应用PCR检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的：检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法：以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果：（１）３４份ＭＬ患者骨髓标本ＩＢＭ检出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ＜０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳性率５７．９％（１１／１９），其中８例Ｂ－ＮＨＬ（８／１４）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排；５例同时还检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，２例Ｔ－ＮＨＬ（２／３）检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，无克隆性ＩｇＨ基因重排；２例免疫分型不明确ＮＨＬ患老中１例（１／２）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，无克隆性ＴＣＲ，基因重排。２例霍奇金病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤骨髓ＩＢＭ均阴性。（３）Ⅲ，Ⅳ期ＮＨＬ患者ＩＢＭ检出率显著高于ＩＩ期（ｐ＜０．０１），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０１）。（４）ＩＢＭ阳性组ＮＨＬ２年死亡率５４．５％（６／１１），明显高于ＩＢＭ阴性（ｐ＜０．０５）。结论：ＰＣＲ方法检测ＩＢＭ有助于估     

PCR扩增IgH和TCR_β基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残留病中的应用

利用ＩｇＨ和ＴＣＲ＿β克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于移植后２个月时ＰＣＲ检测又重新出现阳性，但临床无复发现象。４例对照者ＰＣＲ均为阴性。结果表明ＰＣＲ技术具有简便、快速、敏感、特异性强等优点，在检测微小残留（ＭＲＤ）中具有广阔前景。     

用PCR技术对多发性骨髓瘤免疫球蛋白重链基因重排的研究

用ＰＣＲ技术检测了２１例多发性骨髓瘤（ＭＭ）病人外周血或骨髓涂片免疫球蛋白重链基因重排，发现１７例阳性，４例阴性，其中２例为轻链型。外周血免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排的检出率与骨髓涂片的结果基本一致，表明ＩｇＨ基因重排为诊断ＭＭ的最敏感方法之一，可弥补形态学、血清学诊断之不足。     

PCR扩增IgH和TCRβ基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残…

利用ＩｇＨ和ＴＣＲβ克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于     

急性非淋巴细胞白血病IgH,TCRr基因重排的检测

研究急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）基因分型和微小残留病（ＭＲＤ）的检测方法，选择ＩｇＨ、ＴＣＲｒ基因重排标记，用ＰＣＲ技术，对３１例ＡＮＬＬ患者进行检测，结果：ＩｇＮ阳性１２．９％，ＴＣＲｒ阳性６．４５％，表明ＡＮＬＬ中存在ＩｇＨ和ＴＣＲｒ基因重排，对ＭＲＤ的研究有一定的临床意义。     

NHL患者外周血淋巴细胞基因重排检测及意义

目的：探索非何杰金式淋巴瘤患者外周血淋巴细胞克隆性基因重排及其意义。方法：应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测９例ＮＨＬ患者外周血淋巴细胞ＩｇＨ－ＴＣＲβ克隆性基因重排。     

应用PC检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的；检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法；以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＴＲ．基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果；（１）３４份ＭＬ患垧骨髓标本ＩＢＭ出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ〈０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳     

非霍奇金淋巴瘤骨髓微小病灶的检测及其临床意义

应用分子生物学技术，研究非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓微小病灶（ＢＭＭＤ）的临床意义。方法通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和ＰＣＲ加限制性内切酶图谱分析（ＰＣＲ／ＲＥ）法，分别检测３５例ＮＨＬ病人骨髓标本的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体γ链（ＴＣＲγ）基因克隆性重排，从而发现其ＢＭＭＤ。结果ＢＭＭＤ总阳性率为６６％（２３／３５），ＩｇＨ阳性率为５１％（１８／３５），ＴＣＲγ为４９％（１７／３５），双项阳性率（ＩｇＨ和ＴＣＲγ同时阳性）为３４％（１２／３５），而骨髓涂片的骨髓浸润阳性率为２６％（９／３５）。本方法的骨髓浸润检出率明显高于骨髓涂片。实验发现，全组多数ＮＨＬ病人已有ＢＭＭＤ，而且Ⅰ、Ⅱ期病人也有５８％发生ＢＭＭＤ。ＢＭＭＤ与ＮＨＬ的恶性程度和全身症状相关，与临床分期、近期疗效、病死率和复发率的关系，虽无明确统计学意义，但有较明显的变化趋势。结论ＮＨＬ基本是一个全身性疾病；ＢＭＭＤ可能有助于预后判断。     

