内毒素、烫伤血清对培养的大鼠心脏微血管内皮细胞间连接的影响

目的：探讨内毒素、烫伤血清对培养的心脏微血管内皮细胞（ＣＭＥＣ）间连接成分ＶＥ－钙粘附分子表达的影响，研究内毒素对严重烧伤后内皮细胞的损伤机制。方法：①ＣＭＥＣ的分离培养；②烫伤血清和内毒素刺激培养的ＣＭＥＣ后ＥＬＩＳＡ测定内皮细胞间连接成分ＶＥ－钙粘附分子的表达。结果：ＣＭＥＣ经２０％的烫伤血清刺激后，６ｈ开始ＶＥ－钙粘附分子的表达即有明显减少，是正常对照组的６５％，到２４ｈ仍在低的水平（Ｐ＜０．０１）；经内毒素（２ｍｇ／Ｌ）刺激，从１ｈ开始即有显著降低，是对照组的８０％，６ｈ降低到最低点，是对照组的５６％，后仍在低的水平（Ｐ＜０．０１）。不同浓度的内毒素（０．５、１．０、１．５和２．０ｍｇ／Ｌ）对培养的ＣＭＥＣ进行刺激，作用１２ｈ后，与正常对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１），分别为对照组的８８％、８３％、８０％和４７％，且２．０ｍｇ／Ｌ刺激组有更明显的降低；相同浓度的内毒素（均为２．０ｍｇ／Ｌ）刺激，有血清和不含血清组差异不明显（Ｐ＞０．０５）。结论：烫伤血清和内毒素可以影响内皮细胞中ＶＥ－钙粘附分子的表达，内毒素的影响有剂量的依赖关系，有无血清的存在对ＶＥ－钙粘附分子表达的影响差异不明显     

RNA干扰her2／neu基因表达抑制肺癌A549细胞增殖的研究

目的:HER2/neu表达对肺癌细胞生物学的影响尚不明了,文中运用RNA干扰技术抑制HER2/neu表达,并观察对肺癌A549 细胞体外增殖的影响.方法:构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体,运用脂质体介导转染A549 细胞并用G418筛选出阳性克隆株;半定量RT-PCR和Western检测转染后HER2/neu mRNA及蛋白的表达水平;FCM检测细胞周期分布; MTT法绘制细胞生长曲线观察体外细胞的增值能力.结果:成功构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体(命名为psilence 3.1-HER2),转染后使A549 细胞HER2/neu mRNA和蛋白的表达较未转染组和阴性对照质粒转染组均显著下调;细胞G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;细胞生长曲线右移、增殖速度明显减慢.结论:psilence 3.1-HER2能够稳定、高效、特异地抑制肺癌A549内her2/neu基因的表达,可显著抑制细胞增殖.针对her2/neu基因的RNAi策略有望成为肺癌的基因治疗的新选择.     

电磁场促进骨髓间充质干细胞体外诱导分化时细胞增殖

目的 观察脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMF)对5-氮胞苷(5-aza)诱导大鼠骨髓问充质干细胞(mesenehymal stem cells,MSCs)向心肌样细胞分化时细胞增殖的影响.方法 50 Hz脉冲低频电磁场刺激5-aza诱导后7 d后的MSCs,根据不同的感应强度分为A、B、C组,每组根据作用时间的不同分为4个亚组;设未暴露PEMFs的细胞为对照组.用MTT法测定细胞增殖变化,用流式细胞技术检测细胞周期.结果 0.5 mT和1 mT的感应强度下20～30 min细胞比对照组有显著性增殖,5 mT作用30～60 min以及1 mT作用60 min与对照组相比较呈显著性抑制.流式检测细胞周期显示0.5 mT和1 mT在20～30 min内可以引起细胞S G2%增高,各感应强度下作用60 min以及5 mT感应强度下作用20 min以上均引起S G2%的下降.结论 50 Hz脉冲低频电磁场0.5 mT和1 mT的感应强度下,作用20～30 min可通过引起诱导后的MSCs周期中S G2%增高而促进它的增殖.     

免疫细胞化学技术在转录因子激活研究中的应用

免疫细胞化学 (Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ,ＩＣＣ) ,或称免疫组织化学 ,其主要原理是用标记的抗体 (或抗原 )对细胞或组织内的相应抗原 (或抗体 )进行定性、定位或定量检测 ,经过组织化学的呈色反应之后 ,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。该技术在信号转导研究中具有一些其它技术所不可替代的优势现主要介绍该技术在转录因子 (Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ ,ＴＦｓ)激活研究中的应用及其特点。1　材料与方法1 1　细胞株　　人脐静脉血管内皮细胞株ＥＣＶ 3 0 4购自ＡＴＣＣ公司。加入含 10 %胎牛血清的…     

中枢神经系统感染患者的血清学分析及治疗

目的研究中枢神经系统感染患者的血清学成分及相关用药措施,以期为提高该类疾病的临床诊治提供参考。方法选取2011年1月-2012年6月入院确诊中枢神经系统感染患者78例,并选取同期入院体检的健康人员30名作为正常对照组,两组人员均签署知情同意书;观察并对比两组血清Delta-like-1(DLL1)、白介素IL-10、干扰素INF-γ的含量变化,均采用双抗体夹心ELISA法;并针对中枢神经系统感染患者临床表现对症用药,观察治疗前后患者的生活质量变化,应用SPSS13.0软件对所有数据进行统计分析。结果急性期与恢复期病毒性脑膜炎、化脓性脑膜炎患者血清IL-10、INF-γ的含量差异有统计学意义(P<0.01);结核性脑膜炎患者DLL1血清含量(24.63±6.36)ng/ml,明显高于病毒性脑膜炎的(3.42±2.61)ng/ml、化脓性脑膜炎的(2.63±2.33)ng/ml及对照组的(0.99±1.86)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.01);脑脊液检查中枢神经感染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),治疗后患者的生活质量好于治疗前(P<0.05)。结论 DLL1、IL-10、INF-γ等指标有助于中枢神经系统疾病的诊断,尤其对于结核性脑膜炎、化脓性脑膜炎以及病毒性脑膜炎;经临床对症治疗后患者的生活质量有了一定的提高。     

