糖基化终产物对心肌微血管内皮细胞表达MCP-1和ICAM-1的影响及机制研究

目的：观察体外孵育的牛血清白蛋白（BSA）非酶促糖基化终末产物（AGEs）对心肌微血管内皮细胞细胞间黏附分子（ICAM-1）和单核细胞趋化因子-1（MCP-）表达的影响及机制．方法：取50g／L牛血清白蛋白（BSA）、500g／LD-葡萄糖,于37℃孵箱内避光孵育12wk,制备外源性AGEs-BSA．体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）．分设不同浓度梯度的AGEs实验组、BSA对照组,采用ELISA法测定MCP-1的表达,流式细胞术测定ICAM-1的表达,Western Blot法测定糖基化终末产物受体蛋白（RAGE）的表达,RT-PCR检测RAGE mRNA的表达．结果：100,200,400mg／L AGEs可显著增加心肌微血管内皮细胞ICAM-1（13．2％,14．5％,38．1％）,MCP—1[（52．5±5．5）,（116．0±3．1）,（139．6±8．7）μg/L]的表达（与对照组相比较,P〈0．05）,且在蛋白水平及mRNA水平均明显增加RAGE的表达（P〈0．05）,并呈浓度依赖性．结论：AGE—BSA可刺激心肌微血管内皮细胞过量表达ICAM-1和MCP-1,从而加速心肌微血管炎症的发生与发展．其机制可能是AGEs上调了心肌微血管内皮细胞RAGE的表达．也进一步证实了AGEs—RAGE信号系统的起动是糖尿病心肌微血管病变发生发展一个重要原因．     

厄贝沙坦对AngⅡ介导的肾小球系膜细胞核因子-κB活化及MCP-1表达的影响

目的 观察不同剂量厄贝沙坦(Irb)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的肾小球系膜细胞(GMC)核因子-κB(NF-κB)活化及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的影响,探讨Irb抑制GMC炎症因子表达的可能机制.方法 分离培养大鼠GMC,用10-6mol/L Ang Ⅱ刺激后将其随机分为5组(n=4):对照组、Ang Ⅱ刺激组、Ang Ⅱ和3种不同浓度(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)的Irb共孵育组.分别采用ELISA法及半定量RT-PCR法检测细胞培养上清液中MCP-1、I κB、NF-κB的表达水平和GMC内MCP-1 mRNA的表达水平,并在酶联免疫激光扫描共聚焦显微镜下观察GMC内NF-κB p65核易位情况,计算核易位阳性率.结果 与Ang Ⅱ刺激组比较,其他各组MCP-1、I κB、NF-κB水平及MCP-1 mRNA表达均明显较低(P<0.05或0.01);与低浓度Irb组比较.高浓度Irb组MCP-1、IκB、NF-κB、MCP-1 mRNA表达及中浓度Irb组MCP-1水平均明显较低(均P<0.05);与中浓度Irb组比较,高浓度Irb组MCP-1、IκB、NF-κB水平及MCP-1mRNA表达均明显较低(均P<0.05).结论 Irb可能是通过抑制NF-κ B的活化,降低GMC MCP-1的表达以减少肾小球系膜区单核细胞的浸润,从而减轻肾小球炎症反应.     

祛风通络方对高糖诱导人肾小球系膜细胞炎性反应的影响机制研究

目的 观察祛风通络方对高糖诱导人肾小球系膜细胞炎性反应的影响.方法 体外培养人肾小球系膜细胞株并采用25.0 mmol/L高糖DMEM诱导其增殖,设立正常组、模型组、抑制剂组、祛风通络组,ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1的表达水平,real-time PCR法测定白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、相对分子量为38×103的促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)mRNA的表达,Western blot法检测ICAM-1、MCP-1、p38 MAPK的表达.结果 与正常组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平增加(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、ICAM-1、MCP-1、p38 MAPK mRNA相对表达水平升高(P<0.05),p38 MAPK、ICAM-1、MCP-1的相对表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,祛风通络组IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平下降(P<0.05),IL-1β、TNF-α、TGF-β1、ICAM-1、MCP-1、p38 MAPK mRNA相对表达水平降低(P<0.05),MCP-1的相对表达水平降低(P<0.05).与抑制剂组比较,祛风通络组p38 MAPK、IL-1β、IL-6、TGF-β1 mRNA相对表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)结论祛风通络方可以明显改善高糖诱导人肾小球系膜细胞的炎性反应,减少IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、MCP-1、ICAM-1的表达,这一过程可能是通过p38 MAPK信号通路实现的.     

