赖型钩体pCX7探针Southern杂交分析不同血清群型钩体DNA

用赖型０１７株钩体ＤＮＡ基因库中筛选出的重组克隆ｐＣＸ７制备重组质粒，再以￣（３２）Ｐ标记为探针，对１１个血清群的１８株问号钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡＳｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交。放射自显影结果显示：双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡ未获杂交阳性区带；ｊａｖａｎｉｃａ（爪哇）、ｍａｎｈａｏ２（曼耗２）和ｒａｎａｒｕｍ（蛙）三个低毒力血清型的问号状钩体ＤＮＡ亦为阴性；１５株问号状钩体ＤＮＡ均出现了杂交信号，而且不同群型钩体ＤＮＡ杂交带型明显不同，赖型钩体０１７株（强毒株）与６０１株（弱毒株）杂交带型也有细微差别。作者认为，以ｐＣＸ７探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交可望作为钩体分类和鉴定的工具或参考。     

问号钩体(狭义)种特异探针重组质粒pCX7插入片段核苷酸序列分析

为了建立敏感和特异的鉴别致病性钩体菌株的方法，用ＡＢＩ自动测序仪对问号钩体（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓｓｅｎｓｕｓｔｒｉｃｔｏ）种特异探针ＤＮＡ重组质粒ｐＣＸ７，１．７ｋｂＰｓｔⅠ部分插入片段进行了核苷酸序列测定。结果：该部分插入片段ｂｐ总数为１～５０１ｂｐ，其中可读框（ＯＲＦ）１个，序列为８７～３９３，共３０６ｂｐ。ＯＲＦ除去一些核苷酸不能确定外（图中以Ｎ表示），绝大多数在一个ＯＲＦ。计算机检索有关同源序列１８个，较高序列类似性５个，均在４１％以下。经查ＥＭＢＬＤＮＡ序列数据库未见类似序列。由此提示，以ｐＣＸ７作为探针可用于钩体菌株鉴定。     

以λgt11作载体构建赖型钩体基因文库及其重组质粒pDL121的克隆和在E.coli表达的研究

为探讨赖型钩体抗原基因特点及其表达产物作为疫苗的可行性，采用问号赖型０１７株钩体经ＨｈａⅠ和ＡｌｕⅠ限制性内切核酸酶部分消化，行ＥｃｏＲⅠ限制酶切位点甲基化，加上ＥｃｏＲⅠ接头与去磷酸化的λｇｔ１１ＤＮＡ－ＥｃｏＲⅠ臂连接，体外包装后转染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０，建成含２．１×１０６重组子的问号赖型０１７株钩体基因文库。用抗赖型钩体兔血清从上述基因文库中筛选出一个强阳性克隆，λＤＬ１２，亚克隆入ｐＵＣ１８质粒，获重组质粒，ｐＤＬ１２１。ＥｃｏＲⅠ酶切证实该重组质粒含有１ｋｂ的外源插入片段。ｐＤＬ１２１经ＩＰＴＧ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现２３ｋｄ特异条带。免疫印迹表明该蛋白带可被抗赖型钩体兔血清识别。     

保护性MbE_4B_7G_5对问号状钩体疏水外膜蛋白OmpL_(39)的免疫印迹分析

选用具有高效价、特异性的黄疸出血群保护性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）Ｅ４Ｂ７Ｇ５，用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ，对ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４（ＴＸ－１１４）抽提的６株问号状钩体（０１７、６０１、６０３、６０９、６２０、２４５株）的疏水外膜蛋白进行分析鉴定。结果表明，提纯的０１７、６０１、６０３、６０９株问号状钩体３９ｋｄ疏水外膜蛋白（ＯＭＰ）有明显的免疫反应，而６２０、２４５株此带区无明显的免疫识别。这一结果提示：用ＭｂＥ４Ｂ７Ｇ５筛选问号状钩体保护性抗原，分离、纯化３９ｋｄ的疏水外膜蛋白（ＯｍｐＬ３９）在构建钩体基因工程疫苗中有重要的研究价值。     

