细胞黏附分子2对非小细胞肺癌增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探究细胞黏附分子2(CADM2)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)生物学过程的潜在作用和机制.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫蛋白印迹法(Western blot)测定CADM2在人正常肺细胞系Gekko lung-1和肺癌细胞系A549和H46...     

T细胞因子3在非小细胞肺癌中的表达

目的 研究T细胞因子3 (T cell factor 3,TCF-3)在非小细胞肺癌中的表达及分布情况.方法 采用50对人非小细胞肺癌组织标本及其正常癌旁组织对照,进行免疫组化检测TCF-3蛋白在肺癌组织及正常肺组织中的表达及分布情况;采用5种人非小细胞肺癌细胞系及2种正常人支气管上皮细胞系进行实时荧光定量PCR,Western blot检测肺癌细胞系中TCF-3在mRNA和蛋白水平的表达情况.结果 (1) TCF-3在肺癌组织中表达,表达率为48％ (24/50),在正常肺组织中未见表达.TCF-3在肺癌细胞胞核与胞质同表达,以细胞核表达为主.(2) TCF-3在A549、H520、HBE、BEP-2D 4种细胞系中mRNA及蛋白水平均有表达.结论 TCF-3在肺癌组织及细胞系中均表达,TCF-3蛋白在细胞核与细胞质同表达,但以细胞核表达为主.     

COX-2、EGFR在非小细胞肺癌中的表达机制

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2))和表皮生长因子受体(EGFR)在人非小细胞肺癌组织中的表达机制。方法:应用免疫组织化学二步法检测80例非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织和25例正常肺组织中COX-2和EGFR蛋白的表达。结果:COX-2、EGFR蛋白在非小细胞肺癌中的阳性率分别为67.5%、71.3%。肺癌组织中COX-2、EGFR蛋白的阳性率与正常肺组织相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。COX-2、EGFR蛋白表达与肿瘤组织分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:COX-2和EGFR蛋白在非小细胞肺癌中呈高表达,两者可能共同促进非小细胞肺癌的发生、发展和转移。     

Pokemon基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达

目的 探讨pokemon基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达情况.方法 采用RT-PCR、Western blot检测pokemon基因在5种人非小细胞肺癌细胞系中的表达.结果 pokemon基因在肺腺癌细胞系A549和AGZY83-a、肺鳞癌细胞系HE-99、肺巨细胞癌细胞系95D中呈高表达,在肺腺癌细胞系PAa中未见表达.结论 非小细胞肺癌细胞系中存在pokemon的表达.     

EZH2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨EZH2在非小细胞肺癌细胞系及临床病理组织中的表达及意义。方法:利用RT-PCR方法及免疫组织化学染色方法,检测14株人非小细胞肺癌细胞及84例早期非小细胞肺癌病理组织中EZH2表达,并分析EZH2表达与病理组织类型和临床病理特征的相关性。结果:80%的非小细胞肺癌细胞株中EZH2mRNA较正常肺组织呈高表达;84例非小细胞肺癌组织中EZH2蛋白呈高表达者55例(占65.5%),呈不表达者29例(占34.5%);Kaplan-Meier和Log-rank分析结果显示EZH2高表达病人的中位生存期显著短于EZH2不表达病人,P值=0.027,具有统计学意义。结论:EZH2异常表达可能是促进非小细胞肺癌的发生的重要因素之一,EZH2表达可作为非小细胞肺癌预后判断的潜在分子标记物。同时开展EZH2研究可为肺癌的个体化治疗提供新的前景。     

FGF-2和TRX在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义

目的 探讨成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)和硫氧还蛋白(TRX)在非小细胞肺癌(NSCL)组织中的表达及其相关性.方法 应用免疫组织化学SP法分析76例非小细胞肺癌组织、15例非肺癌肺组织中FGF-2和TRX蛋白的表达水平.采用Westem印迹、RT-PCR方法 检测外源性FGF-2对人肺腺癌细胞株A549中TRX蛋白及mRNA表达水平的影响.结果 非小细胞肺癌组织中FGF-2和TRX阳性率分别为65.8%(50/76)和72.3%(55/76),显著高于非肺癌肺组织(P＜0.01),FGF-2和TRX阳性表达与淋巴结转移、临床分期密切相关(P＜0.01),与年龄、性别及病理分型无关(P＞0.05).两者表达在NSCLC中呈正相关(P＜0.01).FGF-2可以上调A549细胞中TRX蛋白和mRNA的表达.结论 FGF-2和TRX在非小细胞肺癌发生与发展中具有重要作用,FGF-2可能通过TRX促进肺癌的发生与发展.     

