巨噬细胞细胞毒功能的调变Ⅲ.Fusarin C对活化的巨噬细胞细胞毒功能的影响

本文报道串珠状镰刀菌毒素Fusarin C对巨噬细胞(Mφ)介导的细胞毒功能的影响,结果表明Fusarin C强烈抑制巨噬细胞激活因子(MAF)体外活化的Mφ介导的抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和溶瘤细胞作用(MTC),对短小棒状杆菌(Cp)体内活化的Mφ所介导的瘤细胞增殖抑制作用(CS)也有明显的抑制,但对Mφ的免疫吞噬功能无明显影响。     

缺氧所致神经元AMPA受体的结构组成及功能变化

目的探讨缺氧损伤后神经元膜表面谷氨酸AMPA受体亚单位(GluRs)含量、受体结构组成、功能的变化及其在Ca2 超载和延迟性细胞死亡中的作用.方法建立神经元缺氧损伤模型,采用PI染色、双重免疫荧光标记和细胞比色分析技术定量观察神经元死亡和膜表面GluRs含量变化,采用Fura-2法测定胞内Ca2 含量,以膜片钳技术检测微兴奋性突触后电流(mEPSCs)的变化.结果伤后胞内Ca2 含量和神经元死亡数量明显高于对照组;膜表面GluR2含量及含GluR2的突触数目显著减少(P<0.05),而GluR3含量较对照组则显著升高(P<0.05);缺乏GluR2的AMPA受体通道对Ca2 有很高的通透性.结论缺氧可致神经元膜表面AMPA受体的结构组成发生变化,缺乏GluR2的受体通道数目增加,介导了Ca2 的快速内流,引起神经元的延迟性死亡.     

Toll样受体与肝纤维化关系的研究进展

Toll样受体(TLRs)是细胞表面信号转导跨膜受体,能够识别作为配体的病原相关的分子模式。作为细胞膜上的跨膜信号传递分子,TLRs通过信号转导参与配体介导的肝脏内多种细胞的激活及多种细胞因子的分泌,参与肝纤维化的发生及发展过程。肝免疫细胞和肝星状细胞上被激活的TLRs在肝纤维化形成过程中具有重要作用。现就TLRs与肝纤维化关系予以综述。     

GFR/DDR2嵌和受体的构建和稳定表达的鉴定

目的：将一在细胞膜表面不表达或低表达的受体胞外区与盘状结构域受体2(DDR2)的胞内区融合，构建一嵌和DDR2受体，避免在活化此受体的同时激活与DDR2有相同配体的受体介导的信号通路，为探索DDR2介导的胞内信号途径奠定基础．方法：采用PCR扩增和限制性酶切的方式，将表皮生长因子受体(EGFR)的胞外区与DDR2的跨膜及胞内区进行融合并稳定转染EGFR低表达的293细胞，G418筛选，流式细胞仪检测嵌和受体在膜表面的表达状况．结果：成功构建了EGFR／DDR2嵌和表达载体；筛选到稳定表达此嵌和受体的293细胞株．结论：融合并稳定表达了EGFR／DDR2嵌和受体．     

趋化因子受体CCR5的研究进展

CCR5为趋化因子CC受体家族成员,属7次跨膜G蛋白耦联受体,配体为CCL3 (MIP-1α)、CCL4( MIP-1β)、CCL5( RANTES).CCR5主要表达于单核/巨噬细胞和淋巴细胞,与其配体介导CCR5+免疫细胞的趋化、募集过程.因此,多种免疫性疾病的发生和发展过程均有CCR5参与.CCR5是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)入侵时的重要辅助受体,而在肿瘤细胞和各类肿瘤相关间质细胞的表面也可见其表达,并介导肿瘤增殖、浸润等多种生物学过程.随着相关研究技术的发展,进一步加深了对CCR5的结构、功能、信号通路及其在相关疾病中的作用的认识.     

M受体亚型及消化道功能紊乱时的受体变化

1914年Dale根据胆碱能神经元末梢释放的神经递质乙酰胆碱对细胞表面受体作用的不同,将其分为毒蕈碱受体(M受体)和烟碱样受体(N受体)两类。N受体广泛分布于组织,在横纹肌、自主神经节及中枢神经系统中发挥N样调节作用。,由于N受体对阻断剂反应不同,N受体又分为N_1和N_2受体。M受体参与许多重要的生理过程,如神经-神经传导、平滑肌收缩及腺体分泌等,临床上它们在许多病理过程中发挥重要作用。M受体激动剂和拮抗剂在治疗疾病过     

