维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯对宝藿苷Ⅰ抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的考察非离子表面活性剂维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)对宝藿苷I抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法 MTT法测定宝藿苷I对MCF-7的细胞毒性,用荧光显微镜观察宝藿苷I的细胞摄取,并采用HPLC法测定细胞内的宝藿苷I的量。结果在应用TPGS后,宝藿苷I对MCF-7增殖的抑制作用增强,在宝藿苷I低浓度的情况下作用更显著;当宝藿苷I与TPGS质量比分别为1∶1、1∶2、1∶4时,在MCF-7细胞培养2 h的摄取率分别为29.51%、38.12%、40.37%,与仅用宝藿苷I相比分别提高了27.92%、65.24%、74.99%。结论 TPGS能够增加MCF-7对宝藿苷I的细胞摄取,并增强其对MCF-7的细胞毒作用。     

维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯对Caco-2细胞模型转运宝藿苷Ⅰ的影响

目的 考察非离子表面活性剂维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)对宝藿苷Ⅰ在Caco-2细胞模型转运的影响.方法 采用Caco-2细胞模型研究不同浓度的TPGS对宝藿苷Ⅰ细胞转运行为的影响,以超高压液相色谱(UPLC)法测定细胞样品溶液中宝藿苷Ⅰ的浓度,计算表观渗透系数(Papp).结果 在应用TPGS后,宝藿苷Ⅰ从细胞绒毛面供给侧(AP)→基底面外侧(BL)的跨膜转运量明显增高(P＜0.05),外排比率显著下降(P＜0.05).当宝藿苷Ⅰ与TPGS比例分别为1:1、1:3、1:9时,宝藿苷Ⅰ的外排比率分别为1.978 8、1.779 8、1.609 0,与仅用宝藿苷Ⅰ相比分别下降了73％、76％、78％.结论 在Caco-2细胞模型上,TPGS可显著促进宝藿苷Ⅰ的吸收.     

淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样作用研究

目的:用雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)表达阳性细胞株人乳腺癌细胞MCF-7检测淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样活性[1]及构效关系。方法:用MTT法,增殖细胞核抗原(Proliferating CellNuclear Antigen,PCNA)免疫组化法检测其对体外培养MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响;Real-timeRT-PCR法检测ERα、ERβ和PS2 mRNA表达水平变化。结果:淫羊藿素促进MCF-7增殖,而淫羊藿苷、淫羊藿次苷I和脱水淫羊藿素促增殖效应不明显;淫羊藿素10-9mol.L-1组PCNA阳性表达强于其它三组;淫羊藿素极显著增加ERα和PS2 mRNA的表达水平。所有受试物均不促进ERβmRNA表达。淫羊藿素促进ERα蛋白表达强于其它三组。结论:淫羊藿素有明显的雌激素样作用,而淫羊藿苷及其它两种受试物雌激素样作用不明显。四种受试物均不促进ERβmRNA表达。     

Caco-2细胞单层研究淫羊藿黄酮类成分的吸收转运

目的 研究淫羊藿黄酮类成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运.方法 采用超高压液相法测定药物浓度,计算表观渗透系数(Papp),研究淫羊藿黄酮5个主要成分淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I在Caco-2细胞模型中的双向转运.结果 淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的吸收渗透系数(P_(AB))较小,分别为5.91×10~(-7)、3.22×10~(-7)、2.76×10~(-7)、4.23×10~(-7) cm/s,宝藿苷I相对较大,为1.46×10~(-6)cm/s;5个化合物的分泌渗透系数(P_(BA))都比其相应的吸收渗透系数要大,其中宝藿苷I的分泌渗透系数是其吸收渗透系数的9.8倍.结论 淫羊藿黄酮类成分的肠道吸收较差,可能存在肠道转运蛋白的外排机制,其中三糖苷(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C)的吸收要小于二糖苷(淫羊藿苷),二糖苷的吸收要小于单糖苷(宝藿苷I).     

