溶酶体膜蛋白Sidt2缺失导致肝脏细胞自噬受损

目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响。方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏（HL7702）细胞模型,对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测,同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62进行共定位,检测自噬小体对P62货物蛋白的识别与封存以及自噬溶酶体的降解。对LC3B及LAMP1进行免疫荧光共定位,检测自噬小体与溶酶体融合过程。使用LysoTracker对酸性溶酶体进行示踪。结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组 及Sidt2-/-组,HL7702细胞Sidt2-/-组较Sidt2+/+组相比,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ及P62表达均增多（P<0.01）,免疫荧光结果显示LC3B及P62亦明显增多（P<0.001）,同时自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12表达减少（P<0.05）。LC3B与P62共定位降低,LC3B 与LAMP1共定位降低,酸性溶酶体数量减少（P<0.05）。结论 Sidt2基因的缺失导致人肝脏细胞自噬小体对P62货物蛋白的识别和封存障碍,同时酸性溶酶体数量减少、自噬小体与溶酶体融合障碍导致自噬溶酶体途径受阻,最终导致LC3B与P62发生堆积,肝脏细胞自噬受损。     

自噬调节EMT过程在间质性肺病中的作用机制探讨

目的 研究不同阶段肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬变化,并通过增强自噬水平,观察自噬对间质性肺炎上皮细胞-间充质转化(EMT)的作用与调控机制。方法 将小鼠随机分为A空白对照组、B模型组、C自噬增强组各10只。B组及C组气道滴注BLM建立模型,C组腹腔注射mTOR-siRNA。各组分别于干预第7天及第14天随机处死3只小鼠,第28天处死剩下的4只小鼠。记录每只小鼠体重。各组取肺组织进行电镜检查,计数肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬体数量,测定不同时期的小鼠肺泡组织中的Smad3、Smad7表达。结果 模型7 d组自噬体有所增加,模型14 d、28 d组较空白对照14 d、28 d组无明显变化;自噬增强组各时间组可减轻小鼠肺泡炎及纤维化程度;第14、28 d比较:自噬增强组小鼠Smad3蛋白表达较肺间质纤维化模型组明显降低(P0.01),较空白对照组小鼠增高(P0.01);自噬增强组Smad7蛋白表达较肺间质纤维化模型组增加(P0.05),相比空白对照组低(P0.01)。自噬增强组的各阶段的肺泡炎和肺纤维化程度与模型组(B组)对比减轻(P0.05)(除肺纤维化7 d组比较外)。结论肺泡Ⅱ型上皮细胞的自噬变化对EMT具有重要调控作用,mTOR-siRNA可通过调节Smad信号通路参与EMT过程的发生,减少肺间质纤维化形成。     

IRE1α-JNK通路对早期非酒精性脂肪性肝病作用研究

目的 探讨IRE1α-JNK通路对早期非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠模型作用。方法 将20只C57/B6小鼠分为对照组、高脂饮食组、空白载体组、IRE1α-shRNA组;饮食干预前空白载体组,IRE1α-shRNA组分别腹部肝区注射空白慢病毒载体和IRE1α-shRNA慢病毒载体。对照组小鼠正常饮食,其余组小鼠高糖高脂饮食诱导NAFLD。HE染色观察肝内脂肪变性情况;透射电镜观察肝组织自噬相关结构;Western blot法检测IRE1α-JNK通路蛋白、凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax;自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1的表达。结果 与对照组比较,高脂饮食组IRE1α-JNK通路激活,与空白载体组比较,IRE1α-shRNA组IRE1α-JNK通路被抑制。油红O染色显示与空白载体组比较,IRE1α-shRNA组肝脏脂肪变性加重。电镜观察提示与对照组比较,高脂饮食组自噬相关结构增加,与空白载体组比较,IRE1α-shRNA组自噬相关结构减少。Western blot法检测提示与对照组比较, 模型组中肝组织Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达无明显变化,而Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ明显增加, P62明显降低 (P均<0.05),注射IRE1α-shRNA慢病毒载体后Bax、caspase-3、P62蛋白表达均增加,而Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ减少(P均<0.05)。结论 IRE1α-JNK通路通过调节自噬和凋亡对早期NAFLD起保护作用。     

