PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性

目的 为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法 构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒；转染HeLa细胞，荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeLa细胞内分布的差异；用MTT法检测．PAI-2入核突变体抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡的活性。结果 在核定位序列的引导下，几乎所有的PAI-2都进入了细胞核，而野生型PAI-2则弥散分布于HeLa细胞内。MTT法检测发现，当PAI-2被定位于细胞核内时，丧失其抗凋亡的功能。结论 PAI-2在细胞内的定位能影响其抗凋亡的活性，并且当用TNF-α诱导HeLa细胞凋亡时，野生型PAI-2在细胞内的分布没有发生明显的改变。     

小鼠表皮角质形成细胞中TNF-α对PAI-2表达的调节

目的 探讨表皮角质形成细胞中TNF-α对PAI-2表达的调节及其生物学意义。方法 利用免疫细胞化学、TUNEL反应及免疫细胞化学／TUNEL双标等方法，观察TNF-α作用下，培养的表皮角质形成细胞及其脱落细胞中PAI-2表达的变化及凋亡发生的情况。结果 在TNF-α作用下，脱落细胞中PAI-2的表达明显增加，凋亡细胞的数量增多，PAI-2在凋亡细胞中的表达也增强，而在一些胞体较大、形态呈多角形的凋亡细胞中PAI-2表达的增加更为明显。结论 在高度分化的表皮角质形成细胞中，TNF-α可促进PAI-2的表达并可诱导凋亡的产生，就与KC凋亡的关系而言，TNF-α所诱导的。PAI-2可分为两种，一种与KC凋亡有关，另一种与KC凋亡无关。     

干扰素α抑制NF-κB活化增强TNF-α诱导的Hela细胞凋亡

目的探讨干扰素α(IFN-α)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及TNF-α诱导核转录因子NF-κB活化的影响。方法细胞分为空白对照组(不加TNF-α),实验组(加TNF-α)、实验组终浓度分别为(5,10,15ng/ml),作用不同时间分为6,12,24 h,与干扰素α(终浓度100IU/ml)共培养2 h,再加入终度与上述相同的TNF-α继续培养3 h,应用免疫组化,免疫印迹方法检测NF-κB活性的变化,采用Tunel法检测细胞凋亡。结果TNF-α诱导Hela细胞凋亡与其诱导NF-κB活化明显相关,100 IU/ml的IFN-α能显著增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡和抑制TNF-α诱导的Hela中NF-κB的活化。细胞凋亡增加率为69.2%(P<0.05),NF-κB活化抑制率为48.0%(P<0.05)。结论TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时激活NF-κB;IFN-α可通过抑制NF-κB活化,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

非诺贝特对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞CD40表达和基质金属蛋白酶活性的抑制作用

目的研究非诺贝特对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40表达和基质金属蛋白酶(MMP)活性的作用。方法应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测非诺贝特对TNF-α诱导的HUVECs的CD40mRNA和细胞表面CD40表达的影响;用明胶酶谱法测定TNF-α对HUVECs的MMP-2、MMP-9活性的影响以及非诺贝特对它们的作用。结果非诺贝特在5×10-5,1×10-4和2×10-4mol/L的浓度范围内能显著降低CD40mRNA和细胞表面CD40的表达(P<0.01),以1×10-4mol/L的非诺贝特的效果最为明显;浓度为2×10-4mol/L时,非诺贝特并没有进一步降低CD40mRNA和细胞表面CD40的表达。非诺贝特能抑制TNF-α诱导的HUVECs中MMP-2和MMP-9活性的增加。结论非诺贝特能降低TNF-α诱导的HUVECs的CD40表达,并且能抑制TNF-α诱导的HUVECs中MMP-2和MMP-9活性的增加。     

α干扰素对TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及NF-κB表达的研究

目的:探讨应用α干扰素与宫颈癌细胞核因子κB(NF-κB)表达的关系以及对肿瘤细胞凋亡的影响.方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot分析方法检测NF-κB表达.结果:100 U/ml的α干扰素与10 ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合作用24 h后,细胞凋亡率达到92%;与15 ng/ml TNF-α联合作用12 h后,凋亡率上升至92.6%.α干扰素不影响NF-κB的表达,TNF-α可显著增加NF-κB的表达(P＜0.01),α干扰素预先作用后加用TNF-α可以显著抑制NF-κB的表达(P＜0.01).结论:α干扰素能够显著抑制TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞NF-κB的表达,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用.     

