伤寒Ty21a-CpG佐剂减毒活疫苗诱导抗体应答的研究

目的探讨人工合成的CpG-ODN 作为佐剂对伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导小鼠产生抗体的影响.方法将不同剂量的人工合成的含CpG ODN的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂与伤寒Ty21a减毒活疫苗混合,以小鼠作为免疫动物进行免疫接种,采用试管凝集法检测免疫小鼠的血清特异性抗体滴度.结果 CpG-ODN 30μg佐剂组与不用佐剂的Ty21a减毒活疫苗相比较,应用CpG-ODN 组小鼠产生更强的抗体应答,抗体几何均数滴度相比有明显的差异.结论 CpG-ODN作为佐剂可促进伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答.     

CpG寡脱氧核苷酸作为人用疫苗佐剂的初步研究

目的：研究活化人免疫细胞的CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN)在动物模型中的疫苗佐剂活性。方法;通过体外试验确定研究人CpG-ODN的动物模型,评价人 CpG-ODM在动物模型中对HBsAg的疫苗佐剂活性。结果：CpG2006等含有5′GTCGTT3′基元的人Cp-ODN能够活化小鼠脾细胞分泌IgM和IFN－γ,而CpGT7等含有5′GTCGTC3′基元的人CpG-ODN对小鼠活性很弱,具有较强人特 异性,对两类序列均能够较好活化恒河猴B细胞。以上结果提示小鼠和恒河猴可能用作研究人CpG-ODN的动物模型。在BALB／c小鼠中含有5′GTCGTT3′基元的序列能够显著提高抗－HBs总抗体、IgG1和IgG2a亚型抗体水平,而含有5′GTCGTC3′基元的序列作用稍弱,但两者均能够显著逆转Al(OH3)对Th1类免疫应答的抑制作用,使IgG2a/IgG1从0．014提高到1左右。然而在恒河猴体内的疫苗佐剂活性较弱,CpGT7能够使特异性抗体滴度提高2倍,而CpG2006没有作用。结论：动物模型结果表明CpG-ODN是一种良好的Th11类候选人用疫苗佐剂。     

伤寒Ty21a-CpG佐剂疫苗诱导的体液免疫应答研究

目的探讨以CpG-ODN作为佐剂,对伤寒Ty21a疫苗诱导的特异性抗体应答及B细胞增殖的影响.方法分别用含CpG-ODN10μg、30μg、50μg的伤寒Ty21a疫苗于第0、14、28天灌胃免疫NLH小鼠,末次免疫后7d,分别采集各组动物血清及脾淋巴细胞.用凝集反应检测伤寒抗体效价,MTT法检测B淋巴细胞的增殖能力.结果 CpG-ODN 30μg组伤寒抗体效价及B细胞的增殖活性明显高于另外两个实验组和阳性对照组.结论 CpG-ODN可增强伤寒Ty21a疫苗诱导的特异性抗体应答及B细胞增殖.     

HIV-2 gp105重组疫苗联合免疫引起小鼠更强的免疫应答

目的：探讨应用prime-boost免疫策略进行HIV-2外膜蛋白重组鸡痘病毒与重组DNA疫苗联合免疫引起小鼠的免疫应答。方法：将HIV-2 gp105重组DNA疫苗与重组鸡痘病毒以prime-boost免疫策略,免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠脾CD4⁺、CD8⁺ T细胞亚群的数量、脾特异性CTL杀伤活性和血清抗 体滴度。结果：重组DNA疫苗和重组鸡痘病毒prime-boost免疫策略和两种疫苗单独免疫均刺激小鼠产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性及特异性抗体,联合免疫组特异性CTL杀伤活性及特异性抗体水平高于单独免疫组(P<0.05)。结论：以HIV-2 gp105重组DNA疫苗进行基础免疫、以HIV-2 gp105重组鸡痘病毒进行加强免疫的prime-boost免疫策略能诱导小鼠产生更强的特异性细胞和体液免疫应答。     

