《仁斋直指方论》“五藏所主”学术思想研究

南宋·杨士瀛《仁斋直指方论》以内科杂病、外科、妇科证治为纲,广撷诸家名方及家传良方,识证施方清晰独到,善于灵活化裁经典名方,是一部颇具影响的临床参考书。书中提出"五藏各有所主,至其病证莫不随所主而见焉",强调五脏所主与天地自然之气相应,外之六气相乘、内之七情相感皆为五脏之邪。五脏所主内涵丰富,内藏神志,上应官窍,外应肢体。五脏病证以五脏所主、虚实、阴阳为纲辨治,脏病属阴,腑病属阳,贼风客邪阳受之,饮食居室阴受之,复杂病证以病证表现、脉象特点细加辨别。诊察五脏之脉、五脏之色,可判明脏气郁畅、四时平贼、形气逆顺,诊察脉形、脉位以辨别病所、病性,亦需圆机活法,诊视相参;证治尤重五脏所主、五脏相关,依脏气虚实而补泻,依六气标本而调治,依火、湿、热、痰而祛邪,依脏腑相关而主次论治。     

裸露DNA疫苗pCDSj32的构建、鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达

应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。免疫荧光定位显示，表达产物不但存在于细胞浆，而且可结合于胞膜并被分泌至胞外。     

β极低密度脂蛋白经细胞外信号调节激酶信号途径诱导其受体表达上调

为探讨β极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调的信号转导途径及其对巨噬细胞胞内脂质堆积的影响，采用Westem Blot方法检测β极低密度脂蛋白温育后巨噬细胞内的细胞外信号调节激酶活性，在体外培养的巨噬细胞中加入不同信号途径关键激酶的抑制剂，观察各信号途径对受体调控的阻断效应，测定胞内胆固醇和甘油三酯的含量，观察泡沫细胞的形成。结果发现，β极低密度脂蛋白以蛋白激酶C依赖的方式激活巨噬细胞中的细胞外信号调节激酶1／2活性。细胞外信号调节激酶1／2抑制剂和蛋白激酶C抑制剂可显著阻断β极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞极低密度脂蛋白受体转录的效应，而P38抑制剂和蛋白激酶C激动剂对G极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调无明显影响。细胞外信号调节激酶1／2抑制剂可抑制β极低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞内胆固醇和甘油三酯含量升高。上述结果表明，蛋白激酶C依赖的细胞外信号调节激酶1／2信号级联可能是介导8极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调的主要信号转导途径，特异地抑制此信号途径可抑制β极低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞胞内脂质堆积。     

制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化豚鼠内耳抗原

粗制内耳抗原 (ｃｒｕｄｅｉｎｎｅｒｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＣＩＥＡｇ)广泛用于自身免疫性内耳病 (ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｉｎｎｅｒｅａｒｄｉｓｅａｓｅ ,ＡＩＥＤ)的研究 ,包括建立动物模型和作为抗原检测ＡＩＥＤ患者血清自身抗体[1,2 ] 。但ＣＩＥＡｇ成分复杂 ,其中何种亚组份起关键作用尚不清楚。我们通过制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅｐｏｌｙａｃｒｙ ｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,简称制备性ＰＡＧＥ)分离纯化豚鼠ＣＩＥＡｇ的主要亚组份 ,为深入研究ＡＩＥＤ的发病机制和寻找内耳特异…     

人心肌肌钙蛋白I第2和第4个密码子同义突变对其在大肠埃希菌中表达的影响

目的 对人心肌肌钙蛋白I（cTnI）基因实行定点突变并进行原核表达，观察此突变对cTnI表达量的影响。方法 利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段，设计引物将其第2和第4个密码子突变后插入原核表达载体形成重组体，并导人宿主菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导表达，Ni-NTA树脂纯化后行Western blot鉴定，观察突变对cTnI表达的影响。结果 突变后的cTnI基因与对照组相比在大肠埃希菌中得到高效表达，经纯化可获得电泳单点纯的cTnI蛋白。结论 成功克隆了cTnI基因，所设计的同义突变可促进cTnI在大肠埃希菌中的高效表达。     

人CD80基因的重组真核表达载体的构建及其在体内外的表达

构建了人ＣＤ８０ｃＤＮＡ重组真核表达载体ＰＣＤ－ＣＤ８０，并将这一重组表达载体用脂质体介导的基因转移技术转染至体外培养的小鼠黑素瘤Ｂ１６细胞系，并经直接注射浆裸露ＤＮＡ导入小鼠肌肉组织。     

VLDL-R中配体结合重复序列的结合特性及结构分析

目的 研究VLDL-R中8个配体结合重复序列(1igand-bindingrepeats，LBR)在配体结合中的作用并探讨结合位点的结构。方法采用基因缺失诱变方法，构建不同LBR缺失的VLDL-R重组体。将其分别导人无LDL-R功能性表达的1dl-A7细胞。配体结合实验观察转染细胞与荧光标记的VLDL、β-VLDL的结合能力，并采用同源建模的方法预测受体N-端328个氨基酸的配体结合域的空间结构。结果 配体结合实验显示LBR1和LBR2对受体结合VLDL、pVLDL最为重要；LBR3对结合VLDL也有重要作用，但对结合pVLDL无明显影响。模型显示受体N-端328个氨基酸的配体结合域呈现弧形口袋样结构，前3个LBR结构紧凑，呈棒状，负电荷相对集中，与功能特性吻合，LBR5与LBR6之间的连接区赋予口袋结构一定的伸缩性，适应配体大小的变化。结论 受体N-端的前3个LBR含有与配体结合的位点。该区域特定的空间结构与理化特性是结合功能的重要基础。     

剥苔基因分子机理的研究

目的:从舌上皮细胞凋亡及凋亡相关基因bax、TGF-β3表达的角度研究剥苔(舌黏膜剥脱)的基因分子的病理生理机制.方法:运用TUNEL技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术,进行定性和定量分析.结果:与正常薄苔比较,剥苔细胞凋亡增加,同时凋亡相关基因bax表达水平升高,而TGF-β3表达水平降低.结论:促凋基因bax表达上调可能是引起舌苔上皮细胞凋亡增加从而导致舌黏膜剥脱的重要病理机制.     

一种血管内皮生长因子变异体的结构与功能的初步探讨

目的针对发现的一种血管内皮生长因子变异基因(h′VEGF),利用计算机软件模拟预测其空间结构,并对其功能进行初步探讨。方法将pCD-hVEGF165及pCD-h′VEGF165重组真核表达载体导入CHO细胞,收集培养上清,进行ELISA分析、血管通透性实验(Miles实验)、内皮细胞增殖实验(MTT法)。结果h′VEGF165能使豚鼠的血管通透性增高,并促进ECV-304细胞增殖,但ELISA实验结果显示h′VEGF165与抗hVEGF165单抗未发生抗原抗体反应。结论h′VEGF165与hVEGF165在空间结构上可能存在差异,但现有的实验结果未见两者在功能上的明显差异。     

Experimental study on the antitumor effect of mouse B7-1 gene

ＴｗｏｓｉｇｎａｌｔｈｅｏｒｙｆｏｒＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｔｕｍｏｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ［１－２］．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓｆｅｃｔ...