高温合并化疗对耐药性VX-2细胞多药耐药基因的影响

目的：观察热化疗对多药耐药性VX-2细胞mdr基因的影响．方法：采用单纯化疗(阿霉素32μg／mL,1h),单纯热疗(42．5℃,1h)及热疗联合化疗(阿霉素32μg／mL 42．5℃,1h),分别作用于VX-2及VX-2,mdr1细胞．观察不同处理组细胞的存活率、mdr1 mRNA及．P-gp的表达情况．结果：热化疗组细胞的存活率明显低于单纯加热组及单纯化疗组,同时热化疗组细胞mdr1 mRNA的表达明显减低或消失,P—gp表达明显减低．结论：热化疗可以使多药耐药细胞mdr1 mRNA表达降低或消失,使P—gp表达降低,从而逆转了肿瘤细胞的多药耐药性,提高了化疗的敏感性．     

逆转录病毒转染法建立耐药性大鼠CRBH-7919细胞系

目的:建立高效、稳定的大鼠CRBH-7919多药耐药细胞系.方法:利用逆转录病毒转染法将带有mdr1 cDNA全序列的逆转录病毒载体pHaMDR转入到大鼠CRBH-7919细胞中,MTT法检测细胞系在不同化疗药物作用下的存活率;免疫组化检测细胞的P-糖蛋白(P-GP)表达,RT-PCR检测细胞内mdr1 mRNA的表达量,PCR检测mdr1基因转移到细胞内的基因片段.结果:转基因的细胞系对阿霉素、丝裂霉素的耐药性分别提高 9和7.9倍,免疫组化见转基因细胞系P-GP表达增加,RT-PCR示细胞内mdr1 mRNA的表达量增加,PCR表明转基因细胞内扩增出mdr1片段.结论:利用逆转录病毒转染法成功建立了大鼠CRBH-7919多药耐药细胞系,该细胞系具有耐药强度高、耐药性稳定等特点.     

增加CIK细胞耐药性及杀瘤活性机制的研究

目的 常规方法培养CIK细胞,将多药耐药基因(mdr1)转入细胞内,观察转染前后其对卡铂的耐药性及杀瘤活性机制进行研究.方法 将mdr1的重组质粒转染到对数生长期的CIK细胞,通过RT-PCR鉴定耐药基因表达;Western blot检测mdr1编码的P-gp蛋白的表达;MTT法检测转染前后CIK细胞对卡铂敏感性的变化.结果 在转染mdr1基因后的CIK细胞中,mdr1 mRNA阳性,P-gp的表达较转染前CIK细胞及转染空质粒的CIK细胞明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),转染mdr1基因后的CIK细胞对卡铂的耐药性明显提高.结论 mdr1基因转入CIK细胞后,细胞获得了对卡铂的耐药性.     

靶向mdr1b/mdr1a基因siRNA逆转T24/ADM多药耐药性研究

目的:研究mdr1b/a基因siRNA(small interfering RNA)逆转膀胱癌的多药耐药性。方法:设计mdr1b/a基因的siRNA,转染膀胱癌T24/ADM细胞,用RT-PCR分析mRNA的表达,Rh123分析P-gp活性,流式细胞仪检测细胞内阿霉素积累量。结果:siRNA能明显地逆转T24/ADM细胞的多药耐药,使mdr1b/a基因的mRNA表达水平下调,细胞内阿霉素积累量显著增加(P<0.05)。结论:mdr1b/a基因siRNA能够逆转膀胱癌的多药耐药性。     

恶性淋巴瘤mdr1和MRP mRNA及 P-gp表达水平与化疗疗效的相关研究

目的探讨恶性淋巴瘤mdr1、MRP mRNA和P-gp表达水平与化疗疗效的相关性.方法应用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术和流式细胞术(FCM)方法,以8例人正常淋巴结为正常对照,对46例淋巴瘤患者[23例初治(HD1例,NHL22例)及23例复发(HD5例,NHL18例)]的mdr1 mRNA、MRP mRNA和P-gp表达水平与化疗疗效间的关系进行了前瞻性研究.结果复发患者mdr1基因和P-gp表达水平及阳性率均高于初治患者(P<0.001),而MRP基因表达水平及阳性率在复发与初治患者间差异无显著意义(P>0.05).mdr1基因及P-gp表达阳性患者的化疗有效(CR+PR)率(33.33%和26.67%)明显低于mdr1基因及P-gp表达阴性患者(85.71%和83.87%,P<0.001),而MRP基因表达阳性患者与阴性患者的化疗有效率差异无显著意义(P>0.05).相关分析显示,mdr1基因和P-gp表达水平之间有明显相关性(r=0.296 3,P<0.05),而mdr1和MRP之间、MRP与P-gp之间均无明显相关性(r=0.072 3,P>0.05;r=0.081 8,P>0.05).结论 mdr1基因及P-gp表达是恶性淋巴瘤患者多药耐药的主要机制,而MRP基因不是产生耐药的主要机制.mdr1基因及P-gp表达水平的高低与恶性淋巴瘤化疗疗效密切相关,而MRP基因的表达与化疗疗效未见相关.     