血管内皮细胞非神经性M受体药理学与疾病治疗的研究进展

血管内皮细胞上存在介导内皮依赖性血管舒张反应的血管内皮细胞非神经性毒蕈碱样受体（M受体）。对血管内皮细胞非神经性M受体亚型的定性一直存在争议。多数药理实验结果显示血管舒张反应是M3受体介导的；另外M1，M2受体也在不同组织类型的血管上介导了血管舒张反应。基因敲除小鼠的结果显示，主动脉、冠状动脉上介导舒张反应的受体以M3亚型为主；脑动脉上以M5为主。药理实验发现，介导血管舒张效应的内皮细胞非神经性M受体具有相对的组织、器官选择性和动物种属差异，与神经性M受体药理学特性有差别。激活血管内皮细胞非神经性M受体可促使内皮细胞分泌多种血管活性因子，介导血管的舒张、维持血管的正常生理状态；同时还可促进组织型纤溶酶原激活物的生成，降低多种粘附分子的分泌，产生抗动脉粥样硬化和抗血栓形成的功能。与传统药物作用机制不同。     

α-突触核蛋白通过Rab5B下调海马神经元膜表面NMDA受体含量及其介导的Ca~(2+)内流和内向电流

目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对原代海马神经元膜表面N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体含量和功能的影响及其机制。方法细胞外添加基因重组α-Syn,使其进入原代培养神经元细胞内,观察敲减Rab5B基因前后神经元膜表面NMDA受体(NMDAR)和Rab5B表达的变化;NMDA激活NMDAR,活细胞工作站测定神经元Ca~(2+)内流变化,全细胞膜片钳记录内向跨膜电流变化。结果α-Syn增加神经元Rab5B的表达,减少膜表面NMDAR含量,并因而抑制NMDA引起的Ca~(2+)内流及内向跨膜电流;敲减Rab5B可逆转α-Syn对NMDAR的下膜作用及功能的影响。结论α-Syn通过上调Rab5B而下调海马神经元膜表面NMDAR含量及其介导的Ca~(2+)内流及内向电流。     

结核病患者中性粒细胞表面Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(M.tb)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR4的表达率;再用M.tb感染结核病患者和正常人外周血,检测PMN表面TLR2和TLR4表达情况。结果:结核病患者外周血感染M.tb前PMN表面TLR2和TLR4表达率明显高于正常人(P0.01);结核病患者和正常人外周血在感染M.tb后PMN表面TLR2和TLR4表达率均较感染前明显降低(P0.01)。结论:结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达和活化有助于机体抵御结核感染,TLR2和TLR4共同参与了宿主对M.tb的免疫应答。     

NMDA受体与AMPA受体亚单位在培养海马神经元树突上的表达及共定位

目的 :研究含 NR2 B亚单位的 NMDA受体 (以下简称 NR2 B- NMDAR)与含 Glu R2亚单位的 AMPA受体 (以下简称 Glu R2 - AMPAR)在不同发育阶段的培养海马神经元树突上的表面表达及共定位。方法 :以 FL AG- NR2 B、GFP- Glu R2及 CFP- Actin的表达载体共转染原代培养 5 d的大鼠海马神经元 ,分别用抗 FL AG单克隆抗体和山羊抗鼠二抗 - Cy3(红色荧光 )、抗 GFP多克隆抗体和山羊抗兔二抗 - Alex4 88(绿色荧光 )作活细胞双重染色 ,显示并计数表面表达的 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - AMPAR受体簇以及两者共定位的受体簇。结果 :培养 7d和 19d时 NR2 B- NMDAR受体簇密度分别为 39.7± 5 .0和 6 4.7± 6 .1(P<0 .0 1;n=6 ) ;Glu R2 - AMPAR受体簇密度分别为 5 9.1± 3.3和 99.7± 6 .4 (P<0 .0 1;n=6 ) ;两者共定位的受体簇密度分别为 2 9.9± 4 .5和 37.5± 2 .5 (P<0 .0 5 ;n=6 )。培养 7d和 19d时 ,与 Glu R2 - AMPAR共定位的 NR2 B- NMDAR受体簇占总 NR2 B- NMDAR受体簇的比例分别 75 .4 %和 5 7.9% ,而与 NR2 B- NMDAR共定位的 Glu R2 - AMPAR受体簇占总 Glu R2 - AMPAR受体簇的比例分别为 5 0 .6 %和 37.6 %。结论 :随着海马神经元的发育 ,成熟神经元比未成熟神经元树突表面 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - A     