问号钩体（狭义）种特异探针重组质粒pCX7插入片段核苷酸序 …

为了建立敏感特异的鉴别致病性钩体菌侏的方法，用ＡＢＩ自动测序仪对问号钩体（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓｓｅｎｓｕｓｔｒｉｃｔｏ）种异探针ＤＮＡ重组质粒ＰＣＸ７，１．７ｋｂＰｓｔＩ部分插入片段进行了核苷酸序列测定。结果：该部分插入片段ｂｐ总数为１－５０１ｂｐ，其中可读框１个，序列为８７－３９３，共３０６ｂｐ。     

大肠杆菌耐药质粒的头孢哌酮抗性基因克隆和定位

用鸟枪法从耐药质粒ｐＦＣ上克隆到头孢哌酮抗性基因。快速小规模制备质粒ＤＮＡ进行限制性酶切分析鉴定含重组质粒的克隆株，经多次传代，克隆株抗性表达稳定。多种限制性内切酶谱分析并构建重组质粒的物理图谱与质粒ｐＦＣ物理图谱比较，定位出头孢哌酮抗性基因在ｐＦＣ物理图谱上３２ｋｂ至４８ｋｂ区间内，其分子量约１６ｋｂ。该基因包含有ＥｃｏＲⅠ、ＳｍａⅠ、及ＰｖｕⅡ位点。     

构建人CD23及其反义RNA的逆转录病毒表达重组体

利用ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因克隆ｐＵＣＤ９７６，分别以限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ酶切该重组质粒ＤＮＡ，回收１．０ｋｂ的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因、ＨｉｎｄⅢ酶切后回收３’端６０７ｂｐ的结合区段基因以及ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅡ酶切回收５’端４０３ｂｐ的调控区段基因。将各回收片段先以Ｋｌｅｎｏｗ酶补平后，插入已补平的ｐＺＩＰ逆转录病毒载体ＢａｍＨⅠ单切点，利用地高辛素标记的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因探针，以斑点核酸杂交筛选逆转录病毒重组体，结合用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和／或ＢｇｌⅡ酶切鉴定插入方向，最终获得正、反向插入的ＣＤ２３全基因－逆转录病毒重组体各２个，反向插入３’端和５’端部分基因片段的重组体分别为４个和１个。为进行ＣＤ２３反义ＲＮＡ的研究和真核表达ＣＤ２３提供了可靠的物质基础。     

分泌型磷脂酶A2 cDNA与载体pRc／CMV定向克隆及表达

为了构建分泌型磷脂酶Ａ２（ｓｅｃｒｅｔａｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２,ｓＰＬＡ２）ｃＤＮＡ的有效表达系统,该文从无效表达的重组体ｓＰＬ０Ａ２－ｐＧＥＭ７中制备ｓＰＬＡ２片段,将其插入中间载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＢＳＳＫＲ的ＥｃｏＲ１位点,利用ｓＰＬＡ２－ＢＳＳＫ重组体转化ＤＨ１感染态细胞,筛选ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｓＰＬＡ２－ＢＳＳＫ重组体,应用Ｘｂａｌ、Ｈｉｎｇｄ３双酶消化该重组体并回收     

保护性Mb E4B7G5对问号状钩体疏水外膜蛋白OmPL39的免疫…

选用具有高效价、特异性的黄疸出血群保护性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）Ｅ４Ｂ７Ｇ５，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，对Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１４４（ＴＸ－１４４）抽提的６株问号状钩体（０１７、６０１、６０３、６０９株）的疏水外膜蛋白进行分析鉴定。结果表明，提纯的０１７、６０１、６０３、６０９株问号状钩体３９ｋｇ疏水外膜蛋白（ＯＭＰ）有明显的免疫反应，而６２０、２４５株此带区无明显的免疫识别。这一结果提示：用     

人肥胖基因在pBV221中的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：在大肠杆菌中高效表达人ｌｅｐｔｉｎ。方法：根据中国人肥胖基因（ｏｂｅｓｅｇｅｎｅ，ＯＢ）ｃＤＮＡ序列和高效表达质粒ｐＢＶ２２１的多克隆位点，设计ＰＣＲ引物，以含有人ＯＢ的重组质粒ｐＵＣ１９ＯＢ为模板，体外扩增人ＯＢ编码ｌｅｐｔｉｎ的片段（ＯＢ１），并经内切酶消化鉴定。将带有一对限制性内切酶位点的ＯＢ１和ｐＢＶ２２１分别进行双酶切，然后把ＯＢ１定向克隆于ｐＢＶ２２１中。结果：成功地构建了重组质粒ｐＢＶ２２１ＯＢ１，实现了人ｌｅｐｔｉｎ在大肠杆菌中的表达。结论：采用定向克隆技术，将ＯＢ１插入表达质粒ｐＢＶ２２１，连接效率高，且重组质粒中ＯＢ１均为正向插入，确保了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达。     

