淫羊藿总黄酮胶囊中黄酮类成分含量测定及抗骨质疏松活性研究

采用快速液相色谱法(RRLC)对淫羊藿总黄酮胶囊进行含量测定,建立了淫羊藿新苷A、朝霍定A1、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、淫羊藿次苷Ⅰ、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ等11个黄酮类成分的含量测定方法。同时,通过检测碱性磷酸酶(AKP)含量,考察了11个化合物诱导MC3T3-E1细胞增殖分化的效果,结果显示宝藿苷Ⅱ活性最好,宝藿苷Ⅱ和淫羊藿次苷Ⅰ活性都大于淫羊藿苷。该研究建立了黄酮苷类成分的含量测定方法,并比较了每个单体抗骨质疏松的效果,为淫羊藿总黄酮胶囊药效物质基础和作用机制研究提供了技术支持。     

淫羊藿苷促前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的实验研究

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的机制。方法采用不同浓度(10~(-10)~10~(-5)mol/L)的ICA干预前成骨细胞MC3T3-E1 3、6、9天后采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒测定ALP活性,确定ICA最适促分化浓度。最适ICA浓度干预前成骨细胞MC3T3-E1 7天后应用实时定量PCR法(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测骨形态发生蛋白(BMP)和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)基因表达。ICA分别与BMP、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(Noggin、DKK-1)联合干预前成骨细胞MC3T3-E1后,茜素红钙结节染色观察钙化程度以及Western blot检测BMP-2蛋白表达变化。结果 ICA促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化,且10~(-9)mol/L ICA促进分化的能力最强。与对照组比较,ICA能明显上调BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)mRNA表达(P0.01)。Noggin或DKK-1能抑制前成骨细胞MC3T3-E1钙化,且两者联合作用时抑制更加明显。与ICA单独作用比较,ICA与DKK1联合干预后BMP-2蛋白表达水平下降(P0.01)。结论 ICA可能通过Wnt/β-catenin/BMP-2信号通路调控前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化。     

一测多评法同时测定淫羊藿总黄酮胶囊中7种黄酮类成分

目的:采用一测多评技术建立UPLC快速测定淫羊藿总黄酮胶囊中7种成分(朝藿定A1,朝霍定A,朝霍定B,朝霍定C,淫羊藿苷,鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ以及宝霍苷I)的方法,并验证此方法在淫羊藿总黄酮胶囊中应用的可行性和方法适用性。方法:以淫羊藿总黄酮胶囊中7个具异戊烯基取代的黄酮类成分为指标成分,在一定的线性范围内,建立淫羊藿苷与其他6个成分的相对校正因子,计算朝藿定A1,朝霍定A,朝霍定B,朝霍定C,鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ以及宝霍苷I的含量,实现一测多评。结果:各成分相对淫羊藿苷的校正因子分别为f_(淫羊藿苷)/f_(朝藿定A)1=1.413,f_(淫羊藿苷)/f_(朝藿定A)=1.231,f_(淫羊藿苷)/f_(朝藿定B)=1.375,f_(淫羊藿苷)/f_(朝藿定C)=1.166,f_(淫羊藿苷)/f鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ=0.962,f_(淫羊藿苷)/f宝藿苷Ⅰ=0.689,且重复性良好,10批淫羊藿总黄酮胶囊中7个成分的计算值与外标法实测值无明显差异。结论:一测多评法可用于淫羊藿总黄酮胶囊中多成分的质量评价,结果稳定可靠。     

淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响

目的:观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响。方法:将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3,4代细胞,MTT法观察淫羊藿苷对人成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定观察淫羊藿苷对人成骨细胞分化的影响,RT-PCR方法检测淫羊藿苷对人成骨细胞 BMP-2 mRNA表达的影响。结果:浓度为20μg·mL^-1的淫羊藿苷能够显著促进人成骨细胞的增殖和分化,且使BMP-2 mRNA的表达升高。结论:淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP 2 mRNA的表达有关。     