病毒巨噬细胞炎性蛋白与趋化因子受体结合的效应分析

目的: 探讨人疱疹病毒8K6基因编码的产物病毒巨噬细胞炎性蛋白(viral macrophage inflamm atory protein,vMIP)是否具有结合趋化因子受体以及趋化作用。方法: 受体配体交联试验检测vMIP与受体结合能力。趋化实验及细胞内钙流检测判断vMIP的生物学活性。结果: vMIP可与外周血单个核细胞(PBMCs)膜上的趋化因子受体结合,抑制hMIP-1α对PBMC的趋化能力,EC₅₀为3.39 ng/ml。其本身只有较弱的趋化能力。钙流实验证实vM IP轻度升高胞内钙离子浓度,但可明显抑制hMIP-1α所引起的胞内钙离子高峰。结论: 重组vMIP与hMIP-1α受体(CCR5)结合后,可有效的阻断人源性趋化因子的结合与信号传导,但其本身对细胞未有明显的激活作用,因此可作为趋化因子受体的天然阻断剂,可用于免疫移植中的排斥反应或HIV-1病毒感染等。     

Ca~(2+)和PKc在巨噬细胞激活过程中作用的初步研究

①目的探讨Ｃａ２＋和蛋白激酶Ｃ（ＰＫｃ）在巨噬细胞激活过程中的作用。②方法在不同试验条件下，用同位素标记的方法，检测巨噬细胞介导的细胞毒作用及ＰＫｃ的活性。③结果胞外Ｃａ２＋络合剂不影响巨噬细胞活化因子（ＭＡＦ）的作用，而钙离子通道剂Ａ２３１８７激活巨噬细胞的作用完全丧失；胞内Ｃａ２＋拮抗剂能够抑制ＭＡＦ或Ａ２３１８７激活巨噬细胞的作用，并且有剂量依赖关系；巨噬细胞激活剂能使胞质中ＰＫｃ活性大大降低，而使膜结合ＰＫｃ活性明显升高。④结论Ｃａ２＋和ＰＫｃ在巨噬细胞激活的信号传递中起重要作用     

Progress in studies on the role of gamma-aminobutyric acid type A receptor in convulsion: a short review

Convulsion is the medical condition where body muscles contract and relax rapidly and repeatedly, resulting in an uncontrolled shaking of the body. The impaired inhibition of electrical activity in the brain is one of leading causes of convulsion. γ-aminobutyric acid (GABA) is the chief inhibitory neurotransmitter in the mammalian central nervous system (CNS). GABA acts at inhibitory synapses in the brain by binding to specific transmembrane receptors in the plasma membrane of both pre- and post-synaptic neuronal processes. GABA_A receptor (GABA_AR) is the most important inhibitory receptor, and is the target receptor of anticonvulsant drugs in the clinic. In this review, we describe GABAergic signaling mediated by GABA_AR, the mechanisms of GABA_AR and their expression, and the progress being made on understanding the role of GABA_AR in convulsion with emphasis on the association between GABA_AR mutations or GABA_AR subunit expression and convulsion. We also describe progress of anticonvulsant drugs based on the GABA_AR.

     

Rapid effect of stress concentration corticosterone on glutamate receptor and its subtype NMDA receptor activity in cultured hippocampal neurons

Objective: To study the rapid effect of glucocorticoids (GCs) on NMDA receptor activity in hippocampal neurons in stress and to elucidate its underlying probable membrane mechanisms. Methods: Whole-cell patch-clamp recording was used to assess the effect of stress concentration corticosterone (B) on the responses of cultured hippocampal neurons to glutamate and NMDA (N-methy-D-asparatic acid). To make clear the target of B, intracellular dialysis of B(10μmol/L)through patch pipette and extracellular application of bovine serum albumin-conjugated corticosterone (B-BSA, 10μmol/L)were carried out to observe their influence on peak amplitude of NMDA-evoked current. Results: B had a rapid, reversible and inhibitory effect on peak amplitude of GLU-or NMDA-evoked current in cultured hippoeampal neurons. Furthermore, B-BSA had the inhibitory effect on INMDA as that of B, but intraeeUularly dialyzed B had no significant effect on INMDA. Conclusion: These results suggest that under the condition of stress, GCs may rapidly, negatively regulate excitatory synaptic receptors-glutamate receptors (GluRs), especially NMDA receptor (NMDAR) in central nervous system, which is mediated by rapid membrane mechanisms, but not by classical, genomic mechanisms.     