两种不同分化程度的鼻咽癌细胞在化疗药物作用前后多药耐药基因的表达

目的 检测鼻咽癌CNE1和CNE2细胞在阿霉素(adriamycin,ADM)作用前后多药耐药基因(mdr1 基因)及其编码产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是否表达及功能变化.方法 利用RT-PCR,Western blotting和流式细胞仪(FCM)检测CNE1和CNE2细胞在阿霉素作用前后的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素(daunorubicin,DNR)的外排功能.结果 鼻咽癌CNE1和CNE2细胞在阿霉素作用前mdr1基因、P-gp不表达;阿霉素作用后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达,对柔红霉素的蓄积较阿霉素作用前低.结论 化疗可能诱导鼻咽癌细胞的多药耐药.     

微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的探讨微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM的多药耐药蛋白表达和耐药性的影响。方法应用Real-TimePCR法检测微波热疗对P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响和高效液相色谱法(HPLC)检测微波热疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果MCF-7/ADM细胞在微波热疗后4h和24h,P-gp、MRP表达量明显下降(P<0.01)。微波热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升(P<0.01)。结论微波热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,热疗可能是逆转化疗耐药从而提高化疗效果的一种有效手段。     

X射线照射后鼻咽癌细胞多药耐药基因的表达

目的 通过检测射线照射前后鼻咽癌CNE1细胞多药耐药基因(mdr1基因)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)的表达和功能为临床鼻咽癌放化疗顺序提供参考。方法 利用RT-PCR、Western blotting和流式细胞仪检测射线照射前后CNE1细胞的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素的外排功能。结果 鼻咽癌CNE1细胞射线照射前mdr1基因、P-gp不表达；照射后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达；对柔红霉素的摄取较射线照射前低。结论 鼻咽癌CNE1细胞射线照射后化疗敏感性降低，提示临床对于中晚期鼻咽癌的治疗应考虑先化疗再放疗即诱导化疗的治疗方案。     

HL60/VCR白血病细胞多药耐药机制的初步探讨

目的探讨白血病细胞产生耐药的机制,以及VEGF在白血病细胞产生耐药过程中的作用。方法采用反复暴露并逐渐提高诱导药物浓度的方法建立HL60/VCR多药耐药细胞系,MTT法检测细胞的耐药性及交叉耐药性;RT-PCR检测诱导前后mdr1、MRP、TopoⅡα、GSTπ和VEGF mRNA的表达情况。结果诱导后的HL60/VCR耐药细胞不仅对VCR高度耐药,对其他类化疗药物亦具有交叉耐药性;与HL60相比,HL60/VCR的mdr1、TopoⅡα和VEGF mRNA的表达明显增强,GSTπmRNA的表达无明显变化;HL60和HL60/VCR均不表达MRP mRNA。结论耐药基因mdr1和TopoⅡα以及VEGF共同参与HL60/VCR多药耐药的形成。     

小鼠腹水型肝癌多药耐药模型的建立

目的：建立小鼠腹水型肝癌（Hca）多药耐药（MDR）模型并探讨其产生的分子机制。方法：荷Hca小鼠分为2组,每组10只。化疗组采用临床化疗FAP方案,以剂量递增的方法诱导耐药模型,对照组仅给予等体积的生理盐水。MTT法检测瘤细胞对7种化疗药物的耐药性;流式细胞术检测瘤细胞对Rh123的蓄积与泵出能力,计算平均荧光强度（MFI）;RT-PCR检测瘤细胞mdr1和mrp1mRNA的表达及停药后化疗组小鼠瘤细胞mdr1和mrp1mR-NA的表达。结果：化疗组小鼠瘤细胞对7种化疗药物均产生耐药性。与对照组相比,化疗组小鼠瘤细胞内Rh123蓄积量减少,泵出率增加（t=6.067和6.811,P均〈0.05）,mdr1和mrp1mRNA的表达水平升高（t=18.807和4.420,P均〈0.05）;mdr1和mrp1mRNA的表达水平在停药4周内稳定（P〉0.05）,停药8周后下降（P〈0.05）。结论：成功建立了小鼠腹水型肝癌MDR模型,MDR的产生与mdr1和mrp1mRNA过度表达从而影响药物蓄积有关。     