自噬调控对小鼠精原细胞缺氧/复氧损伤的影响研究

目的 研究自噬调控对小鼠精原细胞缺氧/复氧损伤(H/RI)的影响,探讨自噬对小鼠睾丸组织缺血再灌注损伤(IRI)的影响。方法 以小鼠精原细胞系GC1 spg为研究对象构建H/RI模型,雷帕霉素(RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别作为自噬激动剂和抑制剂,设置对照组、模型组(H/RI)、自噬激动剂干预组(H/RI+自噬激动剂)、自噬抑制剂干预组(H/RI+自噬抑制剂)。用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞活性氧(ROS)释放水平和凋亡水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞自噬相关基因Beclin1和凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、p62和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的表达水平。结果 与对照组比较,模型组增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(P<0.01),p62和Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P<0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA相对表达水平明显上升(P<...     

右美托咪定对脂多糖致小鼠急性 肺损伤及肺泡巨噬细胞自噬的 影响

目的 探讨右美托咪定（Dex）对脂多糖（LPS）致小鼠急性肺损伤及肺泡巨噬细胞自噬的影响。 方法 将30只雄性 C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组（Con 组）、LPS 组、Dex+LPS 组,每组各10 只。LPS 组小鼠和Dex+LPS组小鼠腹腔注射 LPS 10 mg/kg,Con组小鼠腹腔注射等量0.9%氯化钠注射液;其中Dex+LPS组小鼠注射LPS前30 min,腹腔注射Dex 50 μg/kg,同时 Con 组和 LPS 组小鼠注射等量 0.9%氯化钠注射液。观察小鼠造模后 24 h 状态,行小鼠脓毒症评分（MSS）,ELISA 法检测血清 TNF-α和IL-6水平,HE染色法观察肺组织病理变化,Western blot法检测小鼠肺组织中微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅰ和Ⅱ蛋白表 达情况,计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。免疫荧光检测肺组织中LC3B、CD68表达情况,并计算LC3B与CD68共定位荧光面积/CD68荧 光面积。 结果 MSS评分提示LPS组和Dex+LPS组小鼠脓毒症造模成功。与Con组小鼠比较,LPS组小鼠的血清TNF-α和IL-6 水平、肺损伤评分、肺组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,LC3B与CD68共定位荧光面积/CD68荧光面积增加（均P＜0.01）;与LPS组小 鼠比较,Dex+LPS组小鼠的血清TNF-α和IL-6水平、肺损伤评分、肺组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,LC3B与CD68共定位荧光面 积/CD68荧光面积减少（均P＜0.05）。 结论 Dex能保护LPS致小鼠急性肺损伤,减轻炎症反应,下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ 比值,抑制LPS导致肺组织中肺泡巨噬细胞自噬的过度激活。     

TLR2/NF⁃κB通路介导MPP+诱导的RSC96细胞凋亡与自噬

目的：探讨1-甲基-4-苯基-吡啶离子（1-methyl-4-phenyl-pyridinium,MPP⁺ ）诱导的RSC96细胞凋亡与自噬功能障碍与TLR2/NF-κB信号通路的关系。方法：将RSC96细胞分为PBS组、MPP⁺ 组和MPP⁺ +CU-CPT22组;CCK-8检测不同MPP⁺ 浓度 （0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mmol/L）处理后细胞存活率;TUNEL检测细胞凋亡水平;RT-qPCR检测Toll样受体2（TLR2）mRNA转录水平;Western blot检测凋亡相关指标Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3,自噬相关指标LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62,以及TLR2、p-NF- κB/NF-κB蛋白表达水平。结果：与PBS组相比,MPP⁺ 组细胞存活率下降且呈浓度依赖性,TUNEL染色阳性细胞数增多,Bcl-2/ Bax蛋白比值水平下降,cleaved caspase-3/caspase-3比值增高。同时LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降,P62表达增加,p-NF-κB/NF-κB比值表达增加。RT-qPCR和Western blot结果显示,MPP⁺ 上调TLR2的表达。此外,与MPP⁺ 组相比,MPP⁺ +CU-CPT22组TUNEL阳性细胞数目减少,Bcl-2/Bax比值升高,cleaved caspase-3/caspase-3比值降低;同时,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升,P62水平下降。结论： MPP⁺ 刺激诱导RSC96细胞凋亡和自噬水平失衡,发生机制可能与TLR2/NF-κB通路的激活有关。     

