光照与核黄素浓度对核黄素光动力灭活病原体效果的研究

目的 探究不同光照时间条件下核黄素灭活病原体效果的影响。方法 采用含水疱性口炎病毒(VSV)血浆分4组，分别添加核黄素浓度致终浓度为50、100、150μmol/L,0μmol/L为对照组。观察其在10、15、20、25 min的生长滴度，不进行光照的为对照组。用Reed-Muench法计算灭活前后培养后生长滴度，通过灭活后log减少因子评价不同浓度核黄素对灭活效果的影响。结果 在无光照的条件下添加核黄素无病原体灭活效果，随着光照时间从15 min增加到25 min,无核黄素组VSV灭活效果增加；当光照小于15 min时，50～150μmol/L核黄素VSV灭活效果差异无统计学意义；当光照时间为15～25 min时，添加核黄素后VSV灭活效果增强，但不同浓度核黄素组间差异无统计学意义。结论 在25 min内核黄素病原体灭活效果随光照时间的增加灭活效果越好，与核黄素浓度影响较小。     

双唑泰栓对大鼠混合感染性阴道炎的药效学观察

目的观察双唑泰栓对大鼠混合感染性阴道炎的疗效.方法用Wistar雌性大鼠建立白色念珠菌、阴道滴虫和大肠杆菌的混合感染阴道炎模型.设4个剂量组,每日阴道给药1次,连续6d,以大鼠阴道病原体转阴率的量效曲线(包括ED50)和阴道组织炎症治愈程度(%)的量效曲线(包括ED50)作为定量观察指标.结果病原体转阴率和治愈程度与对数剂量显示量-效关系(P<0.01),其ED50分别为57.64mg/kg和69.90mg/kg.结论双唑泰栓对大鼠混合感染性阴道炎的治疗效果确切.     

髓源性生长因子促进血管生成能力的实验研究

目的 观察骨髓源性生长因子(MYDGF)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的促进作用,明确MYDGF对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及成管能力的作用.方法 新鲜种鸡蛋孵化7d选择其中发育正常鸡胚随机分为对照组、PBS组、低剂量MYDGF组、中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF,每组各10枚.通过气室分别向各组加入30μl样品(低、中和高剂量MYDGF组为溶于PBS中浓度分别为10、100和500 ng/ml的MYDGF溶液).2 d后拍照记录CAM血管生长情况,利用计算机软件IPP 6.0分析血管生成面积(VA)与CAM面积并计算两者之比(VA/CAM).体外培养HUVEC,用CCK-8法检测MYDGF对HUVEC细胞的增殖能力的影响.成管实验检测MYDGF对HUVEC成管功能的影响.结果 血管交叉点数(VN)分别为PBS组(20.80±2.49)个,中剂量MYDGF组(27.60±3.17)个,高剂量MYDGF组(28.60±3.27)个,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较,差异有均统计学意义(P<0.05).VA/CAM值分别为PBS组(23.53±1.96)％,中剂量MYDGF组(27.87±3.10)％,高剂量MYDGF组(29.26±2.73)％,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,MYDGF(100 ng/ml)可促进HUVEC增殖(P<0.05)、成管(P<0.05)的功能,差异有统计学意义.结论 MYDGF可促进CAM血管新生,增强HUVEC细胞的增殖及成管能力.     

两种方法监测紫外线灯辐照强度的结果分析

目的对两种监测紫外线灯辐照强度的方法进行评价。方法用紫外线辐照计和紫外线强度指示卡对不同功率的紫外线灯进行监测。结果监测≥30W紫外线灯,紫外线辐照计合格率为96.9%,指示卡合格率为98.1%,经统计学处理分析,两种方法监测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论辐照计与指示卡相比,检测范围广、结果准确稳定,精密度高等优势,更适用于质控管理部门对紫外线灯的定期质量监测。     