脑损伤中的TGF β、TNF-α和β APP细胞信号作用

在急慢性脑损伤中β淀粉前体蛋白(β amyloid precursor protein, β APP)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF β1)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)是较突出的炎性细胞因子.这些脑损伤相关因子(Injury-associated factors)通过它们的变化作用(如表达水平,功能和代谢的变化,以及可能影响细胞易感性的基因和环境因素等)对中枢神经系统(CNS)产生影响.     

CD11/CD18在烧伤早期中性粒细胞对内皮细胞粘附中的作用及变化

为了解烧伤早期病人中性粒细胞(PMN)膜表面 CD11a/CD18和 CD11b/CD18变化规律及其在烧伤早期 PMN 对内皮细胞(EC)粘附及损伤中的作用,为临床抗白细胞粘附治疗提供依据。将烧伤早期 PMN 与体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)孵育24小时后,观察烧伤早期 PMN 与 EC 粘附百分率和烧伤早期 PMN 引起内皮细胞单层流出液生成速度(Jv)和滤过系数(kf)变化,CD11/CD18单抗(mAb)对烧伤早期 PMN-EC 粘附和内皮单层 kf、Jv 值影响。并应用流式细胞术检测烧伤病人伤后1周内 PMN 膜表面 CD11a/CD18和 CD11b/CD18的数量变化。结果显示严重烧伤病人伤后第1天 PMN细胞膜表面 CD11a/CD18和 CD11b/CD18明显升高达峰值,并在1周内仍维持于高水平。烧伤早期PMN 与 EC 粘附增加并可致内皮单层 kf、Jv 值明显升高,CD11a/CD18mAb 和 CD11b/CD18mAb 可降低粘附百分率70%～80%,并降低烧伤早期 PMN 诱导增高的内皮单层 kf、Jv 值(P<0.01)。提示烧伤后 PMN 迅速表达 CD11a/CD18和 CD11b/CD18,加强与 EC 间粘附,并可使内皮单层通透性增高,CD11a/CD18mAb 和 CD11b/CD18mAb 降低烧伤早期 PMN 与 EC 粘附,减轻烧伤早期 PMN 所导致的内皮单层通透性增高,从而保护内皮细胞。     

亲属活体肾移植供者的临床评估

背景：随着活体肾移植的广泛开展,如何保证活体肾移植供者的长期存活愈发引人关注。 目的：总结79名亲属活体供肾移植的临床评估情况,评价其效果及安全性。 方法：广西中医学院附属瑞康医院移植泌尿外科在2007-06/2010-08共完成亲属活体供肾移植评估79名,回顾分析供者相关的临床资料及移植的效果。 结果与结论：经评估共有38名供者合格,所有供者手术时间1.0-2.0 h,供肾热缺血时间15 s左右,冷缺血时间1.0-2.0 h,围手术期间无外科及内科并发症发生。随访至2011年8月,所有供、受者均正常生存,移植肾功能均保持在正常范围。采用比较严格的供者评估方式是保证供者长期存活的必要手段。     

EOLA1基因小干扰RNA载体构建及其干扰效应检测

目的 构建人类新基因内皮高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)特异性的小干扰RNA表达载体,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白(GFP)-EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP-N2／EOLA1,并转染人ECV304细胞株,G418压力筛选获得稳定表达株;针对靶基因EOLA1,设计靶点特异性的寡核苷酸,插入pSlincer3．1／H1质粒。转染重组质粒到稳定表达GFP-EOLA1融合蛋白的ECV304细胞,通过观察转染细胞绿色荧光的强弱和Westem blot实验检测靶基因的抑制情况。结果 获得了稳定表达GFP-EOLA1融合蛋白的细胞株,构建的小RNA干扰质粒siEOLA1能够抑制靶基因EOLA1的表达。结论 成功构建了针对EOLA1基因的siRNA质粒,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

巩膜外加压联合不放液手术治疗孔源性视网膜脱离的疗效性及安全性研究

目的 探究巩膜外加压联合不放液手术治疗孔源性视网膜脱离的疗效性和安全性.方法 抽取2012年10月至2015年12月来本院就医的70例孔源性视网膜脱离患者作为目标对象,对70例患者进行随机对照分组.对照组35例患者应用巩膜外加压联合放液手术治疗,实验组35例患者应用巩膜外加压联合不放液手术治疗,研究对比两组患者的临床疗效、视力恢复、视网膜复位情况及并发症发生率.结果 对照组患者总有效率为91.43％,实验组患者总有效率为94.29％,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);实验组患者视力提高率显著高于对照组(85.71％比62.86％),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);对照组患者并发症发生率显著高于实验组(31.43％比8.57％),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);对照组患者视网膜复位成功率为88.57％,实验组为94.29％,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 巩膜外加压联合不放液手术治疗孔源性视网膜脱离具有较显著的疗效,可有效改善患者视力,降低患者发生并发症的机率,安全性较高.