“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞凋亡中的作用

目的：初步研究“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞OCCM-30凋亡中的作用。方法：体外培养小鼠成牙骨质细胞,随机分为对照组、低氧组、低氧+Sirt1激活剂白藜芦醇组、低氧+自噬抑制剂3-MA组、低氧+白藜芦醇+Sirt1抑制剂ex527组、低氧+白藜芦醇+3-MA组,MDC染色观察自噬溶酶体变化;LC3Ⅱ免疫荧光检测自噬体变化;透射电镜观察自噬体;Western blot检测Sirt1、LC3Ⅱ、p62等蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同组间结果数据采用单因素方差分析,组间采用LSD-t分析。结果：低氧组较对照组自噬溶酶体含量（P=0.000）及自噬体数量（P=0.000）明显增加,LC3Ⅱ蛋白表达明显增加（P=0.001）,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率增加（P=0.000）;低氧+白藜芦醇组较低氧组自噬溶酶体（P=0.019）及自噬体数量（P=0.000）、LC3Ⅱ蛋白表达（P=0.049）、Sirt1蛋白表达（P=0.000）明显增加,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率减少（P=0.021）;低氧+白藜芦醇+ex527组...     

外源性Apelin调节自噬对防治大鼠肺动脉高压形成的作用

  目的  从细胞自噬的角度,探讨外源性Apelin对肺动脉高压(PAH）的作用及相关机制。  方法  26只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=6）、模型组（n=10）和干预组（n=10）,模型组和干预组采用左肺切除术联合野百合碱注射法（PE+MCT）制备大鼠PAH模型,对照组仅打开胸腔+注射等量生理盐水。从术后第2周开始,干预组每日按大鼠体质量腹腔注射10 nmol/kg Apelin-13,连续3周,对照组与模型组均注射等量生理盐水。3组大鼠均于术后第5周测量平均肺动脉压力（mPAP）,计算右心室肥厚指数（RVHI）,行HE染色观察肺组织及肺血管形态结构,肺组织免疫荧光染色检测自噬相关蛋白LC3的表达,实时荧光定量（qRT）-PCR测量肺组织自噬相关蛋白P62、Beclin-1的mRNA表达量,Western blot测量肺组织LC3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62、Beclin-1的蛋白表达量,肺组织免疫荧光染色检测自噬相关蛋白LC3的定位及表达。  结果  与对照组相比,模型组mPAP、RVHI升高（P<0.05）,肺组织结构紊乱、肺血管壁增厚,肺组织LC3蛋白表达量升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高,Beclin-1的mRNA和蛋白表达量升高,P62的mRNA和蛋白表达量下降（P<0.05）;Apelin-13干预后,上述指标均得到改善（P<0.05,与模型组比较）。  结论  外源性Apelin对PAH的形成具有一定的防治作用,其作用机制可能与Apelin抑制自噬有关。     

前列腺素 E1减轻大鼠肺撞击伤后肺泡细胞凋亡?

目的：探讨前列腺素 E1(PGE1)对肺撞击伤后肺泡细胞凋亡的影响。方法雄性 SD大鼠分为正常对照组、伤后对照组和伤后 PGE1处理组。致伤后24 h 检测动脉氧分压、肺系数,TUNEL 染色检测肺泡细胞凋亡的整体情况。以蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测自噬相关蛋白及自噬调节蛋白 NIX 的表达情况。结果伤后24 h 肺组织可见明显结构破坏及肺水肿。与正常对照组相比,伤后对照组动脉氧分压降低(P <0.05),肺泡细胞凋亡指数增加(P <0.05),同时肺组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及自噬调节蛋白 NIX 表达增加(P <0.05)。伤后 PGE1处理组动脉氧分压低于正常对照组(P <0.05),但较伤后对照组显著改善(P <0.05);肺泡细胞凋亡指数高于正常对照组,但显著低于伤后对照组(P <0.05);肺组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及自噬调节蛋白 NIX 的表达虽然较正常对照组增加(P <0.05),但显著低于伤后对照组(P <0.05)。结论PGE1减轻大鼠肺撞击伤后肺泡细胞凋亡,此作用可能是通过抑制 NIX 介导的细胞自噬,以及肺泡细胞自噬性凋亡实现。     