淫羊藿苷对前成骨细胞株OCT1细胞BMP-2 mRNA、Runx-2 mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对成骨细胞增殖和分化的影响及作用机制。方法常规培养前期实验建立的前成骨细胞株OCT-1细胞(OCT1细胞),采用淫羊藿苷进行干预48 h,浓度分别为10 mg/L、30 mg/L及60 mg/L,并以BMP2纯化蛋白(50μg/L)为阳性对照。利用MTT法检测成骨细胞增殖率,实时荧光定量RT-PCR检测成骨细胞中BMP2 mRNA、Runx2 mRNA的表达。结果与正常对照组比较,淫羊藿苷能明显促进成骨细胞的增殖(P0.05);淫羊藿苷可显著提高成骨细胞中BMP2 mRNA、Runx2 mRNA表达量(P0.05)。结论淫羊藿苷通过激活前成骨细胞中BMP信号通路上调Runx2的表达,从而诱导成骨细胞的增殖和分化。     

基于细胞萃取及分子对接的淫羊藿中雌激素样作用成分分析

目的:利用T47D细胞/液质联用及分子对接筛选淫羊藿中具有雌激素样作用的成分。方法:采用溶有淫羊藿提取物的培养基培养T47D细胞,具有雌激素样作用的成分选择性地与T47D细胞结合,培养一定时间后,清洗并破碎细胞,释放出与其结合的成分,最后利用液质联用技术进行分析鉴定。对于鉴定出的可与细胞结合的成分,采用分子对接的方法研究其与雌激素受体的相互作用。结果:初步检测出淫羊藿中可与T47D细胞结合的7个成分,分别为淫羊藿苷,朝藿定B,宝藿苷-Ⅱ,淫羊藿次苷-I,宝藿苷-I,朝藿苷甲,脱水淫羊藿素,其中宝藿苷-Ⅱ,脱水淫羊藿素可与雌激素受体发生相互作用。结论:宝藿苷-Ⅱ,脱水淫羊藿素可与T47D细胞结合,且均可与2种雌激素受体发生作用,提示两者可能具有雌激素样作用。     

糊精湿法制粒对淫羊藿总黄酮酶解的影响

目的研究制粒因素对淫羊藿总黄酮酶解的影响。方法将蜗牛酶、淫羊藿总黄酮和糊精混合经湿法制粒制成含酶淫羊藿总黄酮颗粒,HPLC法测定其酶解过程中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、和朝藿定C以及酶解产物(宝藿苷Ⅰ、箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿苷元)的含有量变化。结果与未经制粒的淫羊藿总黄酮粉末酶解相比,经糊精湿法制粒得到的含酶淫羊藿总黄酮颗粒在37℃缓冲溶液中酶解时淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B和朝藿定C的酶解速率变慢,但在肠道排空时间(4⁶ h)内可以完全酶解转化成次级苷宝藿苷Ⅰ、箭藿苷A、箭藿苷B和鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,次级苷继续被水解可生成淫羊藿苷元。结论糊精湿法制粒对淫羊藿总黄酮的酶解转化有一定影响。     

淫羊藿苷对强直性脊柱炎成纤维细胞向成骨型分化的影响

目的异位成骨是强直性脊柱炎病理过程的核心环节。成纤维细胞是AS异位成骨的靶细胞,BMP/Smad信号传导通路是骨形成过程中的一条重要通路。该研究通过观察淫羊藿苷对体外培养强直性脊柱炎成纤维细胞增殖和凋亡的作用,同期观察淫羊藿苷对体外培养AS成纤维细胞成骨表型表达及BMP/Smad信号通路蛋白表达的影响,初步探讨淫羊藿苷干预强直性脊柱炎异位成骨的分子机制。方法采用组织学原代培养法,建立人髋关节囊成纤维细胞系,应用免疫组化法鉴定细胞来源。以第3代对数生长期的AS成纤维细胞为研究对象,将实验分为AS空白对照组与淫羊藿苷小剂量组(25μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)与大剂量组(100μg/mL)。MTT法检测淫羊藿苷干预下AS成纤维细胞的增殖情况;Annexin V法流式细胞术检测淫羊霍苷对AS成纤维细胞凋亡的影响。检测淫羊藿苷作用下AS成纤维细胞成骨表型的表达状况,观察其ALP活性、胶原合成及OC分泌量。Western blotting技术检测在不同剂量淫羊藿苷干预下,AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路中Smad1、Smad5、Smad4及成骨标志基因Cbfa-1蛋白的表达情况。结果淫羊藿苷100μg/mL可明显抑制AS成纤维细胞增殖(P0.05),且无细胞毒产生,各组细胞不同时间点增殖情况无显著差异;淫羊藿苷各剂量组对AS成纤维细胞凋亡均无明显作用。大剂量淫羊藿苷对AS成纤维细胞ALP活性、胶原合成及OC分泌均有明显抑制作用。与AS对照组相比,淫羊藿苷作用后AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路Smad1、Smad4、pSmad1以及Cbfa-1蛋白表达受明显抑制(P0.05)。结论淫羊藿苷能有效抑制AS成纤维细胞增殖,且抑制AS成纤维细胞成骨表型的表达,其分子机制可能是淫羊藿苷通过干预BMP/Smad信号通路活化,从而调节成骨标志基因Cbfa-1表达,抑制AS成纤维细胞向成骨型分化,可能是淫羊藿苷干预AS异位成骨的机制之一。     