慢性粒细胞白血病细胞株伊马替尼耐药与MDR1基因表达相关性探讨

目的 探讨慢性粒细胞白血病细胞株伊马替尼耐药与MDR1基因表达相关性.方法 采用Real-time PCR检测MDR1 mRNA表达,Western-blot检测P-gp蛋白表达,MTS法检测细胞药物敏感性.结果 耐伊马替尼细胞株K562/G01MDR1的mRNA表达明显上调,P-gp表达明显上调,维拉帕米能部分逆转K562/G01细胞株对伊马替尼的耐药.结论 MDR1基因参与伊马替尼耐药机制,P-gp抑制剂能改善伊马替尼临床疗效.     

The role of c-myc in regulating mdr1 gene expression in tumor cell line KB

Ｔｈｅｃ ｍｙｃｐｒｏｔｏ ｏｎｃｏｇｅｎｅｐｌａｙｓａｒｏｌｅｉｎｍａｎｙｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ,ｓｕｃｈａｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ,ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｉｔｉｓａｎｅａｒｌｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｇｅｎｅｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ (Ｇ1 Ｓｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ)ａｎｄａｃｔｉｖａｔｅｓｑｕｉｅｓｃｅｎｔｃｅｌｌｓｉｎｔｏｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅ (Ｇ0 Ｇ1ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ) Ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃ …     

三氯化镧对CBRH-7919细胞Cyclin D_1基因表达的影响

目的:研究三氯化镧对大鼠肝癌细胞CyclinD1基因表达的影响,探讨三氯化镧抑制肝癌细胞生长的机制。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01、0.1、1.0mmol/LLaCl3,培养3、5、7d后,运用流式细胞术检测CBRH-7919的细胞周期时相变化。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学技术检测CyclinD1的基因表达。结果:0.1、1.0mmol/LLaCl3组培养3、5、7d后,G0/G1期细胞百分数均有显著性增加;CyclinD1的转录和蛋白表达均显著减弱。结论:LaCl3可通过下调CyclinD1的转录和蛋白表达,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。     

Synergistic effect of hyperthermia and neferine on reverse multidrug resistance in adriamycin-resistant SGC7901/ADM gastric cancer cells

Multidrug resistance(MDR) plays a major obstacle to successful gastric cancer chemotherapy.The purpose of this study was to investigate the MDR reversal effect and mechanisms of hyperthermia in combination with neferine(Nef) in adriamycin(ADM) resistant human SGC7901/ADM gastric cancer cells.The MDR cells were heated at 42℃ and 45℃ for 30 min alone or combined with 10 μg/mL Nef.The cytotoxic effect of ADM was evaluated by MTT assay.Cellular plasma membrane lipid fluidity was detected by fluorescence polarization technique.Intracellular accumulation of ADM was monitored with high performance liquid chromatography.Mdr-1 mRNA,P-glycoprotein(P-gp),γH2AX expression and γH2AX foci formation were determined by real-time PCR,Western blot and immunocytochemical staining respectively.It was found that different heating methods induced different cytotoxic effects.Water submerged hyperthermia had the strongest cytotoxicity of ADM and Nef combined with hyperthermia had a synergistic cytotoxicity of ADM in the MDR cells.The water submerged hyperthermia increased the cell membrane fluidity.Both water submerged hyperthermia and Nef increased the intracellular accumulation of ADM.The water submerged hyperthermia and Nef down-regulated the expression of mdr-1 mRNA and P-gp.The water submerged hyperthermia could damage DNA and increase the γH2AX expression of SGC7901/ADM cells.The higher temperature was,the worse effect was.Our results show that combined treatment of hyperthermia with Nef can synergistically reverse MDR in human SGC7901/ADM gastric cancer cells.     