银杏叶提取物对rhTNF-α诱导HeLa细胞凋亡和Caspase-8活性的影响

目的研究银杏叶提取物EGb761对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导HeLa细胞凋亡和Caspase-8活性的影响。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡，Caspase-8荧光检测试剂盒测定Caspase-8活性。结果EGb761在10～40mg／L终浓度范围内对rhTNF-α诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用（P〈0．01），呈剂量依赖关系；EGb761在10～40mg／L终浓度范围内对rhTNF-α诱导的HeLa细胞Caspase-8活化均有显著的抑制作用（P〈0．01），呈剂量依赖关系。结论结果提示，EGb761抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡可能与其抑制Caspase-8活化有关。     

尼美舒利对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作斥及其机制研究

目的探讨尼美舒利体外抗宫颈癌的活性及相关机制。方法采用体外培养的Hela细胞株为研究对象,MTT法检测尼美舒利对Hela细胞的抑制率．倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变,Westernblot检测细胞凋亡关键蛋-环氧化酶-2（COX-2）、Caspase-3的表达变化。结果尼美舒利可显著抑制Hela细胞增殖,形态学观察发现尼美舒利可诱导肿瘤细胞凋亡;尼美舒利还可抑制Hela肿瘤细胞COX-2表达,引发Caspase-3促凋亡蛋白Caspase-3高表达。结论尼美舒利具有明确的抑制宫颈癌细胞的作用,其机制之一可能是通过抑制COX-2引发肿瘤细胞的凋亡。     

AP-2α对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用研究

目的探讨核转录因子激活蛋白2α（AP-2α）对A549细胞环氧合酶2（COX-2）表达的作用。方法将AP-2仅腺病毒载体转染入A549细胞，观察AP-2仅对A549细胞COX-2表达及白介素1β（IL-1β）诱导A549细胞COX-2表达的影响。将AP-2突变质粒载体转染入A549细胞，观察AP-2突变体对IL-1β诱导A549细胞COX-2表达的影响。用Western印迹检测COX-2蛋白的表达。结果AP-2仅增加A549细胞COX-2表达及IL一1β诱导的A549细胞COX-2表达。AP-2突变体降低IL-1β诱导的A549细胞COX-2表达。结论AP-2仅上调A549细胞COX-2的表达。     

IL-1α诱导骨髓来源神经细胞表达神经递质的实验研究

目的 探讨IL-1α体外诱导骨髓来源神经细胞表达神经递质的可行性。方法 分离培养骨髓间充质干细胞，鉴定其表面抗原，用含30μM维甲酸的条件培养基诱导，诱导后细胞进行神经细胞特征性染色鉴定；用含25ng／ml IL-1α的培养基作用于诱导后的细胞，免疫组织化学染色鉴定神经递质的表达。结果 骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CDl05阳性，CD34、CD45、CD106阴性。诱导后细胞形态明显改变，MAP．2以及GFAP染色结果阳性，IL-1α作用后突触素染色阳性。结论 IL-1α具有促进骨髓来源神经细胞表达神经递质的能力，骨髓来源神经细胞具有产生突触联系的功能。     

人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响

目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用;CCK-8(cell counting kit-8)检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:Hela细胞表面有Trop-2蛋白表达,人源抗Trop-2 Fab能够抑制Hela细胞的增殖,有效降低Hela细胞的迁移和侵袭能力,同时能够诱导Hela细胞凋亡。结论:人源抗Trop-2 Fab能明显降低宫颈癌细胞的恶性生物学行为,Trop-2可作为宫颈癌治疗的潜在靶点。     

HSV-1早早期蛋白0对巨噬细胞凋亡及分泌活性的影响

目的研究人单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）早早期蛋白0（ICP0）对巨噬细胞（MΦ）凋亡及分泌活性的影响,为进一步研究ICP0蛋白在HSV-1致病机制中的作用奠定实验基础。方法将真核表达载体PT7-110转染MΦ,以抗ICP0抗体为一抗作Western blot检测其表达。在转染48 h后以ELISA法分析各组培养基中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）产生水平,并收集MΦ经流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。结果 ICP0能够刺激MΦ产生TNF-α和IL-6,且能诱导MΦ发生凋亡。结论 HSV-1 ICP0高表达可诱导MΦ发生凋亡并上调其分泌细胞因子TNF-α和IL-6。     

