应用PCR快速诊断小儿结核性脑膜炎的研究

作者报道特异性寡核苷酸引物引导聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测脑脊液中结核杆菌ＤＮＡ。所用引物来自于编码结核杆菌的６５ＫＤａ蛋白质抗原基因，产生特异的３８３ｂｐ片段。对１０倍连续稀释的人型结核杆菌ＤＮＡ进行ＰＣＲ，可检测出１ｐｇ结核杆菌ＤＮＡ，相当于１０～１００个细菌。应用ＰＣＲ检测４２例结脑脑脊液，阳性率为５７．１４％，直接涂片镜检和细胞培养阳性率分别为７．１４％和１４．２８％；４６例非结脑脑脊液中，３种检测结果均阴性。研究结果表明，ＰＣＲ检测脑脊液中结核杆菌ＤＮＡ有较高的敏感性和特异性，它快速、简便，有望成为一种临床常规检测结核杆菌方法。     

用聚合酶链反应快速检测血液中伤寒杆菌

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测伤寒患者血液标本中伤寒杆菌。根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ的核苷酸序列，合成２对寡核苷酸引物，以该基因的ＤＮＡ片段作为模板，经首次ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ扩增后。产物分别为４５８ｂｐ和３４３ｂｐ的寡核苷酸片段。首次ＰＣＲ检测的敏感度可达１０条伤寒杆菌ＤＮＡ水平。对１０例有伤寒临床表现、血培养有伤寒杆菌生长的患者的血液标本进行了ＰＣＲ检测，结果，首次ＰＣＲ检测９例呈阳性；嵌套式ＰＣＲ检测１０例均呈阳性。对其中３例伤寒患者的血清和白细胞分别作ＰＣＲ检测，结果均呈阳性。这些结果提示大部分伤寒患者的血清标本只需作首次ＰＣＲ检测即可呈阳性。由于作者对标本的预处理方法作了改进，于９ｈ后可获首次ＰＣＲ结果     

PCR检测结核分枝杆菌DNA中不同细菌裂解方法结果观察

目的：寻找适合于临床ＰＣＲ检测结核杆菌ＤＮＡ简单、快速、有效、经济的细菌裂解方法。方法：采用１１种细菌裂解剂对相同数量的结核分枝杆菌进行裂解，裂解上清液直接用于ＰＣＲ扩增，结果：１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００，１％ＮＰ４０，１％Ｔｅｗｅｅｎ２０、和１％ＯＰ四种裂解剂的裂解液可直接扩增出结核分枝杆菌ＤＮＡ；ＳＤＳ，ＮａＯＨ，十二烷基肌酸钠等裂解剂的裂解液直接用于ＰＣＲ扩增均为阴性。结论：１％的Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００，ＮＰ４０、Ｔｅｗｅｅｎ２０和乳化剂ＯＰ裂解细菌效果好，又不抑制ＰＣＲ反应，适合于作为临床ＰＣＲ检测结核杆菌的裂解剂。     

聚合酶链反应检测泌尿系结核患者尿中结核杆菌

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对３４例泌尿系结核病人的２４小时尿液标本进行结核杆菌染色体中３３６－ｂｐ重复序列ＤＮＡ片段的扩增检测，阳性率为９４．１％。ＰＣＲ检测２４小时尿样中结核杆菌比尿沉淀物涂片法找抗酸杆菌（阳性率５６％）及结核杆菌快速培养法Ｂａｃｔｅｃ培养结核杆菌（阳性率７０．６％）更敏感。我们还用ＰＣＲ、涂片法、Ｂａｃｔｅｃ培养法检测了１０例非泌尿系结核者中结核杆菌，阳性结果分别为０、０、３     

用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因１２３ｂＰ的片段进行扩增。该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到１０ｆｇＤＮＡ，对１４９份结核患者临床标本检测结果显示ＰＣＲ总阳性率（６９．１％）明显高于直接涂片荧光镜检（１５．４％）与细菌培养（１０．１％）的阳性率（Ｐ＜０．０１）。研究表明ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。     

PCR检测结核分枝杆菌DNA中不同细菌裂解方法结果 …

寻找适合于临床ＰＣＲ检测结核杆菌ＤＮＡ简单，快速，有效，经济的细菌裂解方法。方法采用１１种细菌裂解剂对相同数量的结核分枝杆菌进行裂解，裂解上清液直接用于ＰＣＲ扩增，结果１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００，１％ＮＰ４０，１％Ｔｅｗｅｅｎ２０、和１％ＯＰ四种裂解剂的裂解液可直接扩增出结核分枝杆菌ＤＮＡ；ＳＤＳ，ＮａＯＨ     