卡波姆对淫羊藿总黄酮酶解效果的影响

目的：考察生物黏附剂卡波姆对淫羊藿总黄酮酶解效果的影响。方法：将淫羊藿总黄酮与卡波姆混合,加入蜗牛酶酶解,采用HPLC测定酶解液中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷等主要黄酮成分及箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ和淫羊藿苷元等主要酶解产物的含量变化,并与未加入卡波姆时淫羊藿总黄酮的酶解过程比较。结果：在37 ℃,含1%卡波姆的缓冲溶液中,淫羊藿总黄酮中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的酶解速率变慢,约需4 h才能完全酶解转化成次级苷,所需时间为无卡波姆时的2倍;酶解液中宝藿苷Ⅰ质量浓度始终高于未加卡波姆时的,最高量48.43 mg·L^-1,6 h时趋于稳定时12.99 mg·L^-1,最高量和稳定量分别为未加卡波姆酶解时的2.2,7.2倍;2~6 h内箭藿苷A和鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ质量浓度都略高于未加卡波姆时的;之后次级苷被继续水解生成苷元,且苷元生成速率基本相同,约7.60 mg·L^-1·h^-1。结论：卡波姆会减缓淫羊藿总黄酮的酶解速率,促进次级苷的生成,对苷元的生成基本无影响。     

反相高效液相色谱法测定淫羊藿总黄酮胶囊中淫羊藿苷含量

目的 :建立淫羊藿总黄酮胶囊中淫羊藿苷含量的测定方法。方法 :高效液相色谱法 ,ZorbaxEclipseXDE -C18柱( 2 5 0mm× 4.6mm ,5 μm ) ,流动相为乙腈 水 醋酸 ( 2 7∶73∶0 .5 ) ,流速 :0 .8ml·min 1,柱温为 2 5℃ ,检测波长 2 70nm。结果 :淫羊藿苷在 0 .184～ 1.840 μg范围内线性良好 (r =0 .9999) ,加样回收率为 99.4% ,供试液在 1～ 3d内测定结果稳定。结论 :高效液相色谱测定淫羊藿总黄酮胶囊中淫羊藿苷含量 ,方法简便、结果准确、重现性好 ,可作为淫羊藿总黄酮胶囊的质量控制方法     

5种淫羊藿黄酮类成分对体外培养成骨细胞的影响

目的：观察5种淫羊藿黄酮——淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿定B、淫羊藿定C对体外培养成骨细胞增殖、细胞基质钙及矿化结节钙的影响。方法：取新生1～3dSD大鼠头盖骨用酶消化法分离成骨细胞，第3代细胞经MTT法、甲基百里香酚蓝(MTB)比色法观察5种黄酮对体外培养成骨细胞增殖、细胞基质钙及矿化结节钙的影响。结果：淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿定C0．1—10μmol／L浓度均能显著地促进成骨细胞增殖，淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿定B0．1—10tanol／L浓度均能显著增加细胞基质钙,淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿定B0．1～10pmol／L浓度、淫羊藿苷lpmol／L浓度及淫羊藿定C0．1～1pmol／L浓度均能显著增加矿化结节钙。结论：淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿定B、淫羊藿定C具有增加细胞基质钙及促进体外培养成骨细胞增殖和矿化的作用。     

淫羊藿总黄酮胶囊指纹图谱研究

目的:建立淫羊藿总黄酮胶囊HPLC指纹图谱测定方法。方法:以淫羊藿苷为参照物,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为1.0 m L·min~(-1);柱温为25℃;检测波长为270 nm。结果:建立了淫羊藿总黄酮胶囊的指纹图谱,确定了淫羊藿总黄酮胶囊中14个共有峰,10批成品指纹图相似度在0.95以上,同时指认了淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和宝霍苷Ⅰ各色谱峰。结论:建立的HPLC指纹图谱有较好的精密度、重复性和稳定性,适用于淫羊藿总黄酮胶囊的质量控制。     