DFMG对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L相互作用的影响

目的:观察7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)损伤模型的保护作用,探讨其保护作用的发挥是否与抑制CD40/CD40L相互作用相关。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12),20ng/mL TNF-α孵育诱导细胞损伤模型;加入不同浓度的DFMG,台盼蓝拒染法检测细胞活力、AnnexinⅤ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡、流式细胞仪检测CD40/CD40L的表达。结果:DFMG呈浓度依赖性的升高TNF-α诱导的HUVEC-12细胞存活率;DFMG呈浓度依赖性的降低TNF-α诱导的HUVEC-12细胞凋亡;DFMG呈浓度依赖性降低CD40/CD40L表达。结论:DFMG保护TNF-α诱导的HUVEC-12细胞损伤,这种保护作用可能是通过抑制CD40/CD40L的表达发挥作用的。     

siRNA干扰MeCP2基因对宫颈癌Hela细胞的生物学影响

目的研究甲基化Cp G结合蛋白2(Me CP2)对宫颈癌Hela细胞的生物学影响以及其分子机制。方法应用si RNA干扰Me CP2表达;MTT比色法分析Me CP2对宫颈癌Hela细胞增殖活力的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blotting观察Me CP2 si RNA对Cyclin D1、P-ERK1/2和P-p38表达的影响。结果 Me CP2 si RNA组与阴性对照组相比,Me CP2在m RNA和蛋白水平的表达均显著下调;Me CP2 si RNA抑制宫颈癌Hela细胞增殖;S和G2/M期细胞数量显著减少,G1/G0期细胞数量显著增加;Me CP2 si RNA组早期凋亡和晚期凋亡显著增加;Cyclin D1和P-ERK1/2表达显著下调;P-p38表达显著上调,均P<0.01。结论 Me CP2通过调控P-ERK1/2和Cyclin D1的表达促进宫颈癌Hela细胞增殖,经过抑制p38 MAPK信号通路抑制了细胞凋亡。     

阻断PLC-γ1通路对TNF-α抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡的影响

目的 探讨磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用PLC-γ1的特异性抑制剂U73122抑制SW0胶质瘤细胞PLC-γ1活性,用MTT法观察在阻断PLC-γ1通路前后,TNF-α对SWO胶质瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测TNF-α诱导SWO胶质瘤细胞凋亡的情况;Western免疫印记法检测TNF-α是否激活caspase-3以及抑凋亡蛋白bcl-2表达的情况。结果 抑制PLC-γ1活性后,SWO胶质瘤细胞对低浓度TNF-α的敏感性显著增加。结论 阻断PLC-γ1通路本身虽不能直接启动凋亡,但却能增加SW0胶质瘤细胞对某些调亡因素（如TNF-α）的敏感性,其分子机制之一可能是下调抑凋亡基因bcl-2的表达。     

蛇床子素对宫颈癌Hela细胞凋亡的作用研究

目的 探讨蛇床子素对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 经不同浓度蛇床子素处理体外培养的宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,半定量RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果 与对照组比较,不同浓度的蛇床子素均可明显抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、诱导细胞凋亡,增高细胞内ROS水平,降低Bcl-2/Bax的表达比例,且具有一定的剂量依赖性.结论 蛇床子素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并促进细胞凋亡,与升高细胞ROS水平、促进激活促凋亡因子Bax的表达和抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达有关.     

miRNA375增加人口腔鳞癌细胞Cal27对肿瘤坏死因子杀伤作用的敏感性引起肿瘤细胞凋亡性死亡

目的：探讨microRNA-375 (miR-375)对肿瘤坏死因子(TNF-α)杀伤人口腔鳞癌细胞生物效应的影响。方法：将人口腔鳞癌细胞Cal27用miR-375模拟物转染后用TNF-α治疗,采用MTT法检测治疗后Cal27细胞的增殖情况；通过流式细胞术检测Cal27细胞治疗后的凋亡情况; 通过流式细胞术检测Cal27细胞内DNA的含量, 测定凋亡特征性subG1期的细胞比值； 定量PCR法检测Cal27细胞治疗后抗凋亡蛋白Bcl-2, Bcl-xl, cIAP2, cFLIPL的表达。结果： miR-375联合TNF-α可显著抑制Cal27细胞的增殖并诱导其发生凋亡。miR-375联合TNF-α处理后Cal27细胞cIAP2, cFLIPL表达显著下降, Bcl-2, Bcl-xl表达不变。结论： miR-375降低cIAP2, cFLIPL的表达提高人口腔鳞癌Cal27细胞对TNF-α的敏感性并引起凋亡性死亡。     