基因乙肝疫苗接种母鸡的体液免疫应答

目的：探讨基因乙肝疫苗对母鸡免疫效果的影响。方法：用基因乙肝疫苗辅以佐剂皮下注射母鸡，随后加强免疫4次，用ELISA方法检测血清中抗－HBs。结果：在初次免疫母鸡血清中检出低滴度抗体，加强免疫后，抗体水平显著上升，滴度高达1：640，并维持较长时间，其抗体水平及抗体应答持久性与注射次数与注射途径有关。此外，用乙肝疫苗加佐剂比单用乙肝疫苗免疫效果明显要好。结论：应用基因乙肝疫苗能够诱导母鸡产生针对HBsAg的特异性体液免疫应答。     

CpG-ODN对树突状细胞分泌细胞因子的影响

目的比较免疫佐剂卡介苗（BCG）、含CpG序列的寡脱氧核糖核苷酸（CpG-ODN）刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）分泌细胞因子IL-12、IL-10的水平，探讨CpG-ODN在预防膀胱肿瘤复发中的可行性。方法采用骨髓分离法分离、扩增小鼠骨髓来源DC．ELISA法检测BCG、CpG-ODN刺激DC后培养上清中IL-12、IL-10含量。结果BCG及CpG-ODN刺激DC后IL-12含量均明显增高（P〈0．01）．两组间差异无统计学意义（P〉0．05）；而IL-10含量BCG组明显高于其他各组（P〈0、01）．CpG-ODN组刺激DC后IL-10无明显变化（P〉0.05）．non-CpG-ODN刺激DC后与对照组比较IL-12、IL-10含量无明显变化（P〉0.05），表明CpG-ODN刺激DC引起的IL-12升高具有序列特异性。结论CpG-ODN可诱导DC产生Th1型细胞因子IL-12．对Th2型细胞因子IL-10影响很小．比BCG更能调节免疫应答向Th1型转换．可能在预防膀胱肿瘤复发的应用中具有良好前景。     

Eg95基因疫苗不同免疫途径的体液免疫应答比较

目的：用构建的细粒棘球蚴95(Eg95)抗原基因真核表达重组质粒pcDNA3-Eg95．直接免疫小鼠，观察其所诱导的体液免疫反应。方法：碱裂解法大量提取重组质粒。采用肌肉注射、静脉注射、皮下注射3种免疫途径和不同剂量的重组质粒免疫小鼠．用ELISA法测定小鼠血清抗体滴度。结果：在相同剂量下，重组质粒免疫小鼠刺激机体产生抗体反应强度的免疫途径依次为肌肉、皮下和静脉注射，阳性反应率由高到低依次为皮下、肌肉和静脉注射。以肌肉注射方式免疫小鼠的抗体反应维持时间较长，主要产生IgG2a为主的抗体。结论：用pcDNA3-Eg95重组质粒DNA免疫小鼠可以产生体液免疫应答。     

OmpC-HBsAg‘a’表位嵌合蛋白疫苗的构建表达及其对HBV转基因小鼠的免疫效果研究

目的：构建OmpC-HBsAg‘a’表位嵌合蛋白疫苗来研究对HBV转基因小鼠的免疫效果。方法：将HBsAg‘a’抗原决定簇主要肽段S-（124-147aa）插入到沙门氏菌外膜孔道蛋白OmpC第4 Loop区,并运用DsbA进行辅助二硫键形成,对HBV转基因小鼠免疫,激活固有免疫系统中的B-1细胞产生HBsAb。结果：HBsAg的adr‘a’表位CTSPAQGTSMF-PSCCCTKPSDGNC成功插入OmpC-HBsAg‘a’基因的588~659 bp之间,重组后的载体PCR鉴定和测序结果完全与设计相一致。IPTG诱导表达后,荧光显微镜显示3E7抗体能够识别BL21外膜表面的OmpC-HBsAg‘a’表位嵌合蛋白,用表达该蛋白的BL21直接免疫HBV转基因小鼠,能够产生HBsAb抗体。结论：OmpC-HBsAg‘a’表位嵌合蛋白在原核中表达具有天然构象,以此蛋白为基础的疫苗能够打破HBV转基因小鼠对HBsAg的免疫耐受。     

CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠和HBV转基因C57BL/6J小鼠

目的:探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对HBsAg诱导BALB/c和HBV转基因小鼠产生免疫应答的影响. 方法: 用人工合成CpG ODN与血源HBsAg联合免疫BALB/c和HBV转基因C57BL/6J小鼠,采用ELISA方法观察小鼠血清HBsAg及抗-HBs水平,用ELISPOT方法判断CpG ODN对HBsAg免疫小鼠脾T淋巴细胞分泌细胞因子的影响. 结果: CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠较HBsAg单独注射组同期抗-HBs滴度明显提高,尤其在首次免疫后6、8、12 wk,2组比较差异显著(P<0.05),联合免疫较CpG ODN单独免疫自首次免疫后4 ～16 wk差异显著(P<0.05).与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或9倍;CpG ODN,HBsAg联合免疫可诱导转基因小鼠产生抗-HBs,随时间延长,抗体滴度逐渐升高,并能使更多小鼠产生抗体,而单用HBsAg组、CpG ODN组均不能诱导抗-HBs的产生,免疫后各组血清HBsAg浓度较免疫前明显下降(P <0.05),但组间无明显差别(P>0.05),与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或11倍. 结论: CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/c小鼠产生体液及细胞免疫应答,CpG ODN ,HBsAg联合免疫可打破HBV转基因小鼠对HBsAg免疫耐受,可望成为慢性乙型肝炎的有效预防和治疗性疫苗.     

HPV6b L1 VLPs经三种途径免疫小鼠的实验研究

目的：探讨加HPV6bL1VLPs经三种途径免疫小鼠后的免疫反应，以选择机体获得免疫保护的最佳途径。方法：小鼠以鼻腔吸入、阴道免疫、肌肉注射加HPV6bL1VLPs分为三组，经间隔2w三次免疫后取血、肺冲洗液和阴道冲洗液标本，用ELISA法检测血清IgG和分泌物IgA抗体，并用血凝抑制试验检测抗体的中和作用。结果：加HPV6bL1VLPs经肌肉注射、鼻腔吸入均能诱导产生血清蜘和呼吸道、阴道粘膜的IgA抗体，经阴道免疫可产生血清IgG和阴道粘膜的IgA抗体；抗体均具有中和活性；其中肌肉注射组产生的血清IgG抗体滴度最高，鼻腔免疫产生的粘膜I醇抗体滴度最高。结论：加HPV6bL1VLPs具较强抗原性；肌肉注射和鼻腔吸入免疫可刺激小鼠产生全身和局部粘膜的中和抗体，鼻腔吸入免疫可能是诱导机体产生粘膜免疫的最佳途径。     

含CpG免疫刺激序列的质粒增强HBsAg诱导的免疫应答

目的 探讨以含有多拷贝CpG寡脱氧核苷酸的质粒作为治疗性乙肝疫苗佐剂的可行性。 方法 构建含有6个拷贝D型CpG ODN的质粒pKO-CG6,将该质粒以及载体pKO分别刺激健康人以及HBV感染者的外周血单核细胞（PBMC）,检测PBMC的增殖以及分泌的细胞因子IFN-与IL-12,进一步将重组HBsAg分别联合这两种质粒免疫小鼠,检测小鼠的细胞和体液免疫应答。结果 质粒pKO-CG6与载体pKO在体外均能有效激活健康人以及HBV感染者PBMC的增殖反应,并促进IFN-与IL-12的产生,其中pKO-CG6的免疫刺激活性明显强于载体pKO。小鼠体内试验表明,虽然载体pKO也具有免疫佐剂作用,但pKO-CG6更能显著增强HBsAg诱导的免疫应答,尤其是细胞免疫应答。 结论 含有多拷贝D型CpG ODN的质粒能有效激活HBV感染者的PBMC,并增强HBsAg在小鼠体内的免疫原性,对于治疗性乙肝疫苗具有潜在应用前景。     

Inhibitory oligodeoxynucleotide improves glomerulonephritis and prolongs survival in MRL-lpr/lpr mice

Inhibitory oligodeoxynucleotides (ODNs), which are capable of blocking CpG-induced inflammation, have been anticipated to be beneficial therapeutic agents for autoimmune diseases. In this study, we show that GpC ODN, which inverted the cytosine guanine sequence of CpG motif to guanine cytosine sequence, is an inhibitory ODN. The inhibitory effects of GpC ODN on CpG ODN-induced immune activation were confirmed by cytokine assay using splenocytes from lupus-prone MRL-lpr/lpr mice. In vivo, injecting MRL-lpr/lpr mice with GpC ODN did not reduce the deposition of IgG and C3 in the glomeruli, the serum level of IL-12, the serum level of rheumatoid factors and anti-ds DNA antibody, or alter the composition of IgG isotypes of anti-ds DNA antibody. However, the mice in the GpC group showed less proteinuria, significantly lower blood urea nitrogen levels (BUN) and significantly prolonged survival. Our results suggest that inhibitory ODNs, such as GpC ODN, have the potential to become a treatment for autoimmune diseases, like lupus nephritis.     