理化因素对人发DNA及其PCR扩增结果的影响

研究了部分理化因素对人发ＤＮＡ及ＰＣＲ性别鉴定结果的影响，人发经不同ｐＨ液处理，ＤＮＡ量均下降。其ＤＮＡ量经ｐＨ１、３、５、７处理２小时减半，ｐＨ１、３处理２４小时检不出，ｐＨ５和７处理２４小时减少和变化不明显，ｐＨ９处理２小时明显减少，处理２４小时检不出。人发经紫外线照射２４小时，ＤＮＡ量不变。人发用７５％乙醇和甲醇浸泡２４小时，ＤＮＡ量均无明显变化。人发经１０％酸性和中性福尔马林浸泡２和２４小时，未检出ＤＮＡ。在１００℃水中煮５和１０分钟，ＤＮＡ量明显下降，５０℃和１００℃直接加热２４小时，ＤＮＡ量不变和略下降。用ＰＣＲ法扩增，除经ｐＨ１１处理２４小时的检材未得到Ａｌｕ和Ｙ产物外，其余检材均获得扩增产物，说明微量ＤＮＡ经扩增后仍可测出扩增产物，供性别鉴定用。     

缺血性室颤和再灌注室颤发生率的比较研究

为探讨缺血性室颤和再灌注室颤的发生率究竟谁高谁低，作者在麻醉后的在体猪心上共进行了１２７次不同程度、不同时间的缺血及缺血后再灌注实验。结果共发生室颤１３次，室颤发生率为１０．２％，其中缺血性室颤１１次，占８５％，再灌注室颤２次，占１５％。此结果表明，在本实验条件下，室颤主要由缺血引起，再灌注室颤只占１５％。本实验中，２例缺血性室颤在未充分恢复再灌前，直流电除颤失败，而在恢复再灌后，所有室颤皆经直流电除颤恢复窦性心律，提示充分恢复再灌对电击除颤治疗可能是有益的。     

内毒素对冠状动脉循环的效应

本实验以猪为模型，探讨败血症性休克的主要毒素──内毒素对冠状动脉（冠脉）循环的影响。从静脉输注内毒素，浓度为４ｎｇ／ｍｌ按每分钟０．３ｎｇ／ｋｇ持续输入。该剂量内毒素未引起血压下降，也不损害冠脉的自动调节功能，冠脉流量保持恒定。但当冠脉灌注压降至４．６７ｋＰａ时，内毒素使冠脉流量增加（输注前和后分别为６２．５±２９．２和８９．５±３２．７ｍｌ／ｍｉｎ，Ｐ＜０．０５）。对内毒素增加冠脉流量的可能机理进行了初步探讨。     

人膀胱粘膜抗菌蛋白研究

作者以１％乙酸冲洗正常成年男性膀胱，获得其粘膜酸溶性提取物。ＡＵ－ＰＡＧＥ电泳分析表明，该酸溶性提取物有十余条主蛋白带，但未出现常见的内源性抗菌多肽溶菌酶及防御素条带。以敏感的溶菌酶定量法例得溶菌酶仅占酸溶性提取物蛋白质总量的０．２２％。采用琼脂糖弥散法杀菌试验发现该酸溶性提取物对致病性大肠杆菌ＭＬ－３５Ｐ耐药株具杀菌活性；进一步以电泳凝胶琼脂糖弥散法杀菌试验分析，结果显示该酸溶性提取物中有一条主蛋白带有较强的杀菌活性，称之为人膀胱抗菌蛋白（ＨＢＰ），它约占酸溶性提取物蛋白质总量的４％。本文结果提示，人膀胱粘膜存在有抗菌性蛋白，这可能是正常泌尿道抗细菌感染的分子基础。     

