异常高表达，提示ＩＬ－６分泌水     

IL—1影响L—细胞造血调节作用的实验研究

目的：研究白细胞介素－１与Ｌ－细胞在造血调控中的可能关系,丰富造血调控理论。方法：在体外祖细胞培养中以不同浓度的ＩＬ－１诱导和未经诱导的Ｌ－细胞条件培养液替代造血生长因子,观察集落产率的变化,并与ＩＬ－１和ＬｃＣＭ共同作用后的集落产率作比较。结果：ＩＬ－１在１２．５￣１００ｕ／ｍｌ浓度范围内,ＬｃＣＭＩＬ－１作者后的粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）,早期红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）,晚期红系祖细胞（ＣＦ     

IL—1β和IL—2对培养的大脑皮质神经元Glu和GABA免疫反应？…

为了研究细胞因子白细胞介素－１（ＩＬ－１）和白细胞介素－２（ＩＬ－２）对神经系统兴奋性的调节作用，将ＩＬ－１β和ＩＬ－２分别作用于培养的大鼠大脑皮质神经元，然后观察其对谷氨酸（Ｇｌｕ）和ｒ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应神经元的影响，并对实验结果进行了图像分析和统计学处理，结果显示：ＩＬ－１β（１０＾５ｕ／Ｌ）作用于培养的神经元后，Ｇｌｕ免疫反应神经元增加（Ｐ〈０．０１），但不引起ＧＡＢＡ免疫反应神     

腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱导和肝细胞毒性损害

目的 研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用。方法 应用ＴＵＮＥＬ细胞凋亡检查法和光镜观察，分析同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－、ｐ５３、ＩＬ－２４种目的基因的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９和肝细胞系Ｌ０２的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害。结果 Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ与化疗药     

HPV16L1—E7重组腺病毒rAd5HPV16L1—E7的构建及克隆表达

目的：研制人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｌ１－Ｅ７重组腺病毒,以期获得防治宫颈癌的组腺病毒减毒活疫苗和嵌合病毒样颗粒疫苗。方法：以ＨＰＶ１６型－１１４／Ｋ为模板,利用ＰＣＲ克隆技术构建可表达ＨＰＶ１６主要宙蛋白Ｌ１（１－３０１ａａ）和转蛋白Ｅ７（１－６０ａａ）融合基因的重组质粒ｐＵＣ１９Ｌ１－ｐＨＢＧ１０共转染２９３细胞,制备重组腺病毒ｒＡｄ５ＨＰＶ１５６Ｌ１－Ｅ７,密度梯度超速离心纯楷ＨＰＶ     

联合应用IL-2和IL-3的基因疗法增强骨髓移植后骨髓细胞毒活性及抗肿瘤效果的实验研究

目的：探讨联合应用成纤维细胞介导ＩＬ２和ＩＬ３的基因疗法对骨髓移植（ＢＭＴ）后荷瘤小鼠抗肿瘤作用的效果及机理。方法：将分别转染ＩＬ２基因及ＩＬ３基因的ＮＩＨ３Ｔ３细胞以单独或联合方式移植至ＢＭＴ的荷瘤小鼠腹腔内８ｄ后，取出小鼠骨髓细胞检测杀伤活性的变化以及ＩＬ２受体的表达，并观察荷瘤小鼠的存活期。结果：ＩＬ３基因治疗虽然可加速ＢＭＴ后造血重建过程，但对骨髓细胞的ＮＫ、ＬＡＫ活性具有一定的抑制作用；ＩＬ２基因治疗可明显提高骨髓细胞的杀伤活性；联合应用基因治疗后荷瘤小鼠骨髓ＮＫ、ＬＡＫ活性及骨髓细胞ＣＤ２５表达升高，明显延长大剂量化疗后接受ＢＭＴ的荷瘤小鼠的存活期。结论：联合应用ＩＬ２和ＩＬ３的基因疗法能协同提高骨髓细胞ＩＬ２受体表达水平，提高骨髓细胞毒活性，增强ＢＭＴ后的抗肿瘤效果。     

Estabishment of A Human Liver Cancer Cell Line Transfected with IL-2 cDNA and Its Biologic Activity

Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｎｄｕｃｅａｎｔｉ ｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙ ,ｓｃｉ ｅｎｔｉｓｔｓｓｉｎｃｅｌｏｎｇａｇｏｈａｖｅａｔｔｅｍｐｔｅｄｔｏｉｎｔｅ ｇｒａｔｅｃｅｌｌｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｉｎｔｏｔｕｍｏｒｃｅｌｌｖｉａｇｅ ｎｏｍｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｔｏｍａｋｅｉｔｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙｅｘ ｐｒｅｓｓｌｏｃａｌｌｙ .ＩｎｔｈｉｓｓｕｒｖｅｙｈｕｍａｎｌｉｖｅｒｃｅｌｌＳＭＭＣ 772 1ｗａｓｃｏｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒＬＮＣ ＩＬ2 .Ｔｈｅ…     

以逆转录病毒为载体的IL-2基因转染K562细胞的研究

目的研究以逆转录病毒为载体将IL-2基因转入K562细胞及表达情况.方法应用脂质体介导的基因转移法,将质粒PGEN/IL-2导入包装细胞PA317,将K562细胞与PA317/IL2细胞共培养,检测IL-2cDNA整合,mRNA转录情况,以IL2依赖性CTLL-2细胞测定培养细胞上清中IL-2产量,比较转染前后细胞的体外生长情况和致瘤性.结果IL2 cDNA成功整合入K562细胞基因组中并稳定表达,K562/IL-2细胞培养24h上清中IL-2活性为100U/ml,体内外观察均见细胞生长减慢.结论以脂质体介导的以双顺反子逆转录病毒为载体的基因转移方法,可成功地将人IL2基因转入人白血病细胞株K562,并持续分泌高活性的IL-2,为下一步将IL-2基因转入CML造血细胞的研究打下基础.     