老年人核黄素需要量的初步探讨

长沙市20名60～70岁男性健康老人增食不同剂量核黄素片剂15天,测定增食前后清晨空腹1小时尿及4小时负荷尿中核黄素排出量,初步得出核黄素饱和需要量为2.0mg/日/人,需要量略低于1.5mG/日/人。     

980nm连续激光在金属医疗器械表面高效灭菌的实验研究

目的 探讨980 nm红外连续激光对金属医疗器械表面高效灭菌的功率和时间阈值关系.方法 采用人工污染实验法,以无菌钢制手术刀为载体,用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别进行污染,经不同功率、对应不同辐照时间的激光消毒灭菌后用细菌培养基清洗刀片采样,采用增菌培养来检测红外激光对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的灭活情况.结果 980 nm激光在5.24 W时辐照29 s,6.87 W时辐照24 s,8.33 W时辐照14 s,10.11W时辐照14 s都能彻底杀死金黄色葡萄球菌;980 nm激光在5.24 W时辐照22 s,6.87 W时辐照12s,8.33W时辐照11s,10.11W时辐照9s都能彻底杀死大肠杆菌.大肠杆菌比金黄色葡萄球菌更易灭活.依据实验数据拟合,在同一激光功率下,两种细菌存活率与辐照时间的函数符合一阶反应动力学形式.结论 980 nm红外激光能够实现金属医疗器械表面的快速消毒灭菌,并且功率越高则时间越短、效果越好.     

60Co辐照灭菌对保济丸3种成分的影响及对小鼠小肠的推进作用研究

目的 观察保济丸不同剂量60Co辐照对葛根素、橙皮苷、柚皮苷质量分数及对小鼠小肠推进作用的影响.方法 采用高效液相色谱法分析保济丸主要成分辐照前后变化,色谱柱为 Agilent Zorbax SB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),柱温为25 ℃,流速为1 mL/min,以甲醇(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~20 min,30%A;20~30 min,30%→75% A;30~40 min,75%→80% A;40~45 min,80%→30%A),检测波长为250 nm(葛根素)和283 nm(柚皮苷、橙皮苷).动物实验分组为正常对照组(Normal),保济丸辐照前组(BBJ),保济丸低剂量辐照组2 kGy(BJL)、中剂量辐照组6 kGy(BJM)、高剂量辐照组10 kGy(BJH),和阳性药物阿托品组(ATP),Normal组灌服生理盐水,ATP组灌服3 mg/kg硫酸阿托品溶液,其余组灌胃3 g/kg各相应剂量组保济丸,以小鼠小肠炭末推进试验评价保济丸对胃肠功能的作用.结果 葛根素、橙皮苷、柚皮苷分别在8.9~178 mg/L(r=0.999 37,n=6)、7.25~232 mg/L(r=0.999 94,n=6)、2.65~84.8 mg/L(r=0.999 95,n=6)范围内呈良好的线性关系;平均回收率分别为100.60%(RSD=3.49%)、102.02%(RSD=4.46%)、103.16%(RSD=3.79%).不同辐照剂量辐照的保济丸3种成分的质量分数与辐照前比较均无统计学意义(P>0.05).与正常组相比,不同辐照剂量保济丸都可显著抑制正常小鼠的小肠推进距离和推进率(P<0.05).结论 不同剂量60Co辐照对保济丸主要3种成分质量分数均无显著影响;对正常小鼠小肠推进功能均有抑制作用,建议尽可能选择低剂量辐照灭菌.     

60Co-γ射线辐照对3种保健食品中维生素C,E含量的影响

目的: 研究60Co-γ辐照灭菌对3种保健品中维生素C, E含量的影响. 方法: 对3种保健食品采用不同剂量的60Co-γ射线辐照处理,并对辐照前后样品中维生素C, E含量和细菌总数以及大肠菌群进行测定. 结果: 在5～20 kGy剂量范围内,5, 10 kGy辐照前后维生素C, E含量变化均无显著性差异(P＞0.05); 15 kGy辐照对保健产品中维生素C, E降低不明显;20 kGy辐照对保健食品中维生素C, E含量均显著降低(P＜0.05). 经5 kGy辐照后细菌总数和大肠肝菌均可达到国家卫生标准,经10, 15, 20 kGy辐照后均可彻底杀灭细菌. 结论: 中小剂量(5, 10 kGy)辐照对保健食品中的维生素C, E无显著性影响,但高剂量(15, 20 kGy)辐照可使保健品中维生素C, E含量显著降低.     