6种淫羊藿黄酮抗氧化和抗肿瘤活性的比较

目的：初步探讨淫羊藿黄酮的抗氧化活性与其化学结构的关系以及抗肿瘤作用与取代基的关系。方法：利用硅胶和凝胶柱色谱分离淫羊藿中单体黄酮成分,根据化合物光谱数据(ESI-MS,¹HNMR和¹³CNMR)鉴定其结构,利用MTT法和DPPH法测定6个单体黄酮的细胞毒性和抗氧化清除自由基的能力。结果：从地上部分的醋酸乙酯萃取物中分离得到6个化合物,分别为淫羊藿苷(Ⅰ), 木犀草素(Ⅱ),宝藿苷II(Ⅲ),金丝桃苷(Ⅳ),朝藿素B(Ⅴ)及宝藿苷I(Ⅵ)。活性研究结果表明,在3.125～200 μmol·L^-1剂量,化合物Ⅰ,Ⅲ和Ⅵ对DPPH自由基基本上没有清除作用,而化合物Ⅱ,Ⅳ和Ⅴ对DPPH则显示出了较好的自由基清除作用,并随浓度的增加清除作用增强,其作用强度明显好于维生素C；化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ和Ⅵ对人乳腺癌细胞株(MCF-7)和人肝癌细胞株(HepG2)的生长均表现出增殖抑制作用,而化合物Ⅲ和Ⅳ对2种细胞株的生长则基本没有影响。结论：B环是黄酮类物质抗氧化、清除自由基的主要活性部位；黄酮8-位异戊烯基取代不是其抗肿瘤活性的决定因素。     

淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷Ⅱ对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的:从淫羊藿总黄酮胶囊中制备分离宝藿苷Ⅱ,检测不同浓度宝藿苷II对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法:分别用10、20、40nmol/ml的宝藿苷II作用MC3T3-E1细胞,CCK-8法检测细胞存活率;比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活力;ELISA法检测骨钙素(OT)含量;茜素红染色分析并用氯化十六烷基吡啶测定钙沉积量;Western Blot法检测宝藿苷Ⅱ对BMP2信号通路蛋白表达的影响。结果:10、20、40nmol/ml的宝藿苷Ⅱ均可明显促进MC3T3-E1的增殖;提高MC3T3-E1分泌ALP和OT的能力;矿化结节数量明显增多且钙沉积量吸光度值显著增大;明显提高BMP2、Runx2和Osterix蛋白表达量,且呈剂量依赖性。结论:淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷II可以明显促进MC3T3-E1细胞的增殖分化。     

淫羊藿苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡作用的实验研究

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对MCF-7细胞增殖/凋亡作用的影响及其作用机制。方法:采用MTT比色分析法及Annexin V/PI标记流式细胞仪检测ICA对MCF-7细胞的增殖与凋亡作用的影响,采用Western blot检测蛋白表达,研究ICA是否通过ERK/MAPK信号转导通路起作用。结果:与对照组比较,MCF-7细胞培养24 h后,ICA各组OD值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);培养48 h后,各组差异均有统计学意义(P<0.05);培养72 h后,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,培养24 h后,10 m M ES单独作用后对MCF-7细胞无明显的增殖作用,ES加ICA组有明显的抑制作用。20 m M ES诱导结果与10 m M的结果一致。不同浓度的ICA作用48 h后,总ERK1/2和MEK蛋白表达均无明显变化,MEK磷酸化水平同样无明显变化,ERK1/2磷酸化水平增高。结论:淫羊藿苷对雌激素阳性人乳腺癌细胞有明显的抑制增殖与诱导凋亡的作用,同时可拮抗雌激素对乳腺癌细胞的增殖作用,但是其作用机制尚不清楚。     

基于细胞萃取及分子对接的淫羊藿中雌激素样作用成分分析

目的:利用T47D细胞/液质联用及分子对接筛选淫羊藿中具有雌激素样作用的成分。方法:采用溶有淫羊藿提取物的培养基培养T47D细胞,具有雌激素样作用的成分选择性地与T47D细胞结合,培养一定时间后,清洗并破碎细胞,释放出与其结合的成分,最后利用液质联用技术进行分析鉴定。对于鉴定出的可与细胞结合的成分,采用分子对接的方法研究其与雌激素受体的相互作用。结果:初步检测出淫羊藿中可与T47D细胞结合的7个成分,分别为淫羊藿苷,朝藿定B,宝藿苷-Ⅱ,淫羊藿次苷-I,宝藿苷-I,朝藿苷甲,脱水淫羊藿素,其中宝藿苷-Ⅱ,脱水淫羊藿素可与雌激素受体发生相互作用。结论:宝藿苷-Ⅱ,脱水淫羊藿素可与T47D细胞结合,且均可与2种雌激素受体发生作用,提示两者可能具有雌激素样作用。     

