地塞米松引起小鼠胸腺内细胞凋亡的半薄切片观察

目的：获取地塞米松引起小鼠胸腺细胞凋亡的时间变化曲线。方法：雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔内注射地塞米松，油镜下观察甲苯胺蓝染色的半薄切片，计数１００ｍｍ２内细胞总数及凋亡细胞（Ａｃ）数和凋亡小体（Ａｂ）数及Ａｃ、Ａｂ百分率。结果：胸腺皮质与髓质形成Ａｃ、Ａｂ的高峰时相为１５ｈ。在皮质，１～１５ｈ为凋亡上升期，１５～１９ｈ为凋亡高峰平台期，１９～３０ｈ为凋亡下降期；在髓质，１～１５ｈ为凋亡上升期，１５ｈ为凋亡高峰期，１５～３０ｈ为凋亡下降期。结论：这一时间变化曲线为深入探讨胸腺的细胞凋亡提供数值变化资料。     

大鼠癫癎持续状态后海马神经元凋亡的研究

目的：通过美解眠诱导鼠癫癎持续状态后观察海马神经元的细胞凋亡现象。　材料和方法：给ＳＤ大鼠腹腔注射美解眠（２０ ｍ ｇ／ｋｇ）,２４ ｈ 后在光镜和电镜下观察大鼠海马神经元的形态学改变,并以ＤＮＡ 末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测海马神经元的凋亡。　结果：ＳＤ大鼠注射美解眠后出现典型的癫癎发作,光镜和电镜下可观察到海马神经元有典型的细胞凋亡现象,包括细胞体皱缩、胞质浓缩、染色质凝聚成块状、有边集现象, 同时有少量凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ检测发现海马结构内可见ＴＵＮＥＬ染色阳性细胞,其分布不均匀,有区域性差异,以ＣＡ３ 区最为多见。致癎组海马ＣＡ３ 区ＴＵＮＥＬ阳性细胞数的平均百分率（７５．１４％ ）与对照组（９．４％ ）相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。　结论：癫癎发作可诱导大鼠海马神经元发生凋亡。     

γ—射线诱导HL—60细胞凋亡的观察

目的 观察γ－射线诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的时间和剂量效应,以探求辐射诱发肿瘤细胞凋亡分子机制。方法 分别以２．５、５、７．５、１０、１５Ｇｙ γ－射线照射ＨＬ－６０细胞,于照后继续培养３、６、９、１２、２４、２７、３０ｈ,分别收获细胞。电泳检测ＤＮＡ梯状带;流式细胞术（ＦＣＭ）细胞凋亡定量并观察细胞周期变化;Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８－ＰＩ复染荧光显微镜计数凋亡细胞及已死亡细胞百分率。结果 ＨＬ－     

人胚肺二倍体细胞KMB17凋亡的形态学发生

无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法,具有简便、快速的特点。用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞（ＫＭＢ１７）在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程。结果：无血清诱导后１ｈ,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态;３ｈ后,少数细胞（１％～５％）出现圆缩;６ｈ后,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形,体积缩小。荧光及电镜下可将细胞凋亡形态上分为两个阶段,第一阶段细胞出现     

维甲酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察维甲酸（ＲＡ）在体外诱导ＨＬ６０细胞（人早幼粒细胞白血病细胞株）凋亡的作用,探讨维甲酸治疗早幼粒细胞白血病的作用机制。方法：用ＤＮＡ电泳、ＤＮＡ片段定量测定技术、流式细胞术分析及光镜和电镜观察凋亡细胞。结果：在体外培养中加维甲酸５０ｍｇ／Ｌ孵育４ｈ,ＤＮＡ片段率达５５７％±１２１％,而对照为１２５％±４９％（Ｐ＜０００１,ｎ＝９）;流式细胞术检测发现,在５０ｍｇ／Ｌ维甲酸作用下,细胞凋亡达５０％,对照为９％。电镜观察维甲酸组ＨＬ６０细胞出现典型的凋亡细胞形态改变。维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡具有剂量及时间依赖性,维甲酸作用６ｈ,出现凋亡高峰;随维甲酸浓度升高,诱导凋亡作用明显增强。在环孢素Ａ（ＣｓＡ）存在时,低浓度的维甲酸也有明显诱导ＨＬ６０细胞凋亡作用。结论：维甲酸在体外能诱导ＨＬ６０细胞凋亡,ＣｓＡ能增强维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡活性。研究提示诱导白血病细胞凋亡是维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的重要机制之一。     