抗Fas单克隆抗体诱导人肺癌细胞系A-549细胞凋亡

目的 探讨抗Fas单克隆抗体诱导肺癌细胞凋亡的规律及在肺癌治疗中的意义.方法 应用细胞形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测抗Fas单克隆抗体对肺癌细胞A-549增殖周期的影响及对细胞杀伤作用的方式,并检测了A-549细胞表面Bcl-2的表达情况.结果 抗Fas单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用(P<0.05).经抗Fas单克隆抗体处理后,A-549细胞表面Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 抗Fas单克隆抗体可以诱导肺癌细胞系A-549细胞凋亡,抗Fas单克隆抗体诱导肺癌细胞凋亡与Bcl-2表达无关.     

EZH2 在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨 EZH2 在非小细胞肺癌细胞系及临床病理组织中的表达及意义。 方法:利用 RT-PCR 方 法及免疫组织化学染色方法,检测14 株人非小细胞肺癌细胞及84 例早期非小细胞肺癌病理组织中EZH2 表达, 并分析 EZH2 表达与病理组织类型和临床病理特征的相关性。 结果:80% 的非小细胞肺癌细胞株中 EZH2 mRNA 较正常肺组织呈高表达;84 例非小细胞肺癌组织中EZH2 蛋白呈高表达者55 例(占65. 5%),呈不表达者 29 例(占34. 5%);Kaplan-Meier 和Log-rank 分析结果显示EZH2 高表达病人的中位生存期显著短于EZH2 不表 达病人,P 值= 0. 027,具有统计学意义。 结论:EZH2 异常表达可能是促进非小细胞肺癌的发生的重要因素之 一,EZH2 表达可作为非小细胞肺癌预后判断的潜在分子标记物。 同时开展 EZH2 研究可为肺癌的个体化治疗 提供新的前景。     

分泌抗H_(615)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用抗正常615纯系小鼠肝细胞抗体处理的H615瘤细胞免疫Balb/c小鼠、取其脾细胞与小鼠骨髓细胞融合、以间接免疫荧光法和细胞ELISA二种方法检测、建立两株分泌抗H615单克隆抗体的杂交瘤细胞系。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615小鼠的肝、脾、肺、肾、心肌、横纹肌、胸腺的组织细胞和小鼠肿瘤细胞及人肝癌细胞无交叉反应,证明两种单克隆抗体具有一定的特异性。对两种单克隆抗体进行亚类检定均属IgG_1。     

抗人肺癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

以人肺癌细胞株GLC作为抗原，免疫BALB／C小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。经克隆筛选获得两株分泌抗人肺癌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株，并对其McAb特异性进行了初步鉴定。1材料和方法1.1动物和细胞系BALB／C小鼠由同济医院动物中心提供；SP2／0、SMC7721、BGC均为本室冻存细胞；GLC由中国科学院肿瘤所提供。1.2免疫过程人肺腺癌细胞系GLC培养在含20％小牛血清的RPMI1640完全培养液中，取对数生长期细胞调整细胞浓度为1×10~7细胞／ml，BALB／C小鼠腹腔注射1ml，间隔2周加强注射1次，于融合前3d每天加强免疫1…     

非小细胞肺癌中DPC4基因的表达与bcl-2级VEGF之间的关系

目的 研究DPC4(Deleted in Pancreatic Carcinoma Locus 4,DPC4)基因在非小细胞肺癌中的表达及其与凋亡抑制蛋白bcl-2及血管内皮细胞生长因子(VECF)的关系.方法 利用免疫组织化学SP法检测65例非小细胞肺癌组织和18例癌旁正常肺组织中DPC4、bcl-2和VEGF的表达.结果 DPC4在非小细胞肺癌中的阳性率为50.8%(33/65),在癌旁正常肺组织中的阳性率为77.8%(14/18),2者之间的比较有显著性差异(P＜0.05);DPC4与性别、年龄及病理类型无关(P＞0.05),但与非小细胞肺癌的分期、分级和淋巴结转移显著相关(P＜0.05);65例非小细胞肺癌中,DPC4的表达与bcl-2、VEGF均呈负相关.结论 DPC4基因的缺失可能与非小细胞肺癌的恶性进展如分期、分级及淋巴结转移有关,DPC4基因的缺失可能抑制非小细胞肺癌细胞凋亡并上调VEGF表达来促进血管的生成.     