用聚合酶链反应快速检测痰液中结核杆菌

本研究以结核杆菌染色体中重复出现的长度为１２３个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段作为聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的模板，合成一对寡核苷酸引物。痰液标本先经三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），乙二胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡ－２Ｎａ）和三硝基甲苯（Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００）加热、震荡处理，裂解结核杆菌，再作ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝胶电泳。同时，与痰液直接涂片、抗酸染色镜检抗酸染色阳性杆菌作比较。用该ＰＣＲ检测的检出率为９１．４％（３２／３５），而涂片抗酸染色的检出率仅为３４．３％（１２／３５）。两者相比有非常显著性差异（ｘ２＝２４．４７６，Ｐ＜０．００１）。由于改进了ＰＣＲ前痰液标本的处理方法，使整个ＰＣＲ检测过程所需时间缩短至９ｈ。我们认为该ＰＣＲ检测结核杆菌是特异、敏感和快速的，可在临床实验室应用。     

纸层析杂交法检测结核杆菌PCR扩增产物

目的建立一种新的快速纸层析杂交技术，用于特异性检测带有生物素标记的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增产物。方法将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上，扩增产物置膜一端，经毛细作用，带有生物素标记的特异性ＤＮＡ分子固定于反应区，非特异性分子被洗脱，杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物（ＢＣＩＰＮＢＴ）显色后判断结果。结果这一技术允许在２５ｍｉｎ内将结核杆菌经ＰＣＲ扩增后的ＤＮＡ１０ｐｇ检出。结论纸层析杂交技术是一种快速、灵敏、简便、价廉、易于推广的ＰＣＲ产物定性检测技术。     

应用PCR快速诊断小儿结核性脑膜炎的研究

作者报道特异性寡核苷酸引物引导聚合酶链反应技术检测脑脊液中结核杆菌ＤＮＡ。所用引物来自于编码结核杆菌的６５ＫＤａ蛋白质抗原基因，产生特异的３８３ｂｐ片段。对１０倍连续稀释的人型结核杆菌ＤＮＡ进行ＰＣＲ，可检测出１ｐｇ结核杆菌ＤＮＡ，相当于１０－１００个细胞。应用ＰＣＲ检测４２例结脑脑脊液，阳性率为５７．１４％，直接涂片镜和细胞培养阳性率分别为７．１４％和１４．２８％；４６例非结脑脑脊液中，３种检测     

原位聚合酶链反应检测结核分枝杆菌L型的初步研究

目的：建立一种不需提取ＤＮＡ的检测分枝结核杆菌Ｌ型的分子生物学方法。方法：采用原位聚合酶链反应（原位ＰＣＲ）技术,扩增结核杆菌Ｌ型及其感染的人和小鼠血标本中的结核杆菌ＩＳ６１１０基因,再用免疫组化技术显色。结果：结核杆菌Ｌ型菌株中的ＤＮＡ被扩增,血标本中,可见到红细胞和淋巴细胞周围粘附大量结核杆菌ＤＮＡ阳性颗粒。结论;红细胞和淋巴细胞具有免疫粘附功能,原位ＰＣＲ快速、简便,可用于检测稳定和不稳定分     

PCR检测肺结核病人外周血中结核分枝杆菌

为了解ＰＣＲ检测外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ对肺结核诊断的价值，采用ＰＣＲ检测了１９０例可疑肺结核病人外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并用涂片镜检和培养法检测了这些病人痰中结核分枝杆菌。结果肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率（４４％）明显低于培养法（８０．０％），与涂片法相当（４６．８％）；非肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率为１６．２％（５／３）。ＰＣＲ检测外周血结核分枝杆菌ＤＮＡ诊断肺结核的应用价值有限，对急性     

SRID和PCR法诊断结核病的比较研究

以多聚酶链反应技术（ＰＣＲ）和单向免疫扩散法（ＳＲＩＤ）对１８９例肺内结核病和１１２例肺外结核病患者进行结核杆菌ＤＮＡ检测和活动性结核标记物（ＡＴＭ）检测，结果表明：ＰＣＲ法和ＳＲＩＤ法在诊断结核病方面，二者均具有较高敏感性，阳性率分别为８８．９％和９０．５％．，而假阳性率ＰＣＲ法明显高于ＳＲＩＤ法。提示：检测ＡＴＭ诊断结核病，具有较大实用性。     

16s～23s rDNA间隔区序列RFLP分析在分枝杆菌分类鉴定中的应用

目的：通过对分枝杆菌１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ ＰＣＲ扩增和限制性酶切分析，评价其在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法：对２１种分枝杆菌和９种亲缘关系较远的非分枝杆菌和４种亲缘关系较近的非分枝杆菌的１６ｓ～２３ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增并对扩增产物进行限制性内切酶ＨａｅШ．Ｍｓｐ ｉ消化反应，分析不同菌种扩增 段及其限制性片段长度多态性的差异。结果：ＰＣＲ扩增结果显示：分枝     

