褐藻胶对肝豆状核变性小鼠肝脏的保护作用机制研究

[摘要] 目的：研究褐藻胶对肝豆状核变性（HLD）小鼠肝脏的保护作用机制。方法：健康雄性昆明小鼠，应用铜负荷饮食法建立HLD模型。治疗组每天给予褐藻胶灌胃，对照组动物同步给予等体积的生理盐水灌胃，每日1次，连续4周。电感耦合等离子体质谱法检测尿铜含量；生化法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、血清总蛋白和白蛋白含量；HE染色观察肝细胞病理变化；Masson染色观察肝纤维化程度；TUNEL检测肝细胞凋亡；免疫组化检测肝细胞铜蓝蛋白（CER）表达水平。结果：经褐藻胶治疗后，高剂量组小鼠的尿铜含量较模型组显著降低（P<0.05），血清ALT、AST活性较模型组显著降低（P<0.05）。肝细胞变性指数、肝纤维化程度和凋亡细胞指数较模型组均显著减少（P<0.05），肝细胞CER表达水平较模型组显著升高（P<0.05）。结论：褐藻胶可能通过增强肝细胞CER的表达和促进Cu2+的排泄，减轻肝细胞变性凋亡和肝纤维化损害，改善HLD小鼠的肝功能。     

补阳还五汤对大鼠化疗相关外周神经痛的预防作用及其机制

目的观察补阳还五汤对紫杉醇诱导的大鼠外周神经痛的预防作用,并以脊髓大麻素受体为主要靶点,探讨其作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、预防组、AM630组、AM251组,每组10只。除对照组外,其余各组于实验第1,3,5,7天分别腹腔注射紫杉醇2 mg/kg;预防组在建模的同时每天予补阳还五汤2.5 g/(kg·d)灌胃干预14 d;AM630组在预防组的基础上于每天灌胃前予3 mg/kg大麻素Ⅱ型受体(CBR2)阻滞剂AM630腹腔注射;AM251组在预防组的基础上于每天灌胃前予1.5 mg/kg大麻素Ⅰ型受体(CBR1)阻滞剂AM251腹腔注射。每7 d记录1次各组大鼠体质量,并使用von fery纤维丝测试各组大鼠机械缩足阈值(MWT),共观察28 d;实验观察28 d后使用RT-PCR检测各组大鼠脊髓组织中CBR1、CBR2、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平。结果实验第7,14,21,28天,各组大鼠体质量增量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组实验第7,14,21,28天的MWT均显著低于同期对照组(P均<0.05);预防组、AM251组实验第14,21,28天的MWT均显著高于同期模型组(P均<0.05),但AM630组与模型组比较、预防组与AM251组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组CBR2、CBR1、GFAP mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),IL-1β、TNF-αmRNA表达水平明显高于对照组(P均<0.05);预防组和AM251组CBR2 mRNA表达水平明显高于模型组(P均<0.05),IL-1β、TNF-αmRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05);AM630组与模型组比较、预防组与AM251组比较各相关蛋白mRNA表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论补阳还五汤可以预防紫杉醇诱导的外周神经痛,机制可能与其激活脊髓CBR2,并进一步抑制脊髓IL-1β、TNF-α等炎症细胞因子的表达有关。     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞巢蛋白表达的影响

背景肌苷参与机体多方面的代谢过程并对缺血性脑损伤有一定的保护作用,但其机制尚需做进一步研究.目的研究大鼠缺血性脑损伤后巢蛋白(Nestin)基因表达的变化规律,探讨肌苷治疗中枢神经缺血性损伤的作用机制.设计随机对照的基础研究.地点和材料实验地点青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.实验材料成年健康雌性SD大鼠68只,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型.随机分为治疗组和对照组,每组再随机分为缺血1.5 h再灌注2,6,12,24 h,2,3,7,14 d组(n=4),另外4只作假手术组.干预所有治疗均由作者亲自操作.治疗组大鼠于缺血1.5 h再灌注前给予空腹注射肌苷注射液100 mg/kg,2次/d.对照组大鼠同步注射相同剂量的生理盐水.所有大鼠置于同样的空间笼养.主要观察指标应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织NestinmRNA的表达.结果对照组缺血侧NestinmRNA表达皮质除2h以外、纹状体除2,6 h以外、室旁区除2,6 h,14 d以外各时间点均明显高于假手术组.治疗组NesfinmRNA表达较对照组于2,6 h,7,14d在皮质,14 d在纹状体有所降低,3 d在皮质、纹状体及室旁区均显著升高,7 d仅在纹状体、室旁区显著升高.结论肌苷可以促进大鼠脑缺血再灌注后Nestin mRNA的表达,从而达到神经组织结构和功能恢复的目的.     

肌苷对脑缺血再灌注后脑组织细胞周期蛋白D1基因表达的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA的表达与神经细胞凋亡的关系以及肌苷的干预作用,从细胞增殖角度探讨肌苷的神经保护作用机制。方法:应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,腹腔注射肌苷注射液,应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别检测大鼠脑缺血再灌流不同时间点皮质区和纹状体区神经细胞CyclinD1mRNA的表达与凋亡的变化。结果:脑缺血再灌注2h后皮质区与纹状体区即出现少量凋亡神经细胞,皮质区1d达高峰(72.8±2.66)个/视野,纹状体区2d达高峰(96.75±4.37)个/视野,之后逐渐减少,至再灌注14d(5.50±0.65)个/视野接近假手术组水平(3.75±0.85)个/视野;肌苷治疗组凋亡神经细胞较对照组显著减少;脑缺血再灌流后皮质区与纹状体区的缺血周围区神经细胞CyclinD1mRNA的表达于2h逐渐增强,皮质区和纹状体区分别于12h和1d达高峰,以后逐渐下降;肌苷治疗组CyclinD1mRNA表达较对照组显著减弱。结论:脑缺血再灌流CyclinD1mRNA的表达时序先于凋亡细胞的出现,其异常表达可能诱导了神经元的凋亡。肌苷可在脑缺血再灌注后抑制CyclinD1mRNA的表达,从而减少神经细胞凋亡,起到神经保护作用。     

运动训练对大鼠脑梗死后肢体功能和GAP-43、MAP-2表达水平的影响

目的:研究运动训练能否促进大鼠局部脑缺血再灌注后的功能恢复并从神经可塑性角度探讨其机理。方法:线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO)模型,随机分为运动组、对照组、假手术组及正常组,运动组术后24h起每天游泳10min,采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复情况,免疫组化法观察脑缺血周边区生长相关蛋白-43(GAP-43)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的免疫活性强度。结果:大鼠局部脑缺血再灌注后,运动组前肢放置试验和平衡试验评分优于对照组,前肢放置试验在第9、11、13、15、17、19、21、23、25天差异具有显著性(P均<0.01),平衡试验在第7、9、11、13、17、19天差异具有显著性(P<0.01—0.05)。运动组皮层缺血周边区GAP-43和MAP-2表达水平高于对照组,前者在第7天、14天、28天差异有显著性(P<0.05),后者在第14天、28天差异有显著性(P<0.05)。结论:运动训练能促进大鼠MCAO后的肢体功能恢复,其机制可能与缺血周边区GAP-43和MAP-2的表达上调有关。     

线粒体钙单向转运体在二氮嗪预处理脑保护中的作用

目的 探讨线粒体钙单向转运体是否参与了二氮嗪预处理所发挥的脑保护作用 方法 将52只健康雄性Wistar大鼠按照完全随机方法分为4组(每组13只):A组,假手术组;B组,脑缺血/再灌注组;C组,脑缺血/再灌注+二氮嗪组;D组,脑缺血/再灌注+二氮嗪+精胺组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h再灌注24 h后观测各组神经行为变化,缺血侧脑组织线粒体钙含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性.结果 与B组比较,C组二氮嗪预处理可以改善大鼠脑缺血/再灌注引起的神经行为障碍(13.1-±0.8,P＜0.01),降低缺血侧脑线粒体钙含量(293±7)nmol/mgprot,(P＜0.05),提高SOD(143±18)U/mgprot及GSH-Px(84±8)U/mgprot活性、降低MDA(0.799±0.092)nmol/mgprot,及NO(0.216±0.138)nmol/mgprot,含量(P＜0.05).与C组比较,D组精胺可减弱二氮嗪预处理改善神经行为障碍(8.0±-0.7,P＜0.01)、降低脑线粒体钙含量(322±10)nmol/mgprot,提高SOD(128±7)U/mgprot和GSH-Px(73±6)U/mgprot活性以及降低MDA(0.955±0.141)nmol/mgprot,和NO(0.575±0.292)nmol/mgprot,含量的效应(P＜0.05). 结论 二氮嗪预处理对抗大鼠脑缺血/再灌注损伤所发挥的脑保护效应,可能与其再灌注时减少线粒体钙单向转运体的活动以减少线粒体内钙含量及过氧化损伤有关.     