Cox-2和HNF-3β在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨环氧化物酶-2(Cox-2)和肝细胞核因子-3β(HNF-3β)在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测Cox-2和HNF-3β在60例非小细胞肺癌和50例癌旁正常肺组织中的表达情况。结果60例非小细胞肺癌中Cox-2和HNF-3β阳性率分别为78.33%(47/60)和18.00%(9/60),50例癌旁正常肺组织Cox-2和HNF-3β阳性率分别为35.00%(21/50)和84.00%(42/50)。Cox-2在非小细胞肺癌与癌旁正常肺组织中的阳性率比较,前者明显高于后者,HNF-3β的阳性表达率反而明显低于癌旁正常肺组织,Cox-2和HNF-3β蛋白表达呈负相关(P<0.05);Cox-2高表达和HNF-3β低表达与非小细胞肺癌TNM临床分期、病理类型、有无淋巴结转移及患者生存期呈显著相关(P<0.05)。结论 Cox-2和HNF-3β在非小细胞肺癌的发生、发展过程中起了重要作用,推测Cox-2和HNF-3β蛋白表达可共同作为非小细胞肺癌早期诊断、预后评估的生物学标志物。为进一步研究非小细胞肺癌的发生发展机制,探寻新的靶向治疗途径提出指导意义。     

芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新和uPAR表达的影响

目的：研究芹菜素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新的影响及机制。方法：采用干细胞条件培养基超低黏附板悬浮培养法从体外培养NCI-H446细胞系得到球细胞。测定球形成率用以评价0(0.1% DMSO对照组),5.0,10.0,20.0 μmol/L芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新的抑制作用;Western印迹分析球细胞尿激酶型纤维蛋白酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)的表达。结果：0,5.0,10.0,20.0 μmol/L 芹菜素呈剂量依赖性抑制NCI-H446细胞系第2代球细胞的球形成率[球形成率分别为(18.2±1.9)%,(13.6±1.7)%,(10.6±1.6),(6.9±1.3)%],并呈浓度依赖性下调uPAR蛋白的表达(P<0.05)。结论：芹菜素抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新作用,可能与下调uPAR表达相关。     

三株抗人肺鳞癌单克隆抗体免疫组化分析

目的对三株抗云南个旧肺鳞癌YTMLC-90杂交瘤细胞S2D1、N2D1、N3C5所分泌的单克隆抗体进行不同组织细胞的免疫组化分析,探讨其特异性.方法用收集的原倍杂交瘤细胞上清常规ABC免疫组化法进行组织细胞学交叉检测,分析三个抗体与临床病理确诊的肺鳞癌组织、肺腺癌组织、肠癌组织、食道癌组织、肾癌组织、肺正常组织石腊切片和肺鳞癌YTMLC-90细胞系、肺腺癌GLC-82细胞系、舌鳞癌Tca-8113细胞系、鼻咽癌KB细胞系、胶质瘤U-251细胞系、膀胱癌T-24、B1u-87细胞系的交叉反应.结果杂交瘤细胞上清液与肺癌组织及肺鳞癌、肺腺癌细胞系YTMLC-90、GLC-82反应呈阳性,阳性率分别为82%、100%;与正常肺组织及肠癌组织、肾癌组织、食道癌组织及体外培养的其它各肿瘤细胞系均呈阴性反应.结论经免疫组化研究,三株单克隆抗体具有肺癌特异性,属于肺癌相关抗原的单克隆抗体.     

分泌抗H_(615)单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用抗615纯系小鼠的正常肝细胞抗体处理的H_(615)瘤细胞免疫BALB/c系小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,以间接免疫荧光法和细胞ELISA两种方法检测,建立两株分泌抗H_(615)单克隆抗体的杂交瘤细胞系8A58和12C_6。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615系小鼠的肝、脾、肺、肾、脑、心肌、横纹肌、胸腺组织细胞以及小鼠肿瘤细胞、人肝细胞性肝癌细胞均无交叉反应。证明两种单克隆抗体具有一定的特异性。两种单克隆抗体均属IgG_1。     

不同细胞系对HpD亲和力的研究

实验用人癌细胞系(食管癌Eca109、胃癌MGC80-3、肝癌QGY-7703、肺鳞癌LTEP-S、肺腺癌LTEP-a2、小细胞肺癌LTEP-SP)和人胚肺二倍体成纤维细胞系、短期培养的人胚肾二倍体细胞。5微     