自噬和凋亡在口腔黏膜下纤维性变上皮组织中的表达

目的 检测自噬标志物蛋白LC3、P62与凋亡蛋白caspase-3在口腔黏膜下纤维性变（oral submucous fibrosis,OSF上皮组织中的表达水平并探讨其意义。方法 收集2016—2019年于中南大学湘雅医院口腔科行组织病理活检的90例OSF患者的颊黏膜标本,分为OSF早期组、OSF中期组、OSF晚期组,同时收集30名无口腔黏膜疾病的健康者作为对照组。通过HE染色比较各组受试者的上皮细胞层厚度,采用免疫组织化学染色方法检测各组受试者颊黏膜组织上皮中LC3、P62与caspase-3的表达。结果 HE染色结果显示与对照组健康者比较,OSF患者的上皮细胞层厚度显著降低（P<0.05）;免疫组织化学染色结果显示OSF早期组、OSF中期组和OSF晚期组患者的上皮组织中LC3和caspase-3的蛋白表达水平呈递增趋势,P62呈递减趋势,差异有统计学意义（P<0.05）;LC3、P62和caspase-3蛋白表达与患者的张口度有关（P<0.05）;LC3与caspase-3的表达呈正相关（r=0.320,P<0.05）;P62和caspase-3的表达呈负...     

自噬对粒细胞样髓源性抑制细胞生存与功能的影响

目的: 初步探索自噬对Lewis肺癌移植瘤小鼠脾脏中粒细胞样髓源性抑制细胞（granulocytic myeloid derived suppressor cells,G-MDSCs）体外存活能力与抑制性功能分子的影响。方法: Lewis肺癌细胞系体外培养后,构建小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型,通过免疫磁珠分选方法获得脾脏G-MDSCs,与荧光抗体（Ly-6C-FITC/Ly-6G-PE/CD11b-PE/CY5）孵育后,流式细胞术检测G-MDSCs细胞纯度;瑞吉染色后观察其形态特征;采用雷帕霉素和氯喹处理后,通过蛋白质印迹法和流式细胞术检测自噬标志性分子微管相关蛋白1-轻链3 Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3 Ⅱ,LC3-Ⅱ）蛋白的表达水平。培养体系中加入雷帕霉素和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methy-ladenine,3-MA）,7-AAD染色检测自噬对G-MDSCs生存的影响;提取细胞总蛋白后检测胞内精氨酸酶的水平。结果： 通过磁珠分选的方法可从小鼠脾脏中获得纯度较高的G-MDSCs,其细胞核呈环状或分叶状。雷帕霉素处理G-MDSCs后LC3-Ⅱ表达水平上调,3-MA抑制自噬作用后,G-MDSCs存活率降低, 精氨酸酶活性下降。结论： 自噬能够促进G-MDSCs体外存活并上调抑制性效应分子精氨酸酶的表达,提示自噬是调控G-MDSCs生物学功能的重要因素。     

支气管肺发育不良新生鼠肺组织甲状腺转录因子及波形蛋白的表达意义

目的观察高氧暴露新生鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)标记[甲状腺转录因子,(TTF-1)]及成纤维细胞标记[波形蛋白,(Vimentin)]的表达规律,探讨支气管肺发育不良(BPD)发病机制。方法新生小鼠随机分为:对照组及BPD组,高浓度氧暴露制作BPD小鼠模型,观察肺组织病理变化,于实验后3、7、14、21 d应用免疫荧光双标及荧光定量PCR技术检测TTF-1及Vimentin蛋白、mRNA的表达情况。结果与对照组比较,BPD组高氧暴露后小鼠肺组织逐渐出现肺泡发育障碍、胶原沉积明显;AECⅡ标记TTF-1表达逐渐减弱,成纤维细胞标记Vimentin表达逐渐增强,14、21 d时两者可见明显的共表达;BPD组21 d TTF-1mRNA表达较同时间对照组下调(P<0.05),而Vimentin mRNA表达较同时间对照组上调(P<0.05)。结论高氧致AECⅡ向成纤维细胞转化可能是BPD纤维化的重要机制。     