宝藿苷对人食管癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究香加皮中宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制.方法 采用MTT法分析不同质量浓度宝藿苷-Ⅰ(12.5、25、50 μg/mL)分别作用24、48、72 h后,对Eca-109细胞增殖的影响;流式细胞术分析宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞周期的影响;RT-PCR技术检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1mRNA表达的影响;Western blotting方法检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1蛋白表达的影响.结果 25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为24.8μg/mL.25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ作用48 h后,随宝藿苷-Ⅰ质量浓度的增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显提高,细胞的Cyclin B1蛋白及mRNA表达水平降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论 香加皮宝藿苷-Ⅰ可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用町能与下调细胞Cyclin B1表达有关.     

淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞作用的影响

目的:探讨淫羊藿素(ICT)对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞的作用.方法::以在37℃、5％ CO2培养箱培养的人乳腺癌MCF-7为研究对象,用不同浓度的淫羊藿素单独作用及与雌二醇联合作用,测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,并检测该过程中雌激素受体ERα的表达情况.结果:当ICT浓度大于1×10-10mol·L-1时单独使用能促进ERα阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖,能诱导ERα基因的表达;淫羊藿素与雌二醇联合作用抑制MCF-7细胞增殖,抑制ERα的表达.结论:淫羊藿素与雌二醇联合作用具有抑制E2诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用;淫羊藿素与雌二醇联合作用可抑制ERα基因的表达.     

六神丸逆转灯盏细辛抑制MCF-7细胞凋亡作用的实验研究

目的观察六神丸与灯盏细辛注射液对人乳腺癌MCF-7细胞的作用,并从细胞凋亡角度探讨其相互作用机制。方法将六神丸含药血清及灯盏细辛注射液作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,检测其对细胞增殖的直接抑制作用,流式细胞仪检测其对细胞凋亡及对Caspase-3表达的作用。结果六神丸含药血清对MCF-7细胞的增殖均有直接抑制作用,24、48、72 h生长抑制率分别为41.23%、36.93%、36.82%;灯盏细辛注射液对MCF-7细胞的增殖均亦有直接抑制作用,24、48、72 h生长抑制率分别为27.09%、19.40%、25.58%;两者合用作用增强,24、487、2 h生长抑制率分别为67.89%、65.57%、68.31%。流式细胞仪检测证明,灯盏细辛注射液可抑制MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达,六神丸含药血清可促进MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达。两者合用,MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达较对照组增强,效果界于两者单用之间。结论六神丸可通过逆转灯盏细辛注射液抑制MCF-7细胞凋亡及Caspase-3的表达而表现出促MCF-7细胞凋亡的作用。     

天花粉多糖促人外周血单个核细胞增殖和对人乳腺癌细胞人子宫颈癌细胞的生长抑制作用

目的 研究天花粉多糖促人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)增殖作用和对人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)、人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)生长抑制作用.方法 分离健康人PBMC,采用MTT法测定不同浓度天花粉多糖(0.5,1.0,2.0,5.0,10.0,20.0 mmol·L-1)作用于人PBMC 72h后,对人PBMC的促增殖作用;不同浓度天花粉多糖对MCF-7细胞和HeLa细胞生长的抑制作用.结果 2.0～20.0 mmol·L-1天花粉多糖具有显著促进人PBMC增殖(P<0.05),且呈一定的浓度依赖关系;5.0,10.0,20.0 mmol·L-1天花粉多糖均能有效抑制MCF-7细胞和HeLa细胞生长(P<0.05).结论 天花粉多糖具有促人PBMC的增殖作用,并可显著抑制肿瘤细胞MCF-7和HeLa细胞的生长.     