野生型p53基因对胰腺癌细胞的抑制作用

目的：观察人类野生型p53（wtp53）基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法：用逆转录病毒为载体将外源性wtp53基因导入人胰腺癌细胞系PC－2，通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用，结果：p53在转染细胞PC－2／p53中表达水平提高，外源性wtp53基因的导入和表达能使PC－2细胞的生长速率减低，软琼脂集落形成能力下降，G0＋G1期细胞比例增加，凋亡指数升高，裸鼠体内成瘤能力明显下降，结论：逆转录病毒载体介导的外源性野生型P53能抑制人胰腺癌细胞生长。     

IL-2基因修饰对巨噬细胞杀瘤活性的影响

目的;观察ＩＬ－２基因修饰对小鼠腹腔巨噬细胞免疫效应功能的影响。方法：通过重组腺病毒介导,在体外将ＩＬ－２基因转染至小鼠腹腔巨噬细胞,检测ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞ＴＮＦ,ＩＬ－１和ＮＯ分泌水平及其杀伤活性。结果：ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞ＴＮＦ,ＩＬ－１和ＮＯ分泌水平显著提高,对巨噬细胞敏感株Ｌ１２１０细胞以及Ｒｅｎｃａ细胞的杀伤活性增强。结论：ＩＬ－２基因居噬细胞的细胞毒效应。本研究为ＩＬ－２     

Effects of Exogenous p16^ink4a Gene on Biological Behaviors of Human Lung Cancer Cells

The effects of exogenous p16ink4a gene on biological behaviors of human lung cancer cell line with homozygous deletion of p16ink4a gene were investigated. Exogenous p16ink4a gene was transfected by lipofectin into human lung cell line A549, in which p16ink4a gene was homozygously deleted. The expression of p16ink4a mRNA and protein was detected by RT-PCR and immunocyto-chemistry, respectively. The changes in the behaviors of the transfected cell lines in vitro and in vivo were observed. In the transfected cell line A549, the exogenous p16ink4a gene could be stably ex-pressed. The growth of A549 cells transfected with p16ink4a gene was obviously slowed down. Flow cytometry revealed that transfection of the exogenous p16ink4a gene resulted in A549 cell lines arrest in G1 phase of cell cycle. The tumorigenicity of these transfected cells in nude mice could be inhib-ited, and the tumor growth of nude mice was significantly suppressed. It was concluded that exoge-nous p16ink4a gene may be stably expressed in human lung cancer cell line A549. The expression of the introduced p16ink4a could block lung cancer cells to entry into S phase of cell cycle and inhibit tumor malignant growth both in vitro and in vivo.     

反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响

目的观察反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响.方法克隆人VEGF基因,将VEGF-cDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA3,构建反义VEGF表达载体pcDNA3-VEGF(-);利用阳离子脂质体载体,稳定转染人喉癌Hep-2细胞,并通过流式细胞仪检测,观察转染细胞细胞周期的改变,在透射电镜下观察转染细胞超微结构的改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况.结果成功克隆了人VEGF基因,并构建了携带反义VEGF基因的真核表达载体pcDNA3-VEGF(-);将其稳定转染人喉癌Hep-2细胞,获得了稳定表达反义VEGF的细胞系,与正常Hep-2细胞相比,该细胞系细胞周期及超微结构均无明显改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,与对照组相比,肿瘤的生长速度明显减缓.结论反义VEGF基因转染可以有效地抑制喉癌的生长.     

Preliminary Study on the Cooperation of IL-6 and mB7-1 in the Induction of Effective Antitumor Immunity In Vitro

Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅｒｏｌｅｏｆＢ７ｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｎｇａｎｄｉｎａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｈａｓｂｅｃｏｍｅｏｎｅｏｆｔｈｅｈｏｔｓｐｏｔｓ．Ａｔｔｈｅ...     

反义IGF-1RNA基因治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 构建反义胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达质粒（pcEP4-IGF-1A）治疗大鼠C6脑胶质瘤。方法 RT-PCR扩增300bpIGF-1 cDNA，测序，构建反义IGF-1表达质粒，体外转染C6细胞，观察其体外增殖速率及对C6胶质瘤的治疗作用。结果 反义IGF-1序列正确，反义IGF-1A转染的C6细胞生长明显受抑，体内成瘤性消失，荷瘤鼠肿瘤全部消失，6个月观察期内肿瘤无复发。结论 反义IGF-1表达质粒能抑制C6细胞体外生长，体内杀伤肿瘤效果明显。