麦门冬汤对间质性肺炎小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞自噬及肺水清除的作用机制研究

[目的]观察麦门冬汤对间质性肺炎小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞自噬及对肺水清除的影响,并探究其作用机制。[方法]将120只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级C57BL/6小鼠随机分为6组:正常组、模型组、强的松组及麦门冬汤高、中、低剂量组,每组20只。除正常组小鼠经鼻腔滴注0.9%氯化钠溶液之外,其余各组小鼠均通过鼻腔滴注博来霉素(bleomycin,BLM)建立间质性肺炎模型。造模后,麦门冬汤高、中、低剂量组小鼠分别灌胃给予17.16g·kg-1、8.58g·kg-1、4.29g·kg-1麦门冬汤,强的松组小鼠灌胃给予0.46g·kg-1强的松,正常组和模型组小鼠灌胃给予等量蒸馏水,均为1次/d,连续28d。实验结束分离小鼠肺组织,计算肺组织湿干重比(wet/dry weight ratio,W/D);以Evans Blue法计算肺泡液体清除率(alveolar fluid clearance,AFC);苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肺组织病理变化;Masson染色观察肺组织纤维化情况,羟脯氨酸测定胶原表达水平;免疫黏附法分离Ⅱ型肺泡上皮细胞,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、p62、自噬微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、磷酸化磷酯酰肌醇-3-激酶(phosphorylated-phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphophorylated-protein kinase B,p-AKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated-mammalian target of rapamycin,p-mTOR)表达水平。[结果]与正常组比较,模型组小鼠肺组织W/D值显著升高,AFC降低(P<0.05)。HE染色和Masson染色显示模型组小鼠肺组织正常结构基本消失,纤维化显著,肺组织羟脯氨酸含量显著升高,胶原蛋白显著增加,肺泡Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的表达均显著增高,LC3-Ⅱ表达降低(P<0.05)。与模型组比较,麦门冬汤各剂量组和强的松组小鼠肺组织W/D值均降低,AFC均升高,其中麦门冬汤高、中剂量组W/D值低于强的松组,AFC高于强的松组(P<0.05)。麦门冬汤高、中剂量组小鼠肺组织肺泡结构相对清晰,肺纤维化得到改善,胶原蛋白减少,但麦门冬汤低剂量组和强的松组小鼠肺组织仍存在明显纤维化情况,胶原蛋白沉积明显。与模型组比较,麦门冬汤各剂量组和强的松组小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达均降低,LC3-Ⅱ蛋白表达均增加(P<0.05),其中麦门冬汤高、中剂量组小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达低于强的松组,LC3-Ⅱ蛋白表达高于强的松组(P<0.05),而麦门冬汤低剂量组上述蛋白表达与强的松组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]麦门冬汤对小鼠间质性肺炎和肺水清除有改善作用,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,增强肺组织细胞自噬活性有关。     

RSV诱导哮喘小鼠树突细胞自噬机制及五虎汤的干预作用

目的 研究PI3K/Akt/mTOR信号通路对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱导哮喘小鼠树突细胞(den-dritic cells,DC)自噬的调控机制及五虎汤的干预作用.方法 用RSV滴鼻联合雾化鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)激发的方法制备哮喘小鼠模型,造模...     