地塞米松引起小鼠胸腺内细胞凋亡的半薄切片观察

获取地塞米松引起小鼠胸腺细胞凋亡的时间变化曲线。方法；雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔内注射地塞米松，油镜下观察甲苯胺蓝染色的半薄切片，计数１００ｍｍ＾２内细胞总数及凋亡细胞数和凋亡小体数及Ａｃ，Ａｂ百分率。结果；胸腺皮质与髓质形成Ａｃ，Ａｂ的高峰时相１５ｈ。     

地塞米松对小鼠免疫系统的抑制作用

目的研究地塞米松对小鼠免疫系统的抑制作用。方法取7—8周龄昆明种小鼠,腹腔注射地塞米松,分别于注射后5、10、15、24和36h时间点取胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结;对照组小鼠腹腔注射生理盐水（即0h组）,HE染色。结果地塞米松组胸腺中凋亡细胞和凋亡小体数量多于对照组;脾脏和淋巴结内亦见凋亡细胞,但较胸腺内少;15h时间点凋亡细胞最多。结论地塞米松可引起胸腺、脾脏和淋巴结细胞的凋亡,对免疫系统有明显的抑制作用。     

缺血再灌注后脑细胞凋亡率的测定

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑细胞凋亡率的时程变化。方法：插线法制备大 鼠大脑中动脉梗塞再灌注（ＭＣＡＯ／Ｒ）模型,用流式细胞仪检测缺血２ｈ再灌注６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ 的凋亡率。结果：缺血再灌注４８ｈ内,随再灌注时间的增加,脑细胞凋亡率逐渐升高,以再灌注４８ｈ凋 亡率最高（１３．１０％± １．３７％）,明显高于再灌注６ｈ（３．３８％±０．７６％）, １２ｈ（６．９８％± １．６３％）,与再灌 注 ２４ｈ（１１,６８％±１.４４％）无明显差别;灌注 ７２ｈ（１０．２０％±２．３０％）明显降低。结论：ＭＣＡＯ２ｈ再灌 注后,脑细胞凋亡的出现是一个动态过程,初期升高,２４ｈ～４８ｈ达到高峰,然后缓慢下降。     

HepG2和HepG2.2.15细胞对一些凋亡刺激的不同耐受性

目的阐明ＨＢＶ对感染细胞凋亡的影响。方法在ＨｅｐＧ２及其转染ＨＢＶ的２．２．１５细胞培养中，加ＭＴＶ、ＡｃｔＤ或去血清培养，以ＦＣＭ检测细胞凋亡率。结果ＨｅＧ２．２．２．１５细胞加ＭＴＸ后２４ｈ和４８ｈ凋亡率分别为１０．８％和１３．３％，加ＡｃｔＤ后分别为１６．８％和３７．７％，去血清后第４天及第６天分别为１３．２％和１４．８％：而ＨｅｐＧ２细胞加ＭＴＸ后２４ｈ和４８ｈ凋亡率则为１２．６％和６５．３％，加ＡｃｔＤ后分别为４４．５％和８９．７％，去血清后第４天和第６天凋亡率为１９．８％和２８．８％。确认在这些条件下ＨｅｐＧ２．２．１５细胞较ＨｅｐＧ２细胞耐受凋亡。结论ＨＢＶ可能抑制肝癌细胞凋亡。     

心胸腺联合移植结合胸腺内注射供体胸腺细胞诱导大鼠同种异体心脏移植免疫耐受

目的：研究供体胸腺细胞经胸腺注射对大鼠心脏及胸腺移植的影响。方法：将SD大鼠的胸腺细胞注入Wistar大鼠胸腺内,2周后行心脏及心胸腺联合移植（SD→Wistar）,观察移植心存活时间和病理排斥反应,检测血中及移植心中IL-2及IL-4水平。结果：单纯心脏移植及心胸腺联合移植在环孢素短期（7d及14d）应用下,可延长移植心及胸腺的存活时间,但不能诱导耐受;经胸腺注射供体胸腺细胞后,行单纯心脏移植及心胸腺联合移植,在短期环孢素作用下,移植心及胸腺均获长期存活;在移植物长期存活组IL-4保持较高水平,而IL-2处于较低水平。结论：经胸腺注射胸腺细胞可以诱导对同种异体心脏及胸腺的耐受;胸腺移植有利于耐受的诱导和维持。     