洛伐他汀对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-10表达的影响

目的：观察洛伐他汀(LVT)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和白细胞介素-10 (IL-10)表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：体外常规培养HUVECs,分为对照组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液培养;TNF-α处理组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液+TNF-α (20 μg/L) 处理;应用活性氧检测试剂盒检测活性氧含量;LVT干预组,用含10% FBS的 RPMI 1640 培养液+TNF-α (20 μg/L)+LVT (10 μmol/L) 处理。实时定量RT-PCR方法检测各组细胞MCP-1和IL-10 mRNA的表达;Western blotting方法检测各组HUVECs内MCP-1、IL-10和NF-κB蛋白表达。结果：与对照组相比较,TNF-α处理组ROS含量明显增高 (P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组ROS含量明显降低(P<0.05);与对照组比较,TNF-α处理组MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组细胞MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：LVT抑制HUVECs中TNF-α诱导的MCP-1 mRNA和蛋白上调,增强IL-10蛋白表达。LVT可能通过NF-κB途径对抗炎症反应从而防止AS的形成。
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糖肾康对糖尿病肾病气阴两虚血瘀证患者血清MCP-1和ICAM-1水平的影响

目的 观察糖肾康对糖尿病肾病（DN）气阴两虚血瘀证患者血清单核细胞趋化性蛋白-1（MCP-1）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）指标的影响,研究糖肾康对其干预作用。方法 将66例Ⅲ-Ⅳ期DN气阴两虚血瘀证患者随机分为两组（治疗组33例,对照组33例）,失访3例,实际完成治疗组32例和对照组31例,并设正常组20例。对照组给予常规降糖、降压治疗,治疗组在对照组基础上加用糖肾康,两组疗程均为8周。观察临床疗效、治疗前后尿白蛋白/尿肌酐（ACR）、血清MCP-1及ICAM-1水平的变化情况。结果 治疗组临床疗效优于对照组（P<0.01）;治疗后两组ACR水平均降低（P<0.01）,治疗组下降幅度优于对照组（P<0.01）。血清MCP-1、ICAM-1水平均较正常组显著升高（P<0.01）;治疗后,治疗组和对照组均能降低MCP-1、ICAM-1水平（P<0.01）,治疗组下降幅度均优于对照组（P<0.05）。结论 糖肾康可改善气阴两虚血瘀证DN患者的临床症状,减少尿蛋白,降低血清MCP-1、ICAM-1水平,从而抑制免疫炎症反应,具有保护肾脏、延缓肾脏病进程的作用。     

糖痹康对糖尿病大鼠细胞因子表达的影响

目的 观察糖痹康对糖尿病大鼠肿瘤坏死因子（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白（MCP-1）、血管细胞粘附分子1（VCAM-1）、血氧化低密度脂蛋白（oxLDL）及细胞间粘附分子1（ICAM-1）表达影响。方法 采用高脂饲料喂养SD大鼠,注射STZ诱发2型糖尿病模型,给予糖痹康干预16周后,采集腹主动脉血和大鼠一侧坐骨神经样本,采用ELISA法检测血清细胞因子含量,Western blot法检测坐骨神经组织中MCP-1、VCAM-1及TNF-α表达。结果 与正常组相比,模型组大鼠坐骨神经组织TNF-α、VCAM-1和MCP-1蛋白表达以及血清中oxLDL、ICAM-1、VCAM-1、TNF-α和MCP-1含量均显著升高(P<0.01);与模型组相比,糖痹康可显著降低组织和血清中细胞因子表达(P<0.05～0.01),且呈现剂量依赖性。结论 糖痹康可下调STZ诱导的糖尿病大鼠血清TNF-α、oxLDL、ICAM-1、VCAM-1及MCP-1的含量和坐骨神经中VCAM-1、TNF-α、MCP-1蛋白表达,这可能是糖痹康对糖尿病周围神经病变神经保护的机制之一。      