应用PCR检测石蜡包埋骨髓活检标本B淋巴细胞克隆性增生

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测慢性Ｂ细胞性白血病、多发性骨髓瘤及Ｂ细胞恶性淋巴瘤骨髓浸润的石蜡包埋骨髓活检标本克隆性免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排共１９例，其中１６例检测出ｌｇ基因单克隆性重排，总阳性率为８４％。非肿瘤大致正常骨髓标本和急性粒细胞白血病骨髓标本则出现多克隆性弥漫带或无扩增产物。以上结果表明：石蜡包埋骨髓活检标本来源的ＤＮＡ可用于ＰＣＲ检测单克隆性ＩｇＨ基因重排。     

半巢式PCR检测多发性骨髓瘤外周血肿瘤相关B细胞

半巢式ＰＣＲ检测多发性骨髓瘤外周血肿瘤相关Ｂ细胞［吕鸣等．解放军医学杂志，１９９７；２２（４）∶２４４］以克隆性免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排为骨髓瘤细胞基因标志，应用半巢式ＰＣＲ基因扩增技术检测多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血肿瘤相关Ｂ细胞。结果２...     

急性白血病复发时克隆演化的研究

为研究克隆演化在急性白血病复发发病机制中作用，应用聚合酶锭反应（ＰＣＲ）联合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测７５例及其中３６例复发急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）ＩｇＨ重排基因，ＰＣＲ检测８１便及其中３５例复发急性淋巴细胞病（ＡＬＬ）ＩｇＨ、ＴＣＲＶｘ２－Ｊｘ、ＴＣＲＶδ－Ｄδ３重排基因及ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ，配合形态学和免疫学检查发现８例ＡＬＬ（２２．９％）和４例（１１．１％）ＡＮＬＬ复发时形态学，免     

淋巴系肿瘤免疫球蛋白和T细胞受体重排基因的指纹图谱特征

目的 确定淋巴系统肿瘤的免疫球蛋白（Ｉｇ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排的特征。方法 用ＰＣＲ和单链构象多态性等分析１０８例各类淋巴系统肿瘤。结果：不同患各有特征性指纹图谱。５４％的生淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和４３％多发发现有髓瘤（ＭＭ）存在ＩｇＨ或ＴＣＲγ双等位基因重排，６例ＡＬＬ和３例ＭＭ存在寡克隆性。结论；指纹图谱可判断恶性克隆之间的基因差异和克隆性。     

克隆演化与中枢神经系统白血病复发的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４５份急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）脑脊液标本ＩｇＨ、ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ及ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３基因重排，从２２份标本（４８．９％）发现基因重排阳性，而用形态学方法检查，阳性率为２４．４％（１１／４５）；２２例阳性病人中的２例（９．１％）脑脊液白血病细胞基因重排类型同骨髓标本不一致，此两例均为中枢神经系统白血病（ＣＮＳＬ）复发。上述结果表明，应用ＰＣＲ技术检测ＡＬＬ脑脊液标本重排基因有助于隐匿ＣＮＳＬ诊断；克隆演化现象可能是某些单独ＣＮＳＬ复发的主要原因     

系列PCR方法检测淋巴细胞白血病克隆性基因重排的选择应用

以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ克隆性基因重排。结果显示：多重ＰＣＲ和１次ＰＣＲ的敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０￣（－５）～１０￣（－６）水平。ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排阳性率为６７．２％和６２．０％；半巢式ＰＣＲ检测ＩｇＨ重排阳性率为７０．７％。上述结果表明：多重ＰＣＲ可同时检测两对目的基因，适于初治病例检测，而对缓解病例的检测则需采用敏感度较高的半巢式ＰＣＲ方法。     