宝藿苷-Ⅰ联合As_2O_3对食管癌Eca-109细胞增殖的影响

目的研究宝藿苷-Ⅰ与As2O3联合应用对食管癌细胞Eca-109增殖的影响。方法取对数生长期Eca-109接种于96孔培养板,宝藿苷-Ⅰ组予以25 mg/L宝霍苷As2O3组予0.18 mg/L As2O3,联合用药组予12.5 mg/L宝藿苷-Ⅰ+0.09 mg/L As2O3,对照组予0.1%DMSO。采用MTT法分析对Eca-109细胞增殖的抑制作用,DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期,Western Blot技术检测C-myc基因蛋白的表达,每组均重复3次。结果 3个用药组均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(均P<0.05),但联合用药组抑制作用显著优于单独用药组(P<0.05);3个用药组均可使细胞凋亡,使细胞周期阻滞在G2/M期,使C-myc表达下调,与对照组相比均有显著性差异(P均<0.05),但联合用药组较单药组作用更显著(P<0.05)。结论各自半量的宝藿苷-Ⅰ与As2O3联合应用对Eca-109细胞的增殖抑制有显著的增强作用,明显优于各自的单味应用效果。     

陈皮多甲氧基黄酮类成分对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株增殖抑制作用及其敏感性比较

目的:研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对人乳腺癌、肝癌细胞株的增殖抑制作用并对其敏感性进行比较.方法:采用MTT法观察CM对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的增殖抑制作用.结果:不同剂量CM(10mg/L、20mg/L、40mg/L)作用于MCF-7细胞株,24h细胞抑制率分别为18.75%、19.79%、34.38%,48h细胞抑制率分别为17.39%、36.96%、40.22%,72h细胞抑制率分别为35.57%、47.08%、50.69%;作用于HepG2细胞株,24h细胞抑制率分别为5.51%、11.81%、29.92%,48h细胞抑制率分别为13.54%、38.54%、51.04%,72h细胞抑制率分别为13.21%、43.40%、55.67%.结论:CM可以抑制人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的生长并对两细胞株的增殖抑制呈现时间、浓度依赖性.同等条件下,在小剂量、短时间作用时,MCF-7对于CM作用的敏感性较高;在大剂量、长时间作用时,HepG2表现出比MCF-7更高的敏感性.     

仙茅、淫羊藿含药血清对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨仙茅、淫羊藿含药血清单用或与三苯氧胺(TAM)合用是否有促人乳腺癌MCF-7细胞增殖/凋亡的作用.方法 设立空白、E<,2>及TAM对照组,观察仙茅、淫羊藿含药血清单用及联合TAM在不同剂量和作用时间下时MCF-7细胞生长的影响.应用MTT法观察细胞增殖情况,应用Annex-V+PI双染法及流式细胞仪观察细胞凋亡情况.结果 仙茅、淫羊藿对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响因浓度的不同而不同:不同浓度的仙茅含药血清对乳腺癌细胞MCF-7的促增殖作用均不明显(P>0.05).仙茅、淫羊藿与TAM联合作用于MCF-7细胞,无明显促细胞增殖的作用(P>0.05),高剂量的淫羊藿甚至有诱导细胞凋亡的可能(P<0.05).结论 仙茅、淫羊藿临床上使用基本是安全的,尤其对ER(+)乳腺癌患者合并TAM治疗的情况下.研究结果为临床应用补肾中药治疗乳腺癌提供了实验依据.     

固定化蜗牛酶同时生物转化淫羊藿中4种黄酮苷

目的采用固定化蜗牛酶同时生物转化淫羊藿Epimedii Folium中4种黄酮苷,并对工艺进行优化。方法交联-包埋法制备固定化蜗牛酶,单因素试验优化生物转化工艺,HPLC法测定转化率,LC-MS/MS法鉴定转化产物。结果在最佳条件(p H值5,温度50℃,蜗牛酶与底物比例1∶1,底物质量浓度1.0 mg/m L,转化时间2 h)下,朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷可分别转化为箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,以及宝藿苷Ⅰ和淫羊藿苷元(两者均为淫羊藿苷转化产物),平均转化率分别为73.69%、74.01%、73.46%、75.52%。结论该工艺稳定简单,重复性好,可用于淫羊藿中4种黄酮苷的高效转化。     

