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TwosignaltheoryforTcelactivationprovidedanewapproachfortumorgenetherapy[1-2].Expressionofcostimulatorymoleculegeneintransfect... 相似文献
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目的探讨重组腺病毒转导的骨髓间充质细胞(MSC)导向的睫状神经营养因子(CNTF)基因靶向性治疗C57小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE),对动物病情和和炎症的影响。方法用成功构建的Ad-CNTF-IRES-GFP载体,体外观察Ad-CNTF-IRES-GFP转染MSC(MSC-CNTF)对MSC表达CNTF的影响,再用MOG35-55建立C57BL/6小鼠的EAE模型,将MSC-CNTF移植治疗EAE小鼠,观察EAE动物病情评分;ELISA法观察外周血的促炎症因子TNF-α、IFN-γ,IL-12p35和抗炎症因子IL-10的水平,HE染色观察脑和脊髓炎症细胞浸润,用免疫荧光和免疫组化观察病变部位CD3(+)T细胞、炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ的表达水平。结果(1)MSC-CNTF在MOI等于100的情况下,分泌的CNTF较DIL染色的MSC(MSC-DIL)、或Ad-eGFP转染的MSC(MSC-GFP)增高20倍(P〈0.01)。(2)MSC-CNTF治疗的EAE小鼠病情显著减轻。不仅平均发病时间缩短,发病率下降,病情减轻,而且病情严重程度也明显减轻。(2)MSC-CNTF治疗明显减低EAE小鼠外周血TNF-α和IFN-γ水平,明显升高外周血IL-10水平。(3)MSC-CNTF治疗EAE小鼠可明显降低病变部位的炎症细胞数量和炎性细胞因子TNF-α水平,而对IFN-γ表达几乎影响不大。结论MSC-CNTF移植治疗的EAE动物病情明显减轻,其机制是:减低外周血TNF-α和IFN-γ水平,降低病变部位CD3(+)细胞数量和炎性细胞因子TNF-α水平。 相似文献
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目的构建大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)的真核表达载体,为进一步研究葡萄糖转运体3对缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定基础。方法以逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从大鼠脑组织中获取GLUT3全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Glut3,随后用Lipofectamine^TM2000介导转染HEK293细胞,以RT-PCR的方法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫组织化学的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果克隆的大鼠GLUT3全长cDNA大小约1.5kb且无碱基突变,以构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Glut3转染293细胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体3的表达。结论成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体3的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Glut3,且证实其可在293细胞中成功表达目的基因。 相似文献
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目的探讨E1B55KDa缺陷腺病毒dl1520体外对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法dl1520感染不同鼻咽癌株后测定病毒增殖;观察细胞病变效应;MTT法测定细胞生长抑制作用。结果dl1520在鼻咽癌细胞中可复制增殖并有致细胞病变效应,MTT法测定感染复数为0.032、0.16、0.8、4、20、100时CNE2细胞生长抑制率分别为2.78%、7.41%、10.19%、24.07%、45.37%、67.59%。结论dl1520体外可在鼻咽癌细胞中复制并裂解杀伤肿瘤细胞。 相似文献
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重组人内皮抑素腺病毒抑制肝癌裸鼠移植瘤生长 总被引:6,自引:2,他引:4
目的 观察重组人内皮抑素腺病毒(Ad/hEndo)对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法 人脐静脉内皮细胞ECV-304经Ad/hEndo感染后,western印迹检测人内皮抑素的表达。人肝癌BEL-7402细胞移植到裸鼠背脊部后,检测Ad/hEndo对肝癌移植瘤生长的抑制作用。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织中内皮抑素mRNA的表达。分析人内皮抑素在裸鼠体内的表达分布。结果 Western印迹检测到人内皮抑素基因在ECV-304细胞内高效表达。Ad/hEndo明显抑制人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤生长(F=4.061,P<0.05)。Ad/hEndo组血管密度计数为6.88±1.08,DMEM组为13.60±1.71(t=9.216,P<0.01)。瘤内注射Ad/hEndo后3d,RT-PCR在肿瘤组织检测到内皮抑素mRNA的表达,7d后表达不明显。人内皮抑素蛋白主要分布在肿瘤组织。结论 腺病毒介导的人内皮抑素基因在体内、体外获得高效表达,并明显抑制肝癌裸鼠移植瘤的生长与血管生成。 相似文献
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【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet/GFP-RV中切获约1.7kb的小鼠T-betcDNA片段,与穿梭质粒pShuttle连接,再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接,构建重组载体pAdeno-T-bet,测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变,并转染HEK293细胞,出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定。【结果】PCR及酶切证实:T-betcDNA正确克隆到穿梭质粒pShuttle中,带T-betcDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区,并在HEK293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒pAdeno-T-bet。【结论】本实验成功构建了小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒。 相似文献
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[目的]构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒。[方法]用平端连接方法将pUH-3质粒中822bp的pALBeAFP片段(含有416bp的白蛋白启动子pALB和406bp的甲胎蛋白增强子eAFP)代替pCEA-CD/TK质粒的CEA启动子,用PCR法鉴定插人方向,构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒pALBeAFP-CD/TK。将pALBeAFP-CD/TK转染HepG2等4种肝癌细胞,MTT法测定前药GCV、5-FC对HepG2细胞的杀伤作用。[结果]获得pALBeAFP-CD/TK克隆,RT-PCR证实HepG2细胞转染pALBeAFP-CD/TK后可表达自杀基因.pALBeAFP-CD/TK转染可使前药GCV、5-FC特异性地杀伤HepG2细胞。[结论]肝癌特异性HSV-TK/CD基因表达质粒构建成功。 相似文献
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人神经营养素-3基因重组腺病毒载体的构建、表达和生物活性检测 总被引:4,自引:0,他引:4
目的构建具有生物活性的人神经营养素-3(NT-3)基因重组腺病毒表达载体.方法从人脑组织mRNA中扩增NT-3基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的质粒.再与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-NT-3).用pAd-NT-3转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-NT-3). 结果NT-3基因RT-PCR扩增产物约801 bp.Adeno-NT-3 PCR鉴定为正确重组子.RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA及Western blot检测显示,Adeno-NT-3能在其转染的293细胞表达和分泌NT-3.这种NT-3能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞. 结论应用体外连接法成功构建了人NT-3基因重组腺病毒表达载体,其表达产物具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞的活性作用. 相似文献