端粒及端粒酶与卵巢肿瘤关系的研究进展

近年来 ,随着细胞遗传学和分子生物学研究的进展 ,人们逐渐认识到端粒酶 (telomerase)在肿瘤的发生、发展中扮演着重要角色。卵巢肿瘤是常见的妇科肿瘤 ,现就端粒 (telomere)、端粒酶的生物学特性及其与卵巢肿瘤关系的研究进展作一综述。一、端粒、端粒酶端粒是真核细胞染色体末端的DNA重复序列与特异结合蛋白的复合体 ,富含鸟嘌呤。与引物结合的端粒不能随细胞分裂时DNA的复制而复制 ,所以端粒随细胞分裂而丢失 ,每次分裂丢失 5 0～ 2 0 0bp ,当端粒缩短至一阈长度 ( 1 .5kb)时 ,细胞出现增殖危机而走向衰老与死亡。所以 ,端粒的长度被称为细胞的“生命时钟”。一种逃避机制是端粒酶的激活。端粒酶是一种特殊的核糖核酸蛋白质聚合物 ,它能以自身RNA作为模板合成端粒 ,以弥补复制造成的端粒缩短。端粒酶还是细胞周期重要的调控因素之一 ,影响着细胞周期的进程。由于端粒酶的激活 ,肿瘤细胞一方面维持了端粒的长度 ,使细胞获得永生 ;另一方面使细胞周期缩短、生长变快。大量的研究已表明 ,端粒酶的活化与癌症的发生密切相关 ,端粒酶已成为抗肿瘤治疗的一个新靶点。人类端粒酶由RNA和蛋白质组成 ,包括人端...     

微量MIC检测判断结核分枝杆菌药敏的方法学研究

目的 建立用微量MIC值判断结核分枝杆菌药物敏感性的方法 ,并进行初步临床应用评价.方法 采用液体培养基MIC测定技术,在96孔U型板中进行检测,以60株已知药敏结果 的本院菌株库保存菌株作为试验菌株, 根据Bactec MGIT结果采用ROC曲线分析建立微量MIC药敏判断界值,最后用80株连续时间段内收集的结核分枝杆菌临床分离株对微量MIC药敏判断界值进行验证和修正.结果 微量MIC药敏法的最佳接种菌量为10~(-3)mg/ml数量级,7～10 d即可报告结果 ,链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、氧氟沙星、阿米卡星和卷曲霉素的最佳判断界值分别为2、0.25、1、2、1、4和4 μg/ml,其敏感度分别为93.5%、97.7%、93.5%、84.4%、95.8%、91.7%和88.9%, 特异度分别为95.6%、94.6%、100.0%、93.8%、92.9%、95.6%和91.5%.其准确性分别达95.0%、96.3%、97.5%、90.0%、93.8%、95.0%和91.3%. 结论 微量MIC药敏检测方法 具有快速、准确、低成本和操作简单的优点,具有良好的推广应用前景,适合在我国各级结核病专业收治机构使用.     

结核分枝杆菌临床分离株药敏结果与耐药程度的关联分析

目的 探讨结核分枝杆菌临床分离株对12种抗结核药物的MIC值及其药敏检测结果 与耐药程度的关联规律,从而为临床制定治疗方案提供借鉴依据.方法 采用液体培养基联合MTT技术进行抗结核药物的MIC检测.对上海市肺科医院2009年1-6月间的163株结核分枝杆菌临床分离株进行RFP、INH、SM、EMB、OFLX、LVFX、MOX、AMK、CPM、PTA、CLA和PAIN的MIC检测和Bactec MGIT快速培养仪药敏检测,并进行MIC与耐药程度的关联性分析.结果 67%(42/62)的SM耐药株MIC≥16 μg/ml,63%(51/81)的INH耐药株MIC≥8 μg/ml,77%(50/65)的RFP耐药株MIC≥8 μg/ml,20%(12/60)的EMB耐药株MIC≥4 μg/ml;43%(25/58)的OFLX耐药株MIC≥8 μg/ml;41%(15/37)的AMK耐药菌株MIC≥16 μg/ml,41%(12/29)的CPM耐药菌株MIC≥4 μg/ml.OFLX耐药株的3个氟喹诺酮类药物的MIC(OFLX、LVFX和MOX的MIC分别为2～128、1～32和0.0625～1 μg/ml)差异有统计学意义(F=16.874,P<0.01);SM、INH、RFP、EMB、OFLX、AMK和CPM在任6种及7种药物同时耐药株中的MIC值(分别为0.5～128、2～64、0.25～128、1～32、1～64、0.5～128和1～128μg/ml)明显高于任1种及2种药物耐药菌株的MIC值(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～32、0.25～2、0.125～2、0.5～4和1～4 μg/ml,F值分别为20.066、40.499、47.197、70.373、91.432、41.840和21.547,P均<0.05);SM、INH、RFP、EMB在4种药物同时耐药菌株中MIC值(分别为1～128、2～64、0.25～128和1～32μg/ml)显著高于任1种及2种药物耐药株(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～64和0.25～2 μg/ml,F值分别为26.242、23.563、31.541和64.469,P均<0.05);RFP在MDR酶株的MIC值(2～64 μg/ml)显著高于非MDR的耐药菌株的MIC值(0.25 μg/ml,F=5.613,P<0.05).结论 本研究揭示了常用的12种抗结核药物的耐药程度与常规药敏检测结果 之间的关联规律,为临床医生根据常规药敏结果 制定更加有效的抗结核治疗方案提供重要的借鉴.     