异氟醚对Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨吸入麻醉药异氟醚对β淀粉样蛋白（Aβ）25-35诱导的大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法：将PC12细胞随机分为正常对照组（C组）、10   μmol•L-1Aβ25-35 处理组（Aβ组）、2%异氟醚处理组（Iso组）和2%异氟醚与10   μmol•L-1Aβ25-35联合处理组（Iso+Aβ组）。各组PC12细胞药物处理6 h后应用透射电镜观察自噬体,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62和自噬信号调控基因p-mTOR、Beclin-1表达;药物处理24 h后应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达。结果：与C组比较,Aβ组PC12细胞中可见大量的自噬体,LC3-Ⅱ、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,p62、p-mTOR和Bcl-2表达量降低（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;Iso组PCI2细胞未见自噬体,LC3-Ⅱ
表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;与Aβ组比较,Iso+Aβ组PC12细胞仅见少量自噬体,LC3-Ⅱ表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）,Bcl-2表达无明显变化（P>0.05）。结论：异氟醚能够抑制Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬的活化,促进凋亡蛋白的表达,其作用机制与激活自噬信号调控基因mTOR、抑制Beclin-1的表达有关。     

光气对小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用

目的 研究光气对肺水肿小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用。方法 将32只BALB/C小鼠随机分成正常对照组(16只)和染毒组(16只)2组。正常对照组小鼠以空气为对照,染毒组小鼠给予11.9mg/L剂量的光气,时间为5min。染毒后4h,取小鼠分离、培养肺Ⅱ型细胞用于电镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡,取小鼠肺脏进行DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL染色检测肺组织凋亡。结果 光气染毒肺水肿小鼠电镜下原代肺Ⅱ型细胞出现凋亡小体;流式细胞术显示肺Ⅱ型细胞凋亡率(40.26±7.74)显著高于正常对照组(1.58±1.01,P<0.001);DNA琼脂糖凝胶电泳出现"DNA梯状改变";TUNEL染色检测到肺上皮细胞和血管内皮细胞凋亡。结论 光气染毒可造成肺水肿小鼠肺脏细胞发生凋亡,提示光气造成小鼠肺水肿的发生机制存在细胞凋亡的诱导作用。     

硒对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制

目的: 探讨硒对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,阐明其对PI3K-Akt信号传导通路中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)及其下游靶基因编码的Bax和Bcl-2蛋白的作用机制。 方法: 60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组和硒干预组(n=20)。正常对照组小鼠连续3 d腹腔注射不含病毒的培养液200 μL;病毒对照组小鼠腹腔注射100半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)柯萨奇病毒B组病毒(CVB3)液200μL,连续3d;硒干预组小鼠在病毒对照组同样的处理后灌胃给予100 μg·kg^-1亚硒酸钠,每日1次,连续处理14d。接种CVB3的第15天处死小鼠,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,光镜下观察心肌病理变化,Western blotting法检测心肌细胞中Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。 结果: 与病毒对照组比较,硒干预组小鼠生存率明显升高(P<0.01)。硒干预组小鼠的心肌病理改变较病毒对照组减轻。硒干预组小鼠心肌细胞凋亡率低于病毒对照组(P<0.01)。与病毒对照组比较,硒干预组小鼠心肌细胞中p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平增加,Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低,Bax/Bcl-2蛋白比值下降(均P<0.01)。 结论: 硒对CVB3感染导致的VMC小鼠心肌细胞有保护作用,其作用机制与硒通过活化心肌细胞的PI3K-Akt信号通路、调控其下游Bcl-2和Bax蛋白表达和抑制心肌细胞凋亡有关。     