虾青素对大鼠肝癌CBRH-7919细胞骨架和nm23蛋白的影响

目的研究虾青素(Astaxanthin,Asta)对大鼠肝癌细胞CBRH-7919细胞骨架和肿瘤转移抑制蛋白23(non-metastasis23,nm23)的影响。方法 MTT法检测Asta作用下对CBRH-7919细胞生长的影响,激光扫描共聚焦显微镜观测CBRH-7919细胞骨架的变化,免疫荧光法检测nm23蛋白的表达和分布。结果 Asta能够抑制CBRH-7919细胞的生长,激光扫描共聚焦显微镜观察到Asta对CBRH-7919细胞骨架有破坏作用,骨架网状结构降解、凝聚、分布不均,Asta作用时间越长对细胞骨架的破坏作用越明显。免疫荧光结果显示nm23蛋白主要分布在细胞质中,Asta作用下nm23蛋白在0～18 h内表达上调,18 h后表达下调。结论 Asta能显著抑制CBRH-7919细胞生长,可能与其破坏肿瘤细胞骨架及对nm23蛋白的调控有关。     

角质细胞生长因子对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响

目的 研究角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响.方法 MTT法检测不同浓度的重组人角质细胞生长因子(K102)对CBRH-7919细胞增殖的影响;免疫细胞化学技术检测角质细胞生长因子受体(keratinocyte growth factor receptor, KGFR)在CBRH-7919细胞中的表达.结果 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中均有表达,MTT实验显示K102对CBRH-7919细胞增殖作用与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中存在表达,但K102对肝癌细胞CBRH-7919的增殖无明显作用.     

五味子乙素对转染多药耐药1基因的MCF-7细胞的多药耐药逆转作用

目的 探讨五味子乙素(SchB)对转染多药耐药1基因(MDR1)的人乳腺癌细胞MCF-7的多药耐药逆转作用及相关机制。方法 将人MDR1基因导入MCF-7细胞,形成耐药细胞株MCF-7／MDR1;用该细胞株为模型评价SchB的体外逆转多药耐药作用,用MTT法进行化疗药物单独或与SchB联合作用时对耐药细胞的IC50比较,计算逆转倍数。结果 转染细胞MCF-7／MDR表现为P糖蛋白高表达,对阿霉素、长春新碱、紫杉醇、高三尖杉酯的抗药性均增加;SchB(25μmol／L)显著减少阿霉素、长春新碱、紫杉醇和高三尖杉酯对MCF-7／MDR细胞的IC50,逆转倍数达6．03-23．94倍;SchB(25μmol／L)使MCF-7／MDR细胞对若丹明123的胞内积聚增加约5倍。效果与维拉帕米10μmol／L浓度时相当;但SchB(25μmol／L)不影响MCF-7／MDR细胞的P-糖蛋白表达。结论 SchB能有效逆转转染MDR1的MCF-7细胞的多药耐药,其机制可能是抑制了P-糖蛋白的药物外排生物学活性。     

逆转录病毒转染法建立兔VX-2多药耐药株

目的：建立VX-2多药耐药(MDR)细胞(VX-2mdrI)。方法：利用逆转录病毒转染法将带有mdrI cDNA全序列的逆转录病毒载体pHaMDR1转入到兔VX-2细胞中，MTT法检测细胞在不同化疗药物作用下的存活率；免疫组化检测细胞的P-糖蛋白(P-gp)表达，RT-PCR检测细胞内mdrI mRNA的表达量．结果：转基因的细胞对吡柔比星、秋水仙素的耐药性分别提高10和25倍，免疫组化见转基因细胞中P-gp表达增加，RT-PCR示细胞内mdrI mRNA的表达量增加。结论：利用逆转录病毒转染法构建了兔VX-2 MDR细胞。     

难治性癫痫患者血清和脑脊液多药耐药基因-1表达的研究

目的 探讨难治性癫痫的发病机制,为寻找难治性癫痫新的治疗方法提供理论依据.方法 采用ELISA方法及荧光定量聚合酶链反应技术检测临床确诊为难治性癫痫的15例患者血清、脑脊液p-糖蛋白( P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药基因-1(multidrug resistancel,MDR1)-mRNA,并与用药物控制良好的15例癫痫患者和15例正常人比较.结果 难治性癫痫组血清、脑脊液P-gp和MDR1-mRNA明显高于癫痫治疗有效组和正常对照组.结论 MDR1过度表达可能是癫痫耐药的重要因素,并可作为癫痫耐药的一个客观指标.