紫外线辐照血液疗法最佳辐照剂量的实验研究

①目的探讨紫外线辐照血液疗法治疗缺血性脑血管病的最佳辐照剂量。②方法利用光化学脑梗塞家兔模型，观察治疗后家兔全血粘度高切变、血浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、丙二醛（ＭＤＡ）含量和脑梗塞缺血性病灶面积的变化。③结果紫外线（２５３．７ｎｍ）辐照剂量为２４５．３８～２７２．６４Ｊ／ｍ２时，实验家兔的全血粘度高切变和ＭＤＡ含量明显降低（Ｆ＝３．５３，３．９１，Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ活性显著升高（Ｆ＝５．４６，Ｐ＜０．０５）；脑梗塞缺血性病灶的面积明显缩小（Ｆ＝３．６７，Ｐ＜０．０５）。④结论该疗法的最佳辐照剂量为２４５．３８～２７２．６４Ｊ／ｍ２     

两种方法建立SD大鼠黄褐斑模型的比较实验研究

目的 对比分析黄体酮注射液和紫外线照射两种方法建立SD大鼠黄褐斑模型.方法 分别采用高低剂量的黄体酮药物注射和紫外线辐照建立黄褐斑大鼠模型.观察斑块面积及光镜下观察皮肤切片,检测与黄褐斑黑色素沉积密切相关的超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平.结果 肉眼观察高剂量黄体酮组大鼠的背部皮肤可见显著色素沉积,低剂量黄体酮组可见散在色素沉积;紫外线组均可见明显色素沉积.与对照组比较,高剂量黄体酮组大鼠MDA水平升高、SOD水平降低,低剂量黄体酮组大鼠血清与皮肤组织中的SOD水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).高剂量紫外线组大鼠血清和皮肤组织中的SOD水平降低、MDA水平升高,低剂量组紫外线的大鼠皮肤组织中的SOD水平降低(P＜0.05),但两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).光镜下可见建模组黑色素颗粒成团堆积成黑色小体,黄体酮组堆积杂乱分布,其中高、低剂量组间有明显区别;紫外线组成线性密集排列,组间无显著差异.结论 黄体酮注射液和紫外线照射均能成功建立SD大鼠黄褐斑模型,紫外线照射建模效果和稳定性较好.     

铜,银离子协同游离氯杀灭水中大肠杆菌及f2的实验

目的：观察不同浓度的铜、银离子或游离氯在单项或不同组合情况下对水中大肠杆菌及大肠杆菌噬菌体ｆ２的杀灭作用。方法：在被大肠杆菌及ｆ２培养物污染的水样中加入消毒剂作用０ｍｉｎ，测定消毒前后的菌落数，并计算灭活率Ｋ值（Ｋ＝－ｌｇＮｔ／Ｎｏ）。结果：单独用铜或银离子，消毒效果较差；铜、银离子协同作用也不理想；当铜、银离子与游离氯协同作用时，对大肠杆菌和ｆ２的Ｋ值分别达到６．０９９１，４．０９９５，且铜、银     

医院感染和中药消毒香消毒效果的研究

为了寻找一种安全、简便及有效的消毒方法,作者研制成功了中药(艾叶、大青叶、白芷、香薷、苍术等)合成的消毒香。中药消毒香对医院感染的常见致病菌有明显效果。细菌杀灭率为:绿脓杆菌95.9％;金黄色葡萄球菌98.7％;大肠埃希氏杆菌97.5％;甲型链球菌96.5％;白色念珠菌100％。病毒灭活率为:流感病毒94.4％;腺病毒98.2％。医院内空气消毒效果平均菌落减少率达77.8％,其消毒效果与紫外线(75％)相似。     

绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的克隆及高效表达

在大肠杆菌中克隆及高效表达绿色荧光蛋白基因。方法；ＰＣＲ法克隆ＧＦＰ－Ｓ６５ＴｃＤＮＡ并改造其两端的限制性内切酶位点，构建重组原核表达载体ｐＲＳＥＴ－ＧＦＰＳ６５Ｔ。结果；在ＩＰＴＧ诱导条件下，ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ的表达量占细菌蛋白的 上。细菌培养物及其超声上清在长波紫外线的照射下，发出明亮的绿色荧光。     

yigP——大肠杆菌生长所必需的基因

yigP基因在大肠杆菌基因组上位于辅酶Q生物合成相关基因ubiE和ubiB之间,3者构成一个操纵子。利用温敏质粒pMAK705系统敲除大肠杆菌基因组上的yigP基因后,发现二次重组子内的温敏质粒无法通过高温培养丢失,即染色体上的yigP基因被敲除后,必须依靠质粒上完整的yigP基因才能存活;通过功能回补yigP基因的表达质粒pLac-yigP后,温敏质粒可以丢失;而将yigP基因分段获得的亚克隆回补yigP基因缺陷株,发现其下游367 bp的yigP-P4P2片段足以回补染色体上yigP基因的功能缺陷,从而表明yigP是大肠杆菌生长所必需的基因,且最小功能片段等于甚至小于367 bp。     

N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶基因的克隆、表达及产物纯化

目的：从猪肾中提取RNA,从中克隆出N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶（GNE）基因,并在大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中表达。方法：从猪肾中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出GNE基因,经测序,感受态大肠杆菌E.coli DH5a转化,质粒抽提,鉴定以及大肠杆菌BL21（DE3）转化表达,通过His-tag亲和纯化（Ni Sepharose 6 Fast Flow）,G-25柱脱盐,SDS-PAGE电泳检测。结果：RNA提取物经紫外分光光度计检测OD260/OD280=1.77,说明无明显的蛋白质和酚污染。RT-PCR扩增目的片段,测序证明该基因的ORF为1 206 bp,编码402个氨基酸组成的酶蛋白（GNE）。SDS-PAGE显示,纯化蛋白为45 kD的单一条带,与基因序列推测值一致。结论：GNE基因已被成功地克隆和表达。     

自血光量子疗法前后血液杀菌能力比较

用接种定量细菌于血液后不同时间计数细菌残存率方法。对２４例神经系统疾病患者自血光量子疗法处理前后的血液标本进行比较,观察其杀菌能力的变化。结果表明：血液本身具有的杀菌能力,在接种细菌量为０．５×１０＾－４～１×１０＾４／ｍｌ的条件下,３０ｍｉｎ可杀死近半数的细菌,但个体差异大。自血光量子疗法处理后血液中大肠埃希菌的残存率较治疗处理前显著降低,而铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌无显著性差异,提示血液本身     

结核分枝杆菌16KD蛋白的基因克隆及表达与纯化

目的:通过构建结核分枝杆菌(MTB)16KD蛋白的表达载体,在大肠杆菌(E.coli)中表达MTB16KD蛋白,并获得大量纯化的16KD蛋白。方法:采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出16KD蛋白的编码基因,用限制性内切酶消化后插入载体pGEX-4T-2中,测序结果证实后,将重组质粒转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达GST-16融合蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的相对分子质量及表达形式。Western blot鉴定16KD蛋白活性。经GST亲和层析柱过柱,得到纯化的16KD蛋白。结果:构建了具有正确基因序列的表达载体,在E.coli DH5α中诱导表达的融合蛋白GST-16占菌体总蛋白的42%。Wstern Blot结果证明:融合蛋白GST-16能与抗结核分枝杆菌的抗体发生特异性结合。紫外分光光度仪测量纯化16KD蛋白的浓度为688mg/L。结论:结核分枝杆菌16KD蛋白在E.coli DH5α能高效表达,该蛋白具有特异的免疫学活性。     