沙参麦冬汤对新生大鼠支气管肺发育不良的保护作用及其机制

目的：观察沙参麦冬汤作用下慢性支气管肺发育不良（BPD）新生大鼠肺的发育情况,阐明沙参麦冬汤对高体积分数氧（高氧）所致新生大鼠慢性BPD的影响及其作用机制。方法：200只新生大鼠分为对照组,模型组,地塞米松组,低和高剂量沙参麦冬汤组,每组40只。除对照组外,其余4组大鼠采用持续吸入高氧造模,沙参麦冬汤组和地塞米松组大鼠灌胃给予6.00和24.0mg·kg^-1沙参麦冬汤及0.75 μg·kg^-1地塞米松注射液,对照组大鼠给予等量生理盐水。给药21 d后检测各组大鼠肺组织湿质量/干质量（W/D）值,HE染色法观察各组大鼠肺组织病理形态表观,计算各组大鼠肺组织中辐射状肺泡计数（RAC）,检测各组大鼠肺组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,ELISA方法检测各组大鼠肺组织中细胞炎性因子白细胞间介素1（IL-1）、白细胞间介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2和caspase-3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组大鼠肺组织W/D值明显升高（t=3.144,P<0.05）,可见明显肺水肿;氧暴露21 d后肺泡腔扩大、结构简化,间隔增厚,RAC明显减少（t=3.989,P<0.05）,炎症细胞浸润,肺组织中MDA、SOD、GSH-Px、IL-1和TNF-α水平以及Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高（t=6.562,t=1.971,t=1.972,t=20.241,t=32.808,t=22.663,t=19.234,P<0.05）,IL-10水平明显降低（t=7.857,P<0.05）;与模型组比较,地塞米松组和不同剂量沙参麦冬汤组大鼠肺水肿程度改善,肺组织W/D值明显降低（t=1.018,t=2.691,t=0.760,P<0.05）,肺泡结构紊乱情况减轻,肺组织中MDA、SOD、GSH-Px、IL-1和TNF-α水平以及Bax和caspase-3蛋白表达水平降低（t=6.562,t=1.971,t=1.972,t=20.241,t=32.808,t=22.663,t=19.234,P<0.05）,IL-10水平和Bcl-2蛋白表达水平升高（t=7.857,t=7.743,P<0.05）,且以高剂量沙参麦冬汤组效果为佳。结论：沙参麦冬汤能有效保护由高氧造成的新生大鼠支气管和肺的损伤。     

和厚朴酚通过激活线粒体依赖的Sirt3/AMPK途径减轻脂多糖所致的急性呼吸窘迫综合征

目的：探讨和厚朴酚(honokiol，HKL)对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)所致的急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)肺微血管内皮细胞的作用及潜在机制。方法：动物实验中，40只C57BL/6J小鼠随 机分为对照组(Con组)、LPS干预组(LPS组)、LPS+HKL干预组(HKL组)、LPS+HKL+尼克酰胺(nicotinamide，NAM)干 预组(NAM组)，每组10只。细胞实验中，实验分为对照组(Con组)、LPS干预组(LPS组)、LPS+HKL干预组(HKL组)、 LPS+HKL+NAM干预组(NAM组)和LPS+HKL+混合抑制剂(compound C，CMC)干预组(CMC组)。采用HE染色观察肺 组织病理改变；检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中蛋白浓度、细胞总数、中性粒细胞数及 肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性；伊文思蓝实验检测肺微血管渗透性的改变；采用细胞计数试剂盒 (cell counting kit-8，CCK-8)检测HKL对人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells，HPMECs) 活 力的影响；采用抑制剂NAM和CMC干预探讨HKL保护性作用的分子机制；采用Western印迹检测组织或细胞Sirt3， caspase-3，cleaved caspase-3，Bcl-2，Bax，p-腺苷酸活化蛋白激酶(p-adenosine monophosphate activated protein kinase， p-AMPK)和AMPK蛋白表达。结果：动物实验中，与Con组比较，LPS组小鼠肺组织呈典型的ARDS病理改变，肺组 织湿干重比(W/D)值及MPO活性、BALF蛋白浓度、细胞总数和中性粒细胞数、伊文思蓝渗漏指数(evans blue leaking index，ELI)和肺组织cleaved caspase-3表达均显著升高(均P<0.05)，而Sirt3表达明显下调(P<0.05)；与LPS组比较，HKL 组的上述改变显著改善(均P<0.05)；与HKL组比较，NAM组中HKL干预的疗效可部分抑制(均P<0.05)。细胞实验 中，与LPS组比较，HKL组HPMECs的存活率升高(P<0.05)，Bcl-2和Sirt3蛋白表达显著上调(均P<0.05)， Bax和cleaved caspase-3蛋白表达下调(均P<0.05)，AMPK通路活化加强(P<0.05)；与HKL组比较，CMC组HKL干预的疗效被部分抑制 (均P<0.05)。结论：HKL能够显著减轻LPS所致的ARDS，抑制肺微血管内皮凋亡，其作用可能是通过线粒体依赖的 Sirt3/AMPK途径实现的。