单宁酸对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨单宁酸（GLTN）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖的抑制作用及对细胞周期的影响,阐明GLTN对糖尿病肾病（DN）发生发展的延缓作用。方法：实验细胞分成正常糖对照组（D-葡萄糖5.5 mmol·L^-1,NC组）、高糖组（D-葡萄糖30 mmol·L^-1,HC组）、高糖+5 mmol·L^-1 3-氨甲苯甲酰胺（3-AB,AB组）、高糖+20 μmol·L^-1GLTN（G20组）和高糖+40 μmol·L^-1 GLTN（G40组）。MTT法观察不同时间点（4、8、24、48和72 h ）各组GMC的增殖情况,流式细胞术观察细胞周期,Western blotting法检测转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达情况。结果：与NC组比较,高糖组GMC增殖水平升高（P<0.01）,于48 h时达高峰;S期细胞百分比明显升高（P<0.01）。与HC组比较,各给药组GMC增殖水平均明显下降（P<0.01）,S期细胞百分比降低（P<0.01）。与NC组比较,各给药组S期细胞百分比明显升高（P<0.05或P<0.01）,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,但与HC组比较明显下降（P<0.01）。结论：单宁酸可通过阻滞细胞周期,下调TGF-β1和CTGF的表达,抑制高糖诱导的大鼠GMC的增殖,从而对DN的发生发展起到一定的延缓作用。     

糖基化终末产物对肠道L细胞株胰高血糖素肽－1分泌水平及L细胞凋亡的影响

目的：探讨糖尿病糖基化终末产物（ AGEs）对肠道L细胞株GLUTag细胞凋亡及胰高血糖素肽－1（ GLP－1）分泌水平的影响。方法200μg／mL AGEs分别作用GLUTag细胞0、12、24、48 h,采用AnnexinⅤ－FITC／PI染色检测细胞凋亡率。利用ELISA检测GLUTag细胞GLP－1分泌水平。实验分5组：空白对照组不加入干预因素,仅培养于DMEM低糖培养基中;BSA对照组培养于加入BSA的DMEM低糖培养基中;AGEs 100μg／mL组培养于100μg／mL AGEs浓度的DMEM低糖培养基中;AGEs 200μg／mL组培养于200μg／mL AGEs浓度的DMEM低糖培养基中;AGEs 300μg／mL组培养于300μg／mL AGEs浓度的DMEM低糖培养基中,分别作用细胞24 h。采用AnnexinⅤ－FITC／PI染色检测细胞凋亡率。利用ELISA检测GLUTag细胞GLP－1分泌水平。结果各组细胞经药物干预24 h后,100、200、300μg／mL AGEs组的细胞凋亡率均显著高于空白对照组和BSA对照组（ P＝0.000）;且300μg／mL AGEs组的细胞凋亡率最高（P＜0.05）,100、200、300μg／mL AGEs组的细胞分泌GLP－1浓度显著低于空白对照组和BSA对照组（P＝0.000）,且300μg／mL AGEs组最低（P＜0.05）。200μg／mL AGEs作用12、24、48 h后的细胞凋亡率显著高于BSA对照组（P＝0.000）,且作用48 h组凋亡率最高（P＝0．000）;200μg／mL AGEs作用12、24、48 h后的细胞分泌GLP－1浓度均显著低于BSA对照组（P＝0．000）;且作用48 h最低（P＜0.05）。结论肠道L细胞株GLUTag细胞的凋亡在相同作用时间下随着AGEs的浓度升高而增多,且在相同剂量下随着AGEs的作用时间延长而增多。 AGEs可呈剂量、时间依赖性诱导肠道L细胞凋亡,并显著降低L细胞分泌GLP－1的能力。     