淫羊藿苷与其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响的比较研究

目的:研究淫羊藿苷与其主要代谢产物——淫羊藿次苷Ⅱ对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bonemarrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以5×10-5mol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿苷组、淫羊藿次苷Ⅱ组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况。结果:淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ均可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,但淫羊藿次苷Ⅱ的活性明显高于淫羊藿苷。结论:淫羊藿次苷Ⅱ促进rBMSCs成骨性分化的活性高于淫羊藿苷,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。     

黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,用不同浓度的黄芪甲苷进行预处理后,MTT法测定细胞增殖情况,碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞分化情况,Western blotting分析转化生长因子TGF-β1、成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3表达水平;应用小干扰RNA(siRNA)转染法观察TGF-β1 siRNA对MC3T3-E1细胞增殖及活性的影响,加入抗Smad2/3抗体,探讨Smad2/3在黄芪甲苷介导的细胞增殖分化中的作用。结果:黄芪甲苷在一定浓度范围内剂量依赖性促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力。进一步机制分析表明,黄芪甲苷处理可诱导TGF-β1蛋白表达,TGF-β1siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降;此外,黄芪甲苷可显著性诱导Smad2/3表达,经TGF-β1 siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的Smad2/3表达显著下降;加入Smad2/3抗体后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降。结论:黄芪甲苷可通过刺激TGF-β1-Smad2/3通路的活化促进成骨细胞的增殖和分化,从而有利于骨形成。因此,本研究将为骨折愈合的治疗提供新的研究方向。     

淫羊藿总黄酮的生物转化过程分析

该文旨在研究淫羊藿总黄酮在体外水解酶作用下的生物转化过程。主要采用蜗牛酶水解淫羊藿总黄酮,用HPLC测定总黄酮中主要黄酮的转化。数据结果显示已知主要黄酮成分淫羊藿苷,朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C都在1~2 h内分别完全转化为宝藿苷Ⅰ,箭藿苷A,箭藿苷B和鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,随着水解时间的延长,各转化产物被继续水解。因此可得出结论,蜗牛酶在37 ℃,pH 6.0的Hank’s平衡盐溶液中,2 h内能将淫羊藿主要总黄酮转化为次级苷或苷元,且其酶解产物与肠道代谢产物相一致。     

六种黄酮对成骨细胞体外培养作用的比较研究

目的:通过成骨细胞体外培养技术,对6种植物黄酮进行对体外骨细胞培养作用的比较研究.方法:采用UMA-106-01成骨细胞株进行成骨细胞培养,观察ALP活性和3H-TdR掺入的情况.结果:24h,培养液中骨碎补总黄酮ALP活性高于对照组.细胞内骨碎补总黄酮、柚皮苷、陈皮苷、淫羊藿总黄酮ALP活性显著增加.48h,培养液中骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮、菟丝子总黄酮ALP活性高于对照组.细胞内骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮、菟丝子总黄酮ALP活性显著增加.骨碎补总黄酮、柚皮苷、淫羊藿总黄酮,24h,3H计数显著高于对照组.骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮、柚皮苷、菟丝子总黄酮、陈皮苷对成骨细胞均有一定作用.结论:6种黄酮类补肾中药对体外培养的成骨细胞,除槲皮素外均有一定的作用,以骨碎补总黄酮作用最为广泛和明显.     

淫羊藿苷和淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷及淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探讨雌激素受体(ER)与其作用机制的关系.方法 用不同浓度的淫羊藿苷和淫羊藿素处理雌激素受体呈阳性的乳腺癌T47D细胞系后,MTT法检测T47D细胞增殖,流式细胞术检测T47D细胞周期的变化,Western blotting法检测T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达.结果 淫羊藿苷和淫羊藿素浓度为1×10-9～1×10-6 mol/L,能显著促进T47D细胞增殖,且该作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780(1×10-6 mol/L)所拮抗.与对照组相比,淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L使S期T47D细胞比例明显增加,增殖指数显著升高,但该作用可被ICI 182.780抑制.淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L还可显著增加ERα、ERβ蛋白表达(P＜0.01).结论 淫羊藿苷和淫羊藿素均可显著促进T47D细胞增殖,该作用可能是通过上调胞内ERα、ERβ蛋白表达介导的.     