前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用

目的 研究前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用. 方法体外培养BALB/c小鼠胸腺细胞,终浓度1 μmol/L地塞米松诱导细胞,透射电镜、AnnexinV/PI双染流式细胞术、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR半定量法分析1 μmol/L地塞米松作用不同时间以及不同浓度地塞米松作用1 h小鼠胸腺细胞Bim mRNA表达. 结果①1 μmol/L地塞米松作用4 h小鼠胸腺细胞出现特征性DNA梯状条带和细胞凋亡典型形态特征,流式细胞术检测显示在不同时间点(2 h,4 h,8 h)实验组细胞凋亡率较对照高;②1 μmol/L地塞米松作用1/2 h后小鼠胸腺细胞Bim mRNA三个异构体表达即明显升高,以BimL最为明显,其中BimL、BimEL mRNA表达在1 h达高峰,较对照组高峰前移11 h,且各时间点(0 h、24 h除外)表达水平与同时点对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);BimS mRNA表达高峰较对照组提前4 h,但各时间点表达水平与同时点对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);③不同浓度(0,10-2,10-1,1,10 μmol/L)地塞米松作用胸腺细胞1 h时,其活细胞率和凋亡细胞百分率在不同浓度组间的差异无统计学意义,而Bim mRNA表达随地塞米松终浓度增加而升高,也以BimL mRNA表达增高最明显. 结论 Bim参与了地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程,Bim三个异构体中以BimL作用为主;Bim mRNA表达发生在细胞凋亡早期,其表达水平随作用时间变化,并在一定地塞米松浓度范围内呈剂量依赖性.     

单核细胞增多型李氏忒菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

以流式细胞仪 (FCM)分析 ,DNA琼脂糖凝胶电泳分析及细胞形态学改变为指标 ,研究单核细胞增多型李氏忒菌 (LM)感染对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用。结果发现 ,LM能诱导小鼠胸腺细胞产生典型的细胞凋亡形态学改变 ;FCM分析显示特征性的凋亡峰 ;琼脂糖凝胶电泳分析显示胸腺细胞出现典型的DNA“梯状带” ;胸腺细胞凋亡于LM(5× 10 5CFU)感染后 8h出现 ,48h达高峰 ;胸腺萎缩于LM感染后 16h出现 ,48h达最低水平 ;胸腺细胞凋亡百分率随LM感染剂量增加而增高。提示 ,LM以时间和剂量依赖方式诱导小鼠胸腺细胞凋亡。     

单核细胞增多型李氏忒菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

The murine thymocyte apoptosis induced by Listeria monocytogenes(LM) was detected with morphology, FCM, and DNA electrophoresis. The results were that LM elicited typical morphological changes of thymocyte apoptosis; the typical apoptosis peak was displayed with FCM, and typical "ladder pattern" with agarose gel electrophoresis. The apoptotic cells were found at 8 h after the mice had infected LM and reached climax at 48 h. The thymus weight significantly reduced at 16 h, and reached the lowest at 48 h after the mice had infected LM. The percentage of apoptotic cells was raised with the increasing of LM. These results suggest that LM induces thymocyte apoptosis in dose- and time-dependent manner.     

七味白术散对人轮状病毒感染乳鼠胸腺细胞的程序性死亡和IL-2、IL-2R表达的影响

观察七味白术散对人轮状病毒（HRV）感染乳鼠胸腺细胞的程序性死亡和IL－2、IL－2R表达的影响。NIH乳鼠经口感染HRV建立感染模型,采用DNA凝胶电泳、细胞形态学、ELISA方法观察处理对HRV感染乳鼠胸腺细胞凋亡以及IL－2、IL－2R表达的影响。七味白术散100g/L可明显抑制乳鼠胸腺细胞,药物干预10h未出现明显的细胞凋亡梯带,处理各组胸腺细胞24h均可见典型凋亡形态和DNA梯状带,而新鲜的胸腺细胞则无。七味白术散治疗组乳鼠血清中IL－2、IL－2R表达上调。七味白术散能延缓HRV感染乳鼠胸腺细胞凋亡,促进IL－2、IL－2R的表达,显示出七味白术散一种新的免疫调节效应。     