糖肾康对DN模型大鼠血清MCP-1和ICAM-1水平的影响

目的 :观察糖肾康对糖尿病肾病(DN)大鼠血清中单核细胞趋化性蛋白-1(monocytechemotaticprotein-1,MCP-1)、细胞间粘附分子-1(intercellularcelladhesionmolecule-1,ICAM-1)的影响,探讨糖肾康防治DN模型大鼠的作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为正常组(n=8)和造模组(n=32)。以三联法(手术+高糖高脂饮食+链脲佐菌素)诱导产生DN大鼠模型,造模过程中死亡5只,余下27只模型大鼠随机分为模型组(n=9)、贝那普利组(n=9)和糖肾康组(n=9)。糖肾康组按0.8g/100g·d灌胃,贝那普利组按0.15mg/100g·d灌胃,正常组及模型组给予等量温水灌胃,连续灌胃给药8周。观察各组大鼠尿白蛋白/尿肌酐(ACR)、肾脏组织病理及血清MCP-1、ICAM-1水平变化。结果糖肾康可消减DN模型大鼠的ACR水平(P0.01),改善肾脏病理形态损害。模型组、贝那普利组和糖肾康组血清MCP-1、ICAM-1水平均高于正常组(P0.01);与模型组比较,治疗后贝那普利组与糖肾康组血清MCP-1、ICAM-1水平明显降低(P0.01),糖肾康组和贝那普利组比较无显著性差异(P0.05)。结论糖肾康可有效减少DN模型大鼠尿蛋白,减轻肾脏病理形态损害,其机制可能与降低血清MCP-1、ICAM-1水平,抑制肾脏免疫炎症反应有关。     

罗格列酮对高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞β1整合素、ICAM-1表达的影响

目的观察过氧化脂质体增殖激活受体γ（PPARγ）激动剂噻唑烷二酮类化合物（罗格列酮，RGZ）对高糖刺激大鼠肾小球系膜细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和β1整合素表达的影响，了解PPARγ与粘附分子的关系。方法体外培养大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞，分为9组：正常糖组，高糖组，甘露醇组，正常糖及高糖加1、5、10μmol／L罗格列酮组。干预作用24h后采用细胞免疫组化染色检测ICAM-1表达，间接免疫荧光染色及流式细胞仪检测β1整合素表达。结果高糖刺激使系膜细胞ICAM-1、β1整合素表达增加，且不依赖于渗透压。罗格列酮能够抑制正常糖和高糖诱导的系膜细胞ICAM-1、β1整合素表达；高糖组罗格列酮抑制作用更强，且呈剂量依赖性。β1整合素与ICAM-1呈正相关。结论粘附分子参与了糖尿病肾病（DN）发病机制，PPARγ激动剂罗格列酮可能通过对高糖刺激粘附分子表达的抑制效应而影响DN系膜扩张和肾小球硬化过程。     

替米沙坦对AGEs诱导人内皮细胞表达VCAM-1及MCP-1的作用和机制

目的 通过观察替米沙坦对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的人脐静脉内皮细胞表达血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,研究替米沙坦对AGEs所致动脉粥样硬化(AS)的干预作用和机制.方法 采用胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞,分为4组:空白对照组,牛血清白蛋白(BSA)对照组,AGEs诱导组(10-4~10-1mg/mL),AGEs+替米沙坦组(1、10、100 nmol/L).活性氧检测试剂盒检测及倒置荧光显微镜观察细胞内活性氧含量,RT-PCR检测VCAM-1、MCP-1及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的mRNA.结果 AGEs组人内皮细胞内活性氧荧光强度增强,替米沙坦干预后降低;AGEs呈浓度依赖性地增强人内皮细胞对VCAM-1和MCP-1基因的转录,与空白对照组相比,AGEs(10-4mg/mL)组VCAM-1和MCP-1 mRNA表达水平显著增高(0.24±0.01 vs 0.07±0.02;0.25±0.01 vs 0.18±0.03,P<0.05);替米沙坦呈浓度依赖性地抑制人内皮细胞对VCAM-1和MCP-1基因的转录,与AGEs诱导组相比,替米沙坦(10 nmol/L)组人内皮细胞的VCAM-1和MCP-1基因转录水平显著降低(0.23±0.01 vs 0.85±0.11;0.62±0.10 vs 1.05±0.04,P<0.05);与AGEs诱导组相比,替米沙坦(1 nmol/L)组人内皮细胞RAGE基因表达水平显著降低(0.64±0.03 vs 1.18±0.10,P<0.05).结论 AGEs增强人内皮细胞表达VCAM-1和MCP-1;替米沙坦可能通过抑制RAGE表达来抑制AGEs诱导的人内皮炎性损伤.     