Regulating Effects of Novel CpG Chitosan-nanoparticles on Immune Responses of Mice to Porcine Paratyphoid Vaccines

INTRODUCTION CpG oligodeoxynucleotide is a newly emerging powerful adjuvant inducing a broad array of immune responses to a wide variety of antigens. Previous studies showed that CpG motifs activate B cells and dendritic cells (DC), trigger immune cascade…     

含CpG基序的寡核苷酸对乙型肝炎病毒基因疫苗的细胞免疫效应的影响

目的探讨人工合成的CpG ODN作为佐剂对乙肝病毒基因疫苗诱导小鼠产生细胞免疫应答的影响.方法构建编码乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原蛋白S的重组真核表达质粒pCR3.1-S作为HBV基因疫苗,人工合成含CpG基序(motif)的硫代磷酸寡核苷酸(CpG ODN)作为佐剂,观察其对HBV基因疫苗接种Balb/c小鼠诱导产生淋巴细胞增殖和淋巴细胞杀伤等细胞免疫应答的影响.结果与空载体对照组相比较,HBV基因疫苗诱发Balb/c小鼠产生较好的HBV特异的淋巴细胞增殖及杀伤效应(P＜0.05);应用CpGODN组与未应用组相比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞免疫应答(P＜0.05).结论CpG ODN作为佐剂,对HBV基因疫苗诱导Balb/c小鼠产生细胞免疫应答具有促进作用.     

佐剂CpG ODN对HBV基因疫苗诱导抗体产生的影响

目的 探讨人工合成的ＣｐＧ ＯＤＮ作为佐剂对乙肝病毒基因疫苗诱导小鼠产生抗ＨＢｓ的影响。方法 构建编码乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原蛋白Ｓ的重组真核表达质粒ｐＣＲ３．１－Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,人工合成含ＣｐＧ ｍｏｔｉｆ的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂,以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作为实验动物进行免疫接种,采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠的抗ＨＢｓ应答。结果 与生理盐水作为佐剂组相比较,应用ＣｐＧ ＤＯＮ组小鼠产生更     

脂质体包裹CpGODN和肿瘤抗原治疗肝癌的免疫效应

目的探索脂质体、CpG寡核苷酸（ODN）以及Hepa1-6肝癌细胞裂解物联合应用治疗肝癌的免疫效果。方法建立C57BL／6小鼠肝癌模型,以PBS、ODN＋rtep（肝癌细胞Hep）,Lip（Lipofectamine脂质体）＋HDN＋Hep荷瘤鼠背部皮下注射,各组小鼠肝脏HE染色,FCM检测小鼠脾脏CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-FITC、NKl．1-FITC的组成,ELISA法测免疫小鼠血清中IFN-Y、IL-4水平。结果脂质体包裹CpGODN＋Hepa1-6肝癌细胞裂解物中CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-F1TC、NKl．1-FITC的体外杀伤活性以及荷瘤小鼠血清中IFN-7、IL-4水平均显著高于CpGODN＋Hep组以及PBS组。结论脂质体包裹CpGODN＋Hep能显著提高机体的免疫功能,尤其是特异性细胞免疫功能。     

CpG ODN增强乙肝疫苗免疫反应的研究

目的研究人工合成的CpG ODN对乙肝表面抗原的免疫增强效应,评价CpG ODN的佐剂效应。方法将不同剂量特定的CpG ODN与乙肝表面抗原联合免疫小鼠,用ELISA检测小鼠乙肝表面抗体的滴度。结果CpG ODN联合乙肝表面抗原免疫小鼠,在短期检测中,高剂量组能较快的达到检测阈,各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性（P〈0．05）,在长期检测中,各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性（P〈0．05）,检测值随CpG剂量的增高而增大。结论CpG ODN增强乙肝表面抗原的免疫反应短期和长期都具有剂量效应。