农药氰戊菊酯与雌二醇联合作用对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:旨在通过乳腺癌MCF-7细胞对农药氰戊菊酯和雌二醇联合作用进行研究,评价氰戊菊酯和雌二醇联合作用的环境雌激素活性。方法:MTT法检测氰戊菊酯和雌二醇联合对MCF-7细胞生长的作用;用流式细胞仪检测氰戊菊酯和雌二醇联合对MCF-7细胞周期分布情况;采用Western Blot法测定氰戊菊酯和雌二醇联合对MCF-7细胞ERK1/2,P-ERK1/2蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示,氰戊菊酯与雌二醇联合后能促进MCF-7细胞增殖,但增殖作用比单独应用氰戊菊酯或雌二醇效应低,两者呈拮抗作用;流式细胞仪分析氰戊菊酯和雌二醇联合作用后与空白组比较,增殖效应不明显;Western Blot结果显示,氰戊菊酯和雌二醇联合对ERK1/2蛋白无明显影响,但可以促进P-ERK1/2蛋白的表达,但与氰戊菊酯和雌二醇单独作用比较,P-ERK1/2蛋白的表达较弱。结论:氰戊菊酯与雌二醇联合作用于MCF-7细胞,增殖效应低于单独作用组,两者联用具有拮抗作用,可通过对ERK信号传导通路的影响而发挥促进细胞增殖的作用。     

仙茅、淫羊藿颗粒剂对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的：探讨仙茅、淫羊藿是否有促人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用。方法：设立空白、E2及TAM对照组,观察二仙汤中两味君药仙茅、淫羊藿颗粒剂在不同剂量和作用时间下对MCF-7细胞的生长的影响。应用MTT法观察细胞增殖情况。结果：仙茅、淫羊藿对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响因浓度的不同而不同,不同浓度的仙茅颗粒剂对乳腺癌细胞MCF-7的促增殖作用均不明显（P〉0.05）,而中等剂量的淫羊藿颗粒有弱雌激素样作用（P〈0.05）。结论：仙茅颗粒剂应用于乳腺癌患者基本上是安全的,但淫羊藿颗粒剂单独应用于ER（＋）乳腺癌患者需谨慎,其正确的使用方法包括使用剂量及持续时间等尚需进一步研究。     

人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖及凋亡的影响

目的:研究人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖及凋亡的作用机制。方法:将人乳腺癌细胞株MCF-7作为研究对象,用CCK-8、流式细胞仪等方法检测人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖及凋亡的影响。结果:人参皂苷Rg3对抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖作用在一定范围内具有时间和浓度呈正相关的特点,随着时间的延长及药物浓度的增加,增殖抑制的作用增强,且呈剂量依赖性关系,24 h、48 h、72 h的IC50值分别为210.26μg/mL、145.78μg/mL、91.78μg/mL。药物作用24 h后,G2期细胞百分比明显增加,G1、S期细胞百分比明显减少。随着人参皂苷Rg3浓度的增加,明显增强诱导细胞的凋亡(P 0.05)。结论:人参皂苷Rg3可对MCF-7细胞产生抑制作用,使细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡。     

淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的兔血管平滑肌细胞增殖的影响,为探讨淫羊藿苷降血脂、预防动脉粥样硬化的作用机制及其药效提供实验依据.方法 兔血管平滑肌细胞增殖模型组给予不同剂量淫羊藿苷处理,采用MTT方法测定各组细胞OD值,用流式细胞术分析其细胞周期.并用TUNEL法镜下观察凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 半胱氨酸能显著促进VSMC的增殖(P<0.05),而淫羊藿苷对半胱氨酸刺激平滑肌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.05).淫羊藿苷影响了增殖平滑肌细胞的细胞周期,使S期细胞数量减少.淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞具有促凋亡作用,随药物浓度的增加,细胞的凋亡率增加.结论 淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞有明显的抑制生长及促凋亡作用,在心血管疾病的治疗方面具有重要的研究价值.