红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响

目的：探讨红参发酵产物（FRGE）对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖和细胞外基质（ECM）降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病（DN）的防治作用及可能机制。方法：将GMCs分为正常对照（NG）组、高糖（HG）组、高糖＋不同浓度（3.75、7.50和15.00 mg·L^-1）FRGE组。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）的水平,蛋白免疫印迹技术（Western blotting）检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制物2（TIMP-2）蛋白表达水平。结果：与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高（P<0.01）,Col Ⅳ水平升高（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）;与HG组比较,高糖＋不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低（P<0.01）,Col Ⅳ水平降低（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）。结论：FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。     

α-硫辛酸对高糖诱导的人外周血单个核细胞MCP-1、ICAM-1表达的影响

目的探讨 α-硫辛酸（ALA）对体外高糖（HG）刺激的人外周血单个核细胞（PBMC）中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）水平的影响。方法在体外条件下采用正常糖组（NG组）、高渗组（HS组）、HG组和HG＋不同浓度ALA组（ALA50组、ALA100组、ALA250组）与人PBMC共同培养24h和48h,并分别测定各组细胞培养上清液中MCP-1、ICAM-1蛋白的浓度。结果（1）HG组各时段的细胞培养上清液中MCP-1和ICAM-1蛋白水平均较NG组显著增高（均P〈0.01）;（2）ALA100组和ALA250组培养48h时的细胞上清液中MCP-1蛋白水平均较HG组显著降低（均P〈0.01）,且两组MCP-1蛋白水平均较培养24h时降低（均P〈0.05）,而ALA250组各时段的蛋白水平均较ALA100组降低（均P〈0.01）;（3）ALA100组和ALA250组各时段的细胞培养上清液中ICAM-1蛋白水平均较HG组显著降低（均P〈0.01）,而两组各时段ICAM-1蛋白水平的差异则无统计学意义（均P〉005）,ALA250组各时段的蛋白水平均较ALA100组降低（均P〈0.01）。结论HG可刺激人PBMC中MCP-1、tCAM-1蛋白分泌水平增高;ALA则可降低MCP-1、ICAM-1蛋白的表达,目其疗效与药物浓度和作用时间相关。     

EGCG对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子调控的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子（MCP-1和ICAM-1）分泌的影响。方法通过体外培养的大鼠系膜细胞进行研究。设立低糖对照组（NG）和高糖组（HG、E100、E200、E400,为分别含EGCG0、100、200、400μg·L^-1,分别培养12、24、48h。CCK细胞计数法检测不同浓度EGCG作用下大鼠系膜细胞的OD值,判断细胞增殖情况。采用ELISA方法检测培养细胞上清中MCP-1和ICAM-1蛋白浓度。结果EGCG能抑制高糖时系膜细胞的增殖活性,其抑制作用呈剂量和时间依赖的方式。系膜细胞处于高糖环境时,MCP-1和ICAM-1蛋白表达上调,低浓度的EGCG对MCP-1和ICAM-1蛋白的抑制效果不明显,高浓度的EGCG能明显抑制MCP-1和ICAM-1的分泌。结论在体外高糖条件下,大鼠系膜细胞在48h内以增殖为主,一定浓度的EGCG可抑制其增殖。EGCG可在蛋白水平抑制高糖刺激的大鼠系膜细胞MCP-1和ICAM-1的分泌。     

AGEs对人腹膜间皮细胞FN和CTGF的合成和表达作用研究

目的 观察糖基化终末产物（AGEs）对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.方法 分别以不同浓度的AGEs（0、200、600、1 000mg/L）刺激HPMC 48h后,用RT-PCR法检测FN的表达情况.同时将体外培养的HPMC分为正常组（未加任何刺激因素）和AGEs组（终浓度为600mg/L）,两组均予刺激HPMC48h后,用RT-PCR及ELISA法检测细胞内FN和CTGF mRNA及蛋白的表达水平.结果 AGEs呈剂量依赖性上调HPMC FN mRNA的水平;AGEs组FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平均较正常组明显增加（P＜0.05或0.01）.结论 AGEs可诱导体外培养HPMC的FN、CTGF基因和蛋白高表达.     

蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组(LPS5mg/L)和蟾蜍灵干预组(LPS5mg/L和蟾蜍灵1×10-8mol/L),应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,通过MTT、流式细胞技术检测GMC增殖变化,RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA的表达,ELISA法检测GMC培养上清中纤维连接蛋白(FN)及TGF-β1的表达.结果:MTT结果显示蟾蜍灵浓度在1×10-8mol/L及以上时呈剂量依赖性抑制GMC增殖(P<0.01).细胞周期分析显示蟾蜍灵组S期细胞比例较脂多糖组降低(P<0.01).蟾蜍灵干预组与脂多糖组相比TGF-β1的mRNA相对表达量减少(P<0.05),FN,TGF-β1蛋白分泌量减少(P<0.01).结论:蟾蜍灵对LPS作用后肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌具有抑制作用.     