海带在四氧嘧啶糖尿病大鼠模型中的降糖作用

目的探讨海带在四氧嘧啶糖尿病模型大鼠中的降血糖作用及其机制。方法健康♂Wistar大鼠60只,随机取10只作为对照组,其余50只腹腔注射四氧嘧啶建立高血糖动物模型,饲料中添加含有海带的饲料喂养干预治疗,分为低(2.5 g.kg-1)、中(10 g.kg-1)和高(25 g.kg-1)3个剂量组。自动血糖仪测大鼠空腹血糖(FBG),酶联免疫吸附法检测血清胰岛素(Insulin)水平,硫代巴比妥酸法检测血清脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO)含量,黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,化学比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果经海带治疗后,动物血清胰岛素水平较模型组升高(P<0.05),中、高剂量组动物FBG水平较模型组降低(P<0.05);其血清MDA和NO水平低于模型组,而血清SOD和GSH-Px活性高于模型组,其中中、高剂量组与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。各指标在中剂量与高剂量组之间差异无显著性(P>0.05)。结论海带可通过增强机体的抗氧化作用,促进胰岛细胞分泌功能恢复而发挥降血糖作用,其理想剂量为每日10 g.kg-1。     

鲤鱼赤小豆汤对阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量的影响

目的探讨鲤鱼赤小豆汤治疗肾病综合征的作用机制。方法成年健康Wistar大鼠50只,经大鼠尾静脉注射阿霉素制备肾病综合征模型,终点法检测实验大鼠阿霉素注射前1W、注射后每3d的12h尿蛋白排泄量,和治疗3W后血清总蛋白、白蛋白水平。结果鲤鱼赤小豆汤组12h尿蛋白排泄量从第9天开始降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);血清总蛋白和白蛋白水平升高,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),鲤鱼赤小豆汤高剂量组显著优于福辛普利组(P<0.05)。结论鲤鱼赤小豆汤高剂量组可以降低肾病综合征模型大鼠尿蛋白排泄量,提高其血清总蛋白和白蛋白水平。     

四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管活性物质表达的影响

目的研究四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管活性物质表达的影响。方法健康雌性Wistar大鼠24只，随机分为正常对照组、肾性高血压组和四逆汤治疗组，每组8只。根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型，免疫组化法测定心、脑、肾组织内皮素受体A（ETRA）、一氧化氮合酶（NOS）、血管紧张素Ⅱ（Ang—Ⅱ）、降钙素基因相关肽（CGRP）的表达。结果①各靶器官ETRA表达水平，肾性高血雎组均显著高于正常对照组（P〈O．05）；四逆汤治疗组在肾和心均显著低于肾性高血压组（P〈0．05），但在脑无显著性差异（P〉0．05）。②肾和脑iNOS表达水平，肾性高血压组显著高于正常对照组（P〈0．05）；四逆汤治疗组明显低于肾性高血压组（P〈0．01）。心脏eNOS表达水平，肾性高血压组显著低于正常对照组（P〈0．01），治疗组显著高于高血压组（P〈0．01）。③各器官CGRP表达水平，肾性商血压组较正常对照组均显著升高（P〈0．05）；四逆汤治疗组较肾性高血压组均明显降低（P〈0．01）；④Ang—Ⅱ在肾和心的表达水平，四逆汤治疗纰较肾性高血压组均明显降低（P〈0．05），但在脑无显著性差异（P〉0.05）。结论四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠肾、心、脑组织中ETRA、NOS、Ang—Ⅱ和CGRP的表达水平，发挥其血压调节作用。     

鲤鱼赤小豆汤对阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量的影响

目的探讨鲤鱼赤小豆汤治疗肾病综合征的作用机制。方法成年健康W／star大鼠50只,经大鼠尾静脉注射阿霉素制备肾病综合征模型,终点法检测实验大鼠阿霉素注射前1W、注射后每3d的12h尿蛋白排泄量,和治疗3W后血清总蛋白、白蛋白水平。结果鲤鱼赤小豆汤组12h尿蛋白排泄量从第9天开始降低,与模型组比较有显著性差异（P〈0．01）;血清总蛋白和白蛋白水平升高,与模型组比较有显著性差畀（P〈O．05）,鲤鱼赤小豆汤高剂量组显著优于福辛普利组（P〈O．05）。结论鲤鱼赤小豆汤高剂量组可以降低肾病综合征模型大鼠尿蛋白排泄量。提高其血清总蛋白和白蛋白水平。