白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞生长抑制及诱导凋亡的作用机制。方法:以不同浓度白藜芦醇处理Hela细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、Caspase-9的表达。结果:经白藜芦醇处理的Hela细胞,增殖作用呈明显时效和量效关系,细胞凋亡率明显增高并呈浓度依赖性;Bcl-2、Bax、Bad表达下降,Caspase-9表达增加。结论:白藜芦醇对Hela细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制与下调Bcl-2、Bax、Bad蛋白、上调Caspase-9蛋白表达有关。     

银杏叶提取物抗肿瘤坏死因子-α诱导的人肾小管上皮细胞凋亡及机制

目的 研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)抵抗肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人肾小管上皮细胞凋亡及其作用机制.方法 将人肾小管上皮细胞分成4组:对照组,TNF-α组,EGB TNF-α组,EGB组,各组细胞培养至80%～90%汇合时加入相应药物干预. 采用MTT法检测TNF-α对细胞的毒性作用, 通过细胞形态学检测(AO/EB染色)和流式细胞仪计数测定细胞凋亡发生情况,Western blot法测定细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 TNF-α对人肾小管上皮细胞的毒性作用呈剂量和时间依赖性;TNF-α(10 μg/ml)可显著诱导人肾小管上皮细胞凋亡,而EGB(50 mg/ml)可明显抑制它的作用, 同时Western blot测定显示EGB可显著上调Bcl-2的表达而下调Bax的表达.结论 EGB可以显著抑制TNF-α诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,此作用可能与其上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和下调促凋亡蛋白Bax的表达有关.     

核因子—kB在TNF—α诱导HL—60细胞凋亡中的作用

目的 了解白血病细胞系HL-60中，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的核因子-kB(NF-kB）活化与细胞凋亡之间的关系。方法 采用脂质体基在转染技术，将突变的核因子抑制蛋白（IkBα）质粒（PCMV4-1kBαS32//36∧）转染HL-60细胞，于48后测其瞬时表达效应。用间接免疫荧光和Western blot技术检测转染组和诱导及生长抑制效应。结果 TNF-α可诱导非转染组HL-60细胞的NF-kB活化，不能诱导转染组细胞的NF-kB活化，即突变型IkBα可特异性抑制HL-60细胞的NF-kB活化。结论 用突变型IkBα特异性抑制HL-60细胞的NF-kB活化，能明显增加其对TNF-α的敏感性。     

白芍总苷对TNF-α诱导Caco-2炎性细胞模型的作用机制

目的 研究白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)诱导的人结肠上皮Caco-2炎性细胞自噬和凋亡水平的影响,并探究其保护机制。方法 将对数生长期的Caco-2细胞分为对照组、模型组和给药组。其中对照组细胞常规培养,模型组和给药组细胞TNF-α 100ng/ml刺激48h建立炎性细胞模型;给药组细胞使用不同浓度TGP培养,对照组和模型组细胞使用等量完全培养基培养;用噻唑蓝(MTT) 法检测细胞增殖情况;利用酶联免疫吸附试验检测各组中白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和白介素6(interleukin 6,IL-6)蛋白质水平表达变化;采用Western blot法检测程序性死亡受体1(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、Bcl-2蛋白的表达。结果 TGP对Caco-2 炎性细胞模型的增殖具有抑制作用,与正常组比较,TNF-α诱导的Caco-2炎性细胞中IL-1β、IL-6的表达明显增高(P<0.05);与模型组比较,TGP能够下调IL-1β、IL-6的表达水平,Beclin-1、LC3B的表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGP能够下调IL-1β、IL-6的表达水平,抑制Beclin-1、LC3B蛋白表达水平,上调抗凋亡基因 Bcl-2 表达,TGP对TNF-α诱导Caco-2炎性细胞模型的治疗作用与抑制炎症及调节肠上皮细胞自噬有关。