Survivin、Bcl-2在I期NSCLC中的表达及其临床意义

目的 手术后I期非小细胞肺癌的预后情况与众多因素有关,凋亡相关基因在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用.本研究通过检测凋亡相关基因Survivin及Bcl-2在I期非小细胞肺癌中的表达情况,探讨其在I期非小细胞肺癌的临床意义和预后价值.方法 利用免疫组化学技术检测85例I期非小细胞肺癌(NSCLC)及20例肺良性肺组织中Survivin和Bcl-2的表达,统计分析这两者在I期非小细胞肺癌的作用.结果 85例I期非小细胞肺癌组织中Survivin和Bcl-2的表达率分别为64.7% (55/85) 和52.9%(45/85)与正常肺组织中的表达差异显著(P<0.05);多因素分析显示 PTNM分期与Survivin蛋白的阳性表达是I期非小细胞肺癌患者独立预后因素(P<0.01),Survivin、Bcl-2蛋白的表达与临床、病理各因数无相关.结论 在I期非小细胞肺癌中,凋亡相关基因Survivin及Bcl-2可能对肿瘤的发展与预后产生一定的作用与影响;PTNM分期与Survivin蛋白的阳性表达是此Ⅰ期非小细胞肺癌术后患者的独立预后因素.     

铁转运蛋白影响非小细胞肺癌增殖迁移的研究

目的 观察铁转运蛋白(FPN)在非小细胞肺癌(NSCLC)中差异表达及探讨FPN作用NSCLC细胞迁移与增殖的机制.方法 免疫组化(IHC)检测肺癌标本(60例)及正常肺组织标本(20例)FPN表达水平.蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞系中FPN表达水平.分别构建FPN过表达体系(PCDH-FPN-F)和敲低体系(shFPN),通过West-emn blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证.划痕实验检测FPN对肺癌细胞迁移的影响.生长曲线法检测FPN对肺癌细胞增殖能力的影响.结果 相比于正常肺组织,肺癌组织标本中FPN表达显著降低(P = 0.000);相比于正常肺细胞系,肺癌细胞系中FPN表达量显著降低(P＜0.000 1).与对照组比较,过表达组FPN表达量显著升高(Western blot:P＜0.01,qRT-PCR:P＜0.000 1);与对照组比较,敲低组 FPN 表达量显著降低(Western blot:P＜0.001,qRT-PCR:P＜0.001).过表达FPN后,细胞划痕间伤口愈合距离在18 h和36 h明显低于对照组;细胞数目在第2天和第4天明显低于对照组.而敲低FPN后,细胞划痕间伤口愈合距离在18 h和36 h明显高于对照组;细胞数目在第2天和第4天明显高于对照组.结论 低表达FPN后,肺癌细胞迁移及增殖能力增强,这可能是肺癌中FPN差异表达的原因.     

正常肺上皮细胞致瘤性转化中抑癌基因的全基因组筛选及数据库验证

目的 利用CRISPR/Cas9敲除文库在人正常肺上皮细胞致瘤性转化过程中进行全基因组筛选,以发现新的人肺癌抑癌基因,并利用临床非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)样本数据库进行初步验证.方法 构建稳定表达Cas9蛋白的人正常肺上皮BEAS-2B细胞系,在该细胞中感染含有77...     

RhoC及PTEN在非小细胞肺癌中的表达及临床意义的探讨

目的观察Ras同源性原癌基因C(RhoC)及张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达程度及其与临床病理学之间的关系,探索RhoC与PTEN在肺癌发生及演变过程中的作用机制及两者之间的关系,为非小细胞肺癌的发生机制提供理论基础,并为NSCLC的早期诊断提供新思路。方法 (1)试验分组:60例非小细胞肺癌标本及40例正常对照肺组织。(2)采用免疫组织化学方法检测RhoC及PTEN表达情况及其与临床病理学之间的关系。结果 60例NSCLC组织中,RhoC蛋白阳性表达率分别为68.33%(41/60),显著高于正常肺组织,RhoC在NSCLC组织中阳性表达率与吸烟史、年龄及组织学类型无关,而与癌组织的分化程度、临床分期密切相关。PTEN在非小细胞肺癌组织中的阳性率为36.70%,显著低于非肺癌组织的阳性率80.00%(P0.01);PTEN的表达与肺癌患者的细胞分化程度、TNM分期、肿瘤直径相关。RhoC和PTEN两者表达强度之间呈显著负相关(P0.01)。结论 (1)在非小细胞肺癌组织中RhoC的高表达与PTEN的低表达密切相关,可能参与了NSCLC的演进。(2)PTEN基因蛋白表达缺失在不同类型和不同分化程度的非小细胞肺癌发生、发展中存在重要意义,可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的参考指标。