石蜡分隔的热启动PCR技术扩增血清HBV-DNA

将聚合酶链反应（ＰＣＲ）成份分两组。先加一组含ｄＮＴＰｓ、引物和ＭｇＣｌ２，并加１粒组织切片用石蜡凝固为盖层。再加另一组反应液含待扩增模板、ＴａｑＤＮＡ聚合酶和ＫＣｌ，以与第一组反应液分隔。ＰＣＲ循环时高温可使中隔蜡层融化，两组反应液相混，蜡油上浮作为防蒸发屏障。由此避免室温混合加样和预置导致引物聚体形成和错导非特异扩增，提高ＰＣＲ特异性和灵敏性。作者应用这一技术检测５３例单项抗ＨＢｃ阳性血清，检出ＨＢＶＤＮＡ１３例，检测６９例ＨＢｓＡｇ阳性和抗ＨＢｅ阳性血清，检出ＨＢＶＤＮＡ６１例。而同样样本用标准ＰＣＲ检测，ＨＢＶＤＮＡ阳性分别为１０例和５２例。两种方法对ＨＢｓＡｇ和抗ＨＢｃ双阳性血清的ＨＢＶＤＮＡ检出率差别有显著意义（Ｐ＜０．０５）。     

PCR对结核性胸水诊断价值的探讨

采用ＰＣＲ技术检测６７例胸水标本中的结核杆菌ＤＮＡ，并与细菌学检查（细菌培养）进行对比观察，结果表明：用ＰＣＲ方法检测结核性胸水中结核杆菌ＤＮＡ阳性的检测率达５２．２４％（３５／６７）；胸水细菌培养出结核杆菌者１３．４６％（７／５２），两者相比具有高度显著性（ｐ＜０．０１）。对３例大量的结核性胸水患者进行动态观察，经抗痨治疗２～３周后复查胸水ＰＣＲ仍为阳性。认为ＰＣＲ是敏感、快速、特异性的方法，对结核性胸水诊断和治疗具有实用价值。     

PCR循环测序法检测K-ras和HCV 5'非编码区基因变异

目的：建立一种简单、快速、可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析Ｋｒａｓ基因和ＨＣＶ５′非编码区基因的变异情况。方法：ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立了以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶、荧光标记的２′，３′双脱氧核苷三磷酸（ｄｄＮＴＰ）直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。应用该方法对人肺癌组织中的Ｋｒａｓ癌基因和丙型肝炎病毒５′非编码区（ＨＣＶ５′ＮＴＲ）进行了序列测定。结果：肺癌组织中的Ｋｒａｓ基因第１外显子第３５位碱基发生点突变（ＧＧＴ→ＧＡＴ）；属于高度保守区的ＨＣＶ５′ＮＴＲ存在基因变异。结论：ＰＣＲ循环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点，为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。     

结核杆菌特异性重复DNA序列的PCR扩增检测

结核杆菌特异性重复ＤＮＡ序列的ＰＣＲ扩增检测徐华梅，巫绪芳，潘理明，吴竞生，王祖贻结核杆菌染色体ＤＮＡ中有一段多次重复出现的核甙酸序列，以此基因片段作为靶ＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术进行扩增，为结核病人快速诊断，及时治疗提供依据。本文摘要报告我们的研究结果...     

用聚合酶链反应快速检测痰液中结核杆菌

本研究以结核杆菌染色体中重复出现的长度为１２３个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段作为作为聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的模板，合成一对寡核苷酸引物。痰液标本先经三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），乙二胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡ－２Ｎａ）和三硝基甲苯（Ｔｒｉｔｏｎ ｘ－１００）加热、震荡处理，裂解结核杆菌，再作ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝胶电泳。同时，与痰液直接涂片、抗酸染色镜检抗酸染色阳性杆菌作比较。用该ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝     

荧光探针定量PCR及其临床应用

荧光探针定量ＰＣＲ（ＦＱ－ＰＣＲ）由ＰＣＲ与荧光素标记的探针杂交技术相结合，可用来检测临床标本中各种病原微生物的ＲＮＡ／ＤＮＡ。具有快速、简便、敏感、特异之优点。因其在单一试管内进行ＰＣＲ扩增，可避免普通ＰＣＲ由于污染所造成的假阳性，并可定量检测各种病原微生物的ＲＮＡ／ＤＮＡ含量。     

多聚酶链反应检测结核杆菌复合群方法的建立及临床应用

采用多聚酶链反应 （ＰＣＲ） 对结核杆菌复合群基因组进行扩增, 得到一２８５ ｂｐ ＤＮＡ条带。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹证实为特异性扩增。用ＰＣＲ方法对临床４０ 份待测标本进行检测,并与结核杆菌常规培养以及高渗培养等方法进行比较, 其阳性率分别为６０．０％ 、７．５％ 和０％ , 差异均有显著性意义 （均为Ｐ＜ ０．０１）。