白附子提取物对胶质瘤细胞的生长抑制作用及其机制

目的：研究白附子提取物对体外培养的脑胶质瘤细胞生长的影响,初步探讨其抑制胶质瘤细胞生长的机制。方法：培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,分为空白对照组和不同剂量(8、40、200和1 000 μg/L)白附子提取物组,MTT法检测白附子提取物对SHG-44细胞生长的抑制作用,ELISA法检测细胞分泌Bax和caspase-3蛋白水平,Western blotting法检测细胞中caspase-3蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,24 h时200和1 000 μg/L白附子提取物组、48 h时8、40、200和1　000 μg/L白附子提取物组细胞的生长抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）;48 h时白附子提取物组细胞分泌Bax和caspase-3蛋白水平均呈上升趋势,40、200 和1 000 μg/L白附子提取物组与空白对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;不同剂量白附子提取物组SHG-44细胞caspase-3蛋白表达水平随白附子提取物剂量的增加呈上升趋势,与空白对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：白附子提取物通过上调Bax蛋白表达水平,使caspase-3表达水平增加,激活凋亡通路,抑制细胞生长。     

小白菊内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的探讨小白菊内酯（PTL）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖、核因子-κB（NF-κB）活性和单核细胞趋化蛋
白-1（MCP-1）表达的影响。方法采用正常葡萄糖组（糖浓度为5.6 mmol/L）和高糖组（糖浓度为30 mmol/L）、高糖+PTL组,分
别体外培养大鼠肾小球MC,MTT法检测MC的增殖,ELISA法检测培养液上清中MCP-1的浓度,Western Blot法检测IκBα反
映NF-κB的活性,EMSA法检测NF-κB的活性。结果高糖诱导后MC增殖、MCP-1表达和NF-κB活性明显增强,NF-κB结合蛋
白IκBα明显降解;应用PTL干预后,MC增殖、MCP-1表达和NF-κB活性均明显降低,IκBα降解被抑制。结论PTL能抑制高糖
诱导的肾小球MC NF-κB活化及MCP-1的表达,从而为PTL用于临床防治糖尿病肾病提供了一定的理论依据。
     

酸味中药复方对糖尿病大鼠主动脉ICAM-1基因表达的影响

目的探讨酸味中药复方防治糖尿病血管病变的机制。方法采取腹腔注射小剂量链脲佐菌素配合高热量饮食的方法复制2型糖尿病大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、模型组、氨基胍（AG）组和中药组。给药8周和12周末处死大鼠,采用荧光法和原位杂交法分别检测大鼠主动脉晚期糖基化终产物（advancedglycation end products,AGEs）含量和细胞间黏附因子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）基因表达。结果模型组大鼠主动脉AGEs含量和ICAM-1基因表达量均显著高于正常组（P〈0.05）;中药组和AG组主动脉AGEs含量和ICAM-1基因表达量显著低于模型组（P〈0.05）。结论酸味中药复方可能通过降低糖尿病大鼠主动脉AGEs含量、下调ICAM-1 mRNA的过度表达达到延缓和治疗糖尿病血管病变的目的。     

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞基质金属蛋白酶2活性和表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性和表达的影响。 方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,糖化牛血清白蛋白作为刺激物,未经糖化的牛血清白蛋白及常规培养作为对照,分别用含100 mg•L^-1 AGEs（AGEs组）、100 mg•L^-1牛血清白蛋白（BSA组）和不含刺激物（DMEM组）的无血清DMEM培养基,作用于系膜细胞48 h后,酶谱法检测各组系膜细胞上清MMP-2活性,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测系膜细胞MMP-2 mRNA的表达。 结果：与BSA组及DMEM组比较,AGEs组系膜细胞MMP-2 mRNA的表达明显下降(P<0.01),上清MMP-2活性明显降低(P<0.01)。 结论：AGEs能降低大鼠肾小球系膜细胞MMP-2的活性和表达。