淫羊藿中淫羊藿苷和总黄酮的闪式提取工艺

目的:研究闪式提取法对淫羊藿中淫羊藿苷和总黄酮的最佳提取工艺条件。方法:以淫羊藿苷和总黄酮含量为指标,通过正交试验得出闪式提取法提取其淫羊藿苷和总黄酮的最优条件。结果:闪式提取法各因素对总黄酮和淫羊藿苷提取效果的影响程度依次为:提取次数>提取时间>液固比>乙醇体积分数,最佳提取工艺为:加25倍量50%乙醇提取3次,每次10 min。结论:闪式提取法是一种高效、快速提取淫羊藿中总黄酮和淫羊藿苷的方法。     

柚皮苷对小鼠成骨细胞MC3T3 E1增殖、分化和矿化的影响

目的:检测骨碎补有效成分柚皮苷对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响.方法:以成骨细胞株MC3T3-E1细胞为体外药效的试验模型(药物组和对照组),通过CCK-8法观察10,1,0.1,0.01,0.001,0.000 1μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响;通过乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验观察以上浓度的柚皮苷溶液对细胞毒性能力的影响.通过骨形成蛋白-2(BMP-2),碱性磷酸酶(ALP)活性测定和骨钙素(OC)含量测定观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞分化能力的影响;通过Von kossa钙化染色法观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞钙化能力的影响.结果:高浓度的柚皮苷溶液在12 h和24 h时能促进MC3T3-E1细胞的增殖作用.而低浓度的柚皮苷溶液则无此作用.所测的各个组别细胞毒性百分比都较小,且随着时间的推移(12,24,48 h)变化较小.光镜下观察各个时间点细胞的密度和形态也未发生明显的变化.BMP-2细胞免疫化学结果表明,24,48 h时柚皮苷浓度10,1,0.1μmol·L~(-1)包浆内棕色着色比对照组明显.ALP检测结果表明48 h时,1,0.1μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05).72 h时,0.1 μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05).OC检测结果表明12 d时,10,1μmol·L~(-1)柚皮苷溶液作用组与对照组相比OC活性明显提高(P<0.05).Vonkossa染色钙化面积百分比结果表明3组柚皮苷溶液作用组与对照组相比无明显区别.结论:柚皮苷溶液可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖能力和分化能力.     

淫羊藿苷通过Akt /GSK3β/CDK通路抑制CLC5肝癌细胞增殖

目的 研究淫羊藿苷对肝细胞癌细胞CLC5增殖能力的影响及其可能的机制。方法 通过网络药理学筛选淫羊藿苷作用靶点，构建靶点网络及构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，预测淫羊藿苷可能作用靶点及相关通路；使用梯度浓度（0、6.25、12.5、25、50 μmol·L^-1）淫羊藿苷刺激肝细胞癌CLC5细胞，通过细胞活性及增殖检测（CCK-8）法检测淫羊藿苷对CLC5细胞活力的影响；使用不同浓度（0、25、50 μmol·L^-1）淫羊藿苷处理肝细胞癌CLC5细胞，通过Edu-488及克隆形成实验（Clone Forming）检测淫羊藿苷对CLC5细胞增殖的影响；使用不同浓度淫羊藿苷分别刺激CLC5细胞不同时间，通过蛋白免疫印迹法（Western blot）验证淫羊藿苷对蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）/细胞周期依赖激酶（CDK）通路蛋白表达水平的影响情况。结果 网络药理学分析发现淫羊藿苷作用于肝细胞癌的机制与阻滞细胞周期抑制肿瘤细胞增殖有关；CCK-8法结果表明，与空白组比较，淫羊藿苷组CLC5细胞活力显著下降（P<0.01），呈时间-浓度依赖性；与空白组比较，淫羊藿苷组Edu-488阳性率及克隆形成菌落数量明显减少（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，淫羊藿苷组p-Akt、p-GSK3β、CDK4、细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁）的蛋白表达水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。结论 淫羊藿苷可抑制阻滞肝细胞癌细胞周期，抑制肝细胞癌增殖，作用机制可能与抑制Akt/GSK3β/CDK通路有关。