生长因子(EGF和PDGF-BB)对小鼠骨髓基质干细胞增殖的作用及其意义

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和血小板源生长因子(platet-derived growth factor,PDGF-BB)对体外培养的小鼠骨髓基质干细胞(murine bone marrow stromal stem cells,mMSCs)增殖的作用,探索小鼠骨髓基质干细胞体外快速增殖的条件和方法.方法将小鼠骨髓基质干细胞进行分离和纯化培养后,加入EGF和PDGF-BB,利用3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入反映细胞增殖效果,倒置显微镜下观察细胞增殖及分化状态.结果EGF和PDGF-BB干预后,3H-TdR掺入(11456.14±968.86)dpm较对照组(3271.88±420.91)dpm明显增高,说明EGF和PDGF-BB可促进小鼠骨髓基质干细胞的增殖;倒置显微镜下观察可见EGF和PDGF-BB处理组mMSCs具有增殖优势,分化相对延迟,而对照组提前显示出自然分化现象.结论生长因子(EGF和PDGF-BB)可促进小鼠骨髓基质干细胞的增殖,是小鼠骨髓基质干细胞体外大量培养和快速增殖的有效刺激因子.     

Effectiveness of in vitro fertilization with intracytoplasmic sperm injection for severe male infertility

BACKGROUND: In its 1993 report the Canadian Royal Commission on New Reproductive Technologies challenged the effectiveness of in vitro fertilization for severe male infertility. To address the Commission's concern, the authors compared the relative effectiveness of in vitro fertilization combined with intracytoplasmic sperm injection for severe male infertility and