N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶基因的克隆、表达及产物纯化

目的：从猪肾中提取RNA,从中克隆出N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶（GNE）基因,并在大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中表达。方法：从猪肾中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出GNE基因,经测序,感受态大肠杆菌E.coli DH5a转化,质粒抽提,鉴定以及大肠杆菌BL21（DE3）转化表达,通过His-tag亲和纯化（Ni Sepharose 6 Fast Flow）,G-25柱脱盐,SDS-PAGE电泳检测。结果：RNA提取物经紫外分光光度计检测OD260/OD280=1.77,说明无明显的蛋白质和酚污染。RT-PCR扩增目的片段,测序证明该基因的ORF为1 206 bp,编码402个氨基酸组成的酶蛋白（GNE）。SDS-PAGE显示,纯化蛋白为45 kD的单一条带,与基因序列推测值一致。结论：GNE基因已被成功地克隆和表达。     

新型眼用盐酸羟甲唑啉即型凝胶的制备工艺及其药物含量检测

目的:探讨盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶的制备及其药物含量的测定方法.方法:采用冷溶法,以泊洛沙姆407(F127)为主要眼用即型凝胶截体材料,0.6％的泊洛沙姆188(F68)为促渗剂,制备盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶溶液;采用高效液相色谱(HPLC)法测定眼用即型凝胶中盐酸羟甲唑啉的含量.结果:盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶最佳处方组成为21％ F127,胶凝温度为27.6℃;盐酸羟甲唑啉在线性范围为50～500 mg·L-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),日内和日间精密度良好,平均回收率为100.48％.结论:本滴眼剂处方工艺简单,质量容易控制,热可逆性好.