切应力作用下脐静脉内皮细胞的流变特性

用流室法研究人工培养脐静脉内皮细胞在切应力作用下的变形特性。对脐静脉内皮细胞分别施加０．６、３．８及７．５Ｐａ的切应力，作用１２小时。通过实时显微观测和计算机图象分析，结果证明切应力为３．８或７．５Ｐａ，作用１２小时后内皮细胞被拉长，长轴与流场方向一致；并且内皮细胞的拉长与定向程度、切应力大小及其作用时间的长短有关。     

血液流变学因素对缺血心肌冠脉流量的影响

选用长白猪８只于麻醉下开胸，于在体猪心上探讨心肌缺血时冠脉仍保留有部分扩张储备，而未被充分利用的机理。实验结果表明：降低左冠状动脉前降支（ＬＡＤ）内压至４．６７ｋＰａ时，由ＬＡＤ分别输入腺苷、山莨菪碱、生理盐水（２ｍｌ／ｍｉｎ），皆能诱发出明显的ＬＡＤ流量增加（Ｐ＜０．０５）。在维持ＬＡＤ内压不变，并持续分别输入上述三种溶液的同时，从ＬＡＤ远端取血测血液流变学指标，结果显示，输入生理盐水和山莨菪碱使红细胞压积降低，血浆粘度和全血粘度下降；心肌缺血时，冠脉内输注药物所诱发出的“冠脉扩张储备”部分是由于此种给药方式所引起的血液稀释及血液粘度下降的结果。它提示在冠脉狭窄时，血液粘度对狭窄远端的心肌血供可能是一个相当重要的因素，降低血液粘度可能并不亚于扩血管药物的作用。     

脑挫伤区及其远离部位脑组织中纤维蛋白的免疫组化观察

作者应用免疫组化ＰＡＰ法对诊断确切，死亡时间明确的１１例脑挫伤标本，包括挫伤局部及远离部位脑组织进行染色观察，结果发现：所有脑挫伤局部均有纤维蛋白形成；在挫伤远离部位、脑基底部、小脑、脑干等处的组织细胞和部分血管内及血管周围亦有纤维蛋白形成；在整个暴力传导通路上的脑组织细胞均有损伤。因此，作者认为脑挫伤应视为脑弥漫性损伤，不宜仅视为局部损伤。在脑组织细胞及血管内观察到纤维蛋白可作为脑挫伤的诊断指标之一。对单独存在的脑干损伤，用ＨＥ染色及纤维蛋白的免疫组化染色对比观察，可明显提高其诊断率。     

黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备和鉴定

以自己合成的黄曲霉毒素Ｂ＿１一人血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ＿１单克隆抗体（ＡＦＴＢ＿１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为ＩＢ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱发产生含特异性抗体的腹水。用间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ鉴定ＭｃＡｂ的反应特异性，使ＭｃＡｂ与固相黄曲霉毒素Ｂ＿１一牛血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＢＳＡ）结合产生５０％抑制所需的ＡＦＴＢ＿１、Ｂ＿２、Ｇ＿１、Ｇ＿２浓度依次为：１Ｂ５４．０、３６．９、２３．３、４０３．３ｎｇ／ｍｌ，２Ｆ１２．４、２．６、２．８、４。７ｎｇ／ｍｌ。     

烟酰胺粉末降解动力学研究

在相对湿度小于临界相对湿度的条件下，控制温度在５０～８０℃、相对湿度在５０～８０％范围内，烟酰胺在恒温恒湿下的降解速率方程为－ｄＣ／ｄｔ＝ｋ（Ｃ＿０－Ｃ）￣（－１），式中Ｃ＿０和Ｃ分别为烟酰胺的原始浓度和时间ｔ的浓度，ｋ为表观降解速率常数。ｋ与相对湿度ＲＨ的关系式为Ｉｎｋ＝ａ＋ｍ（ＲＨ），式中ａ和ｍ为常数。由Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ公式求得相对湿度为５０．３５％、６６．８５％、７５．３３％和８０．３５％时降解的表现活化能分别为２１９．９４、１８１．８６、１６８．９９和１５３．８９ｋＪ／ｍｏｌ。烟酰胺粉末在常温下的光解速率方程为－ｄＲ／ｄｔ＝ｋ￣＇（Ｒ＿０－Ｒ）￣（－１），式中Ｒ＿０和Ｒ分别为烟酰胺的原始反射率和时间ｔ的反射率，ｋ￣＇为表现光解速率常数。