单核细胞趋化蛋白-1趋化巨噬细胞迁移与侵袭的体外实验研究

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对巨噬细胞（NR8383）体外迁移和侵袭作用的影响．方法体外传代培养NR8383细胞,免疫组化检测NR8383细胞上MCP一1特异性受体（CCR2）的表达,细胞迁移和Transwell小室侵袭实验分别观察MCP-1及CCR2拮抗剂（RS504393）对NR8383细胞迁移和侵袭作用的影响．结果免疫组化检测显示NR8383细胞膜上存在有CCR2表达;细胞迁移和侵袭实验证明MCP-1促进NR8383细胞迁移和侵袭,而RS504393抑制NR8383细胞迁移和侵袭;不同浓度MCP-1（200～800μg/L）诱导下,NR8383细胞迁移能力随MCP-1浓度增高而增强（P〈0．05）．结论MCP-1对巨噬细胞迁移和侵袭具有促进作用,其作用与MCP-1受体CCR2结合有关．     

Effects of insulin receptor tyrosine protein kinase on insulin resistance after scalding in rats

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｏｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｆｔｅｒｓｃａｌｄｉｎｇｉｎｒａｔｓ￥（毛旭虎）（许霖水）ＭａｏＸｕｈｕ，ＸｕＬｉｎｓｈｕｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢ...     

M-CSF及其受体在肿瘤细胞系中的表达

本文使用免疫酶标技术ＡＢＣ法研究了ＨＬ６０,ＭＧＣ８０和ＭＣＦ７三个细胞系中ＭＣＳＦ及其受体的表达,结果表明,在ＨＬ６０和ＭＣＦ７细胞系中,ＭＣＳＦ和ＭＣＳＦ受体在细胞膜、细胞质和细胞核中均有表达,而ＭＧＣ８０细胞系的ＭＣＳＦ和ＭＣＳＦ受体只在细胞膜和细胞质中出现阳性表达,而细胞核未见阳性表达。ＭＣＳＦ和ＭＣＳＦ受体在上述细胞系中,其表达可能暗示上述细胞系存在自分泌现象。此外,本文还讨论了ＭＣＳＦ及其受体的核内分布的可能机制及其意义。     

缺失激素结合区的人糖皮质激素受体突变体的研究

目的：构建缺失激素结合区（LBD）的人糖皮质激素受体突变体表达载体，并研究其表达和功能。方法：运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体（CR）基因不含编码LBD的cDNA序列，将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体，测序筛选编码正确的重组质粒；荧光显微镜观察GR突变体重组质粒转染人巨噬细胞株U937后的表达情况；相对荧光素酶法检测转染后细胞GR转录激活活性。结果：扩增出长1601bp的cDNA序列，测序证实：克隆片段与Genebank该基因序列同源性为100％；重组质粒表达产物定位于细胞核；转染组细胞GR转录激活活性增强。结论：成功构建缺失LBD的GR突变体表达载体，该突变体具有不依赖激素的GR转录激活活性。     

铝氟及其混合液大鼠小肠原位灌流对酶活性的影响

The tritiated alpha-isobutylhydroxybenzyl alcohol (3H-G018) was found to be able to bind benzodiazepine (BZ) receptor on the rat brain membrane. The 125I labeled G-018 also had the similar binding activity with this receptor. In the present investigation, we observed that gastrodigenin and its derivatives inhibited the 125I-G018 binding of BZ receptor competitively, but no inhibition was observed with gastrodin. The results suggested that Gastrodigenin was bound to BZ receptor, and otherwise, gastrodin would have no direct interaction with BZ receptor. Probably, it might metabolize into gastrodigenin in vivo, and then got through the blood brain barrier and bound to BZ receptor, which mediated its pharmacological effects on the central nervous system.     

组织细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活力测定方法

目的 介绍一种组织细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶（TPK）活力测定方法。方法 密度梯度离心分离小鼠肝和骨骼肌细胞膜成分，不进行膜胰岛素受体纯化，用单位膜蛋白胰岛素刺激前后的膜TPK活力改变值，作为评估组织细胞膜胰岛素受体TPK活力的定量指标，并与传统方法的单位膜蛋白麦胚凝集素（WGA）亲和层析纯化后的胰岛索受体胰岛紊刺激前后的TPK活力改变值进行比较。结果 每mg膜蛋白基础（无胰岛索刺激）TPK活力明显高于每mg膜蛋白纯化后的胰岛素受体TPK活力（P〈0．01）；每mg膜蛋白经胰岛素刺激的TPK活力改变值与每mg膜蛋白纯化后的胰岛素受体TPK活力改变值无显著差别（P〉0．05）。结论 组织细胞膜上存在TPK，用胰岛素刺激的组织细胞膜TPK活力改变值，可作为组织细胞膜胰岛素受体特异TPK活力。本方法不需要纯化组织细胞膜胰岛素受体，可作为评价组织细胞膜胰岛紊受体功能的实用科研技术。