原核和真核细胞表达HBeAg的应用研究

目的：将原核细胞和真核细胞分别克隆表达生产的HBeAg,经适当纯化后进行检测分析,并在乙型肝炎抗HBe检测中进行应用和比较。方法：分别用大肠杆菌和家蚕细胞表达生产HBeAg,并用Saphacryl S-200柱层析进行纯化;紫外分光光度法测定表达产物的蛋白含量;EIA法测定HBeAg和HBcAg效价及评估HBeAg的应用效果。结果：原核细胞HBeAg：比活性为10000／mg,HBeAg/HBcAg＝50,用于抗HBe的检测时特异性为96％,灵敏度符合国家卫生部panel要求,真核细胞HBeAg：比活性为160000／mg,HBeAg/HBcAg＝5000,用于抗HBe的检测时特异性为100％,灵敏度高于国家卫生部panel要求的1－2个滴度。结论：真核细胞表达的HBeAg比活性高HBcAg含量低,在抗HBe检测时的应用效果优于原核细胞。     

大肠杆菌、金葡菌和铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药性研究

目的 研究大肠埃希氏杆菌（大肠杆菌）、金黄色葡萄球菌（金葡菌）和铜绿假单胞菌分别暴露于喹诺酮类药物、染料、紫外线后耐药性产生情况及不同浓度喹诺酮类药物作用于这三种细菌后其生长和形态特征的改变。方法 采用琼脂平板表面涂菌和试验双倍稀释法。结果 引起细菌耐喹诺酮类药物的主要原因是低浓度喹诺酮类产生耐药性。细菌经不同浓度环丙沙星作用后,产生不同程度的数量减少和形态改变。结论 大肠杆菌最容易产生喹诺酮耐药性,在环丙沙星作用后量易发生形态和耐药性改变,而不易被喹诺酮类药物杀灭。     

Preparation of Monoclonal Antibody and Development of Enzyme-linked Immunosorbent Assay Specific for Escherichia coil O157 in Foods

OBJECTIVE: To prepare monoclonal antibodies (MAb) and antisera specific for Escherichia coli (E. coli) O157, and to develop a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect E. coli O157 in foods. METHODS: Spleen cells from BALB/c mice immunized with the somatic antigen of E. coli O157:H7 were fused with murine Sp2/0 myeloma cells. The hybridoma cell line specific for E. coli O157 was established after having been subcloned. Antisera specific for E. coli O157 was prepared by intravenous injection into New Zealand rabbits with a stain of E. coli O157:H7. The sandwich ELISA was developed with the polyclonal antibody as the capture antibody and the MAb 3A5 as the detection antibody. The inoculated ground poultry meat and pasteurized milk were tested to confirm efficiency of the method. RESULTS: MAb 3A5 specific for E. coli O157 and O113:H21 belonged to subtype IgM. The ascetic titers of the antibody was 1:1x10(6). No cross-reactivity of the MAb was observed with strains of Salmonella spp, Yersinia enterocolitica, Shigella dysenteriae, etc. The purified polyclonal antibody had a titer of 1:1x10(5) with E. coli O157. The detection limit of this sandwich ELISA was 10(3)-10(4) cfu E. coli O157/mL in pure culture with a high specificity, which was characterized by every non-O157 strain with negative response. With 10h enrichment procedure, E. coli O157:H7 recovered well from inoculated ground poultry meat and pasteurized milk at levels of 0.1 cfu/g and 0.1 cfu/mL. CONCLUSION: MAb 3A5 specific for E. coli O157 and O113:H21 can be produced by immunizing BALB/c mice with a strain of E. coli O157:H7. Then a sandwich ELISA can be developed with the polyclonal antibody as the capture antibody and the MAb 3A5 as the detection antibody. The method is proved to be a sensitive and specific technique to detect low number of E. coli O157 in food.