微孔板变色硅胶显色法检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的 探讨微孔板变色硅胶显色法快速检测利福平(RIF)耐药结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值.方法 对江苏省南通市第六人民医院结核病实验室保存的50株MTB临床分离株用微孔板变色硅胶显色法检测RIF耐药性,并与Bactec MGIT960作比较.再对40份临床涂阳痰标本使用微孔板变色硅胶显色法与Bactec MGIT960同时进行RIF药敏检测,并比较检测结果的灵敏度、特异度、准确度.结果 微孔板变色硅胶显色法最佳接种菌量为10-3 mg/mL、检测最佳时间为7～10 d、RIF的最低抑菌浓度(MIC)判断界值为1.00μg/mL.以Bactec MGIT960检测法为金标准,微孔板变色硅胶显色法对涂阳痰标本RIF药敏检测灵敏度达94.12％,特异度为100％,准确度为97.37％.结论 微孔板变色硅胶显色法可直接检测痰标本中MTB对RIF的药物敏感性.     

知母及其皂甙元对β肾上腺素受体的调节作用

本文综合报道了以“阴虚”动物模型为对象,采用RIA、RBA及受体的不可逆阻断剂为工具测定受体更新速率等技术对知母滋阴作用机制及滋阴作用有效成分进行了系列研究。结果表明知母对βAR数和cAMP系统反应性的下调作用是其滋阴作用的重要机制之一,所含洋菝葜皂甙元能重现知母水煎剂的下调作用,可认为是知母滋阴作用的重要有效成分,进一步以BAAM为工具的受体更新实验证明知母对βAR下调作用机制主要是使异常升高的受体分子生成速率减慢。     

微流芯片技术在耐药株结核杆菌检测中的应用

目的：探讨微流芯片技术检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变的可行性。方法：根据rpoB基因最为常见的三种突变形式(531TCG→TTG，526CAC→TAC，516GAC→GTC)设计引物，用于微流芯片检测结核分枝杆菌利福平耐药性，同时与常规药敏试验和DNA测序结果进行比较。结果：引物比例1：5，杂交温度52℃，杂交时间10min为最佳条件。在20株常规药敏试验为利福平敏感株中，微流芯片测出2株耐药株，并经DNA测序证实；而28株药敏试验为利福平耐药株中，1株微流芯片测定为敏感株，DNA测序证实为513位CAA→CTA突变。该法与常规药敏试验和DNA测序的总符合率分别为93.8％（45/48）和97.9％（47/48）。结论：微流芯片技术快速、灵敏、准确，可用于结核分枝杆菌利福平耐药性的快速检测。     

纸层析杂交法检测结核杆菌PCR扩增产物

目的建立一种新的快速纸层析杂交技术，用于特异性检测带有生物素标记的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增产物。方法将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上，扩增产物置膜一端，经毛细作用，带有生物素标记的特异性ＤＮＡ分子固定于反应区，非特异性分子被洗脱，杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物（ＢＣＩＰＮＢＴ）显色后判断结果。结果这一技术允许在２５ｍｉｎ内将结核杆菌经ＰＣＲ扩增后的ＤＮＡ１０ｐｇ检出。结论纸层析杂交技术是一种快速、灵敏、简便、价廉、易于推广的ＰＣＲ产物定性检测技术。     

筛选结核分枝杆菌CFP-10抗原适体的研究

目的 建立SELEX技术筛选结核分枝杆菌CFP-10抗原适体的方法,并获得CFP-10 的高亲和性适体.方法 体外构建长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛选介质,采用SELEX 技术筛选获得CFP-10的适体库.将适体库克隆、测序,用DNAMAN软件对其结构进行分析,利用酶联寡核苷酸吸附试验(enzyme-linked oligonucleotide sorbent assay,ELOSA)测定亲和力.结果 构建的ssDNA文库经过14轮筛选与CFP-10亲和力从0.273提高到1.265;克隆子测序,大多数长度与预期值相符.二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适体与CFP-10结合的结构基础.结论 成功建立了SELEX筛选技术,并初步获得了CFP-10的高亲和性适体.     

筛选结核分枝杆菌CFP-10抗原适体的研究

目的建立SELEX技术筛选结核分枝杆菌CFP-10抗原适体的方法,并获得CFP-10的高亲和性适体。方法体外构建长度为78个碱基的随机单链DNA（ssDNA）文库,以微孔板为筛选介质,采用SELEX技术筛选获得CFP-10的适体库。将适体库克隆、测序,用DNAMAN软件对其结构进行分析,利用酶联寡核苷酸吸附试验（enzyme-linkedoligonucleotide sorbent assay,ELOSA）测定亲和力。结果构建的ssDNA文库经过14轮筛选与CFP-10亲和力从0.273提高到1.265;克隆子测序,大多数长度与预期值相符。二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适体与CFP-10结合的结构基础。结论成功建立了SELEX筛选技术,并初步获得了CFP-10的高亲和性适体。     

蓖麻子炮制品抗肺癌作用的实验研究

运用中医“解毒”炮制方法对蓖麻子进行炮制,并通过其LD₅₀的测定和对人肺癌裸小鼠移植瘤模型的抑瘤实验,证明此炮制方法对减低蓖麻子毒性,保留其部分抗癌作用具有明显的效果。