Detection of apoptosis with gel eletrophoresis combined with computerized gel analysis system]

OBJECTIVE: To explore a new method for detecting cellular apoptosis. METHODS: Using routine electrophoresis assisted by computerized gel documentation analysis system(GDAS), apoptosis of the macrophages treated with dexamethasone was qualitatively and then quantitatively detected. RESULTS: Apoptosis occurred in the macrophages treated with dexamethasone, and DNA fragmentation of the apoptotic macrophages was visualized on 1% agarose gel electrophoresis. The apoptosis rates as determined by computerized GDAS were consistent with the results obtained from flow cytometry that showed typical apoptosis peak. CONCLUSION: Agarose gel electrophoresis assisted by computerized GDAS was relatively simple and less costly in qualitative and quantitative detection of apoptosis with precision.     

骨膦脂质体诱导巨噬细胞凋亡的实验研究

目的:利用薄膜法制备的骨膦脂质体诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡.方法:利用骨膦脂质体体外诱导不同时间阶段的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡,然后利用DNA琼脂糖凝胶电泳检测.结果: 经1.2%琼脂糖凝胶电泳显示,骨膦脂质体诱导腹腔巨噬细胞,3 h即有梯状带,但不甚明显;12 h梯状带比较明显;24 h出现清晰的特征性梯状带.结论:骨膦脂质体能够诱导腹腔巨噬细胞凋亡.     

姜黄素类化合物的抗肿瘤活性

目的：研究姜黄素类化合物诱导HeLa细胞凋亡及其构效关系。方法：MTT法、Hoechst染色法、DNA凝胶电泳法。结果：姜黄素类化合物可抑制HeLa细胞的生长，诱导HeLa细胞凋亡；琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA带状泳道。结论：姜黄素类化合物可明显地诱导HeLa细胞凋亡，且与其结构有密切关系。     

抗DR5单克隆抗体对NCL-H446的致凋亡作用

目的:探讨抗DR5单克隆抗体(mDRA-6)对小细胞肺癌NCL-H446的凋亡作用。方法:NCL-H446细胞常规培养24 h后分为对照组、抗DR5单克隆抗体(mDRA-6)及mDRA-6+顺铂处理组。以细胞形态学改变、流式细胞仪和DNA凝胶电泳分析为凋亡观察指标。结果:经mDRA-6处理的NCL-H446细胞出现核固缩、染色质边缘化和凋亡小体形成;琼脂糖凝胶电泳呈现细胞凋亡特征性DNA梯状带;细胞凋亡发生率与抗DR5单克隆抗体(mDRA-6)剂量及细胞表面DR5的表达呈相关性。结论:mDRA-6对小细胞肺癌NCL-H446的杀伤作用主要通过诱导凋亡实现的,细胞表面DR5受体表达上调可促进凋亡作用。     

小鼠胸腺组织细胞凋亡DNA电泳特征的观察

为了观察细胞凋亡后细胞基因组的特征性变化及其特点，应用地塞米松制备了在体小鼠胸腺组织细胞凋亡的模型，结果显示细胞ＤＮＡ经电泳后出现典型的梯形条带，尤以在地塞米松诱导６ｈ最为典型，且结果稳定，个体差异小。     

化癥胶囊方剂诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的：明确化癥胶囊方剂对前列腺癌细胞PC-3的诱导凋亡作用。方法：PC-3细胞与适宜浓度化癥胶囊方剂共同孵育于1640培养液中,采用一系列细胞凋亡定性、定量检测方法研究化癥胶囊方剂诱导的PC-3细胞凋亡,如行DNA凝胶电泳、流式细胞仪DNA含量分析以检测凋亡。结果：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞发生凋亡特征性的生化改变,如DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析显示,化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞染色体DNA片段化,形成凋亡特征性的“DNA梯状(DNA ladder)”电泳图谱;流式细胞仪检测可见有低G1期细胞出现。在试验范围内凋亡比率与药物浓度呈一定相关。结论：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞凋亡,其作用与药物浓度呈一定相关性。