APC抑癌基因在髓系恶性疾病中的杂合性缺失

目的近年研究表明位于５ｑ２ｌ的ＡＰＣ抑癌基因涉及多种肿瘤的发生发展，而关于其与存在５ｑ频繁丢失的髓系恶性疾病的关系尚未见报道。此文分析７例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和３６例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中ＡＰＣ的等位基因缺失，并讨论其与髓系表型特异性、临床表现及预后的相关性。方法采用杂合性缺失（ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）试验（包括ＰＣＲ＋ＲＦＬＰ及ＰＣＲＳＳＣＰ技术），分析ＭＤＳ和ＡＮＬＬ中ＡＰＣ基因的缺失频率，并以正常人作对照。同时建立一个瘤细胞标本纯度参照体系以降低标本不纯对ＬＯＨ分析的影响。结果能提供缺失信息的包括９例正常人、２２例ＡＮＬＬ和４例ＭＤＳ。正常组未见１例发生ＬＯＨ（０／９），ＭＤＳ组１例ＲＡＥＢ阳性（１／４），而ＡＮＬＬ中ＬＯＨ阳性的有４例，其中３例为Ｍ２：（３／６），１例为Ｍ４ａ（１／１）。统计学证实Ｍ２ａ的阳性率与正常组差别有显著性（Ｐ＝０．０４４）。ＬＯＨ阳性的ＡＭＬ共同点有：（１）中老年人偏多；（２）外周血白细胞数较高，但浸润现象不明显；（３）对化疗较敏感。结论ＡＰＣ基因的异常可能是发生于髓系恶性疾病中粒系异常克隆的一个独立分子事件，代表着一部分具有特     

淋巴细胞性白血病／淋巴瘤bcl—2基因重排的研究

目的：探讨ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排的临床意义。方法：应用多聚酶链反应技术检测９种恶性淋巴瘤细胞系和不同类型淋巴系统恶性肿瘤临床标本中ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排情况。结果：２种细胞系,１例慢性淋巴细胞白血病及６例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）有ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排,其中,３６．４％滤泡型ＮＨＬ及１８．２％弥漫性ＮＨＬ有重排。ｂｃｌ－２基因断裂点绝大多数（８／９）位于主要断裂区（ＭＢＲ）。结论：ｂｃ     

多聚酶链反应检测淋巴细胞白血病微小残留分析

根据ＩｇＨ、ＴＣＲ克隆性基因重排原理，用半重叠ＰＣＲ和单轮ＰＣＲ技术分别同一份ＡＬＬ患儿的骨髓标本进行检测，并对两法的检出率进行了比较。结果：半重叠ＰＣＲ阳性检出率为８０％，单轮ＰＣＲ阳性检出率５２％，前者较后者提高了２８％，尤其对ＡＬＬ－ＭＲＤ组的检测，半重叠ＰＣＲ的阳性检出率有显著提高。     

急性淋巴细胞白血病微量残留病的PCR监测

①目的探讨急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）微量残留病（ＭＲＤ）检测的临床意义。②方法应用筑巢式多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）对３２例ＡＬＬ进行Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖδ２Ｄδ３基因重排检测。③结果１８例Ｂ系ＡＬＬ中有１５例（７２．２％）、４例Ｔ系ＡＬＬ中有１例（２５．０％）存在ＴＣＲＶδ２Ｄδ３基因重排。同时对１６例进行３９例次微量残留病动态监测，其中６例ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性病人随访５．１７～１６．１７年，无１例复发；１０例ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者，２例分别于阳性后０．２５，１．００年骨髓复发，１例有复发倾向，余７例随访４．３３～６．２５年无复发。④结论ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性者预后良好，可望长期生存，治疗时应以ＭＲＤ－ＰＣＲ转阴为停止化疗的可靠指标，对ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者应定期监测ＭＲＤ变化，结合病人情况进行综合评价。     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

多药耐药基因(MDR1)转染小鼠骨髓造血细胞表达及功能研究

目的：探索含人多药耐药基因（ＭＤＲ１）全长ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体转染小鼠骨髓造血细胞转染时间及转染效率的关系。方法：采用逆转录病毒上清法转染小鼠骨髓造血细胞，依据转染时间不同分为２日组及４日组，分别行ＰＣＲ法检测外源ＭＤＲ１基因；免疫组化法检测ＭＤＲ１基因表达，柔红霉素排出试验检测表达外源基因的功能。结果：ＰＣＲ方法证实转入的外源ＭＤＲ１基因可整合入小鼠骨髓造血细胞基因组中；免疫组化法检测转染率最高达３３％，转染４日组转染率大于转染２日组转染率（Ｐ＜０．０５）；柔红霉素排出试验证实转入外源基因表达产物可行使正常功能。结论：逆转录病毒上清法可有效转染外源ＭＤＲ１基因入骨髓造血细胞中；表达产物可行使正常生理功能；在转染４天时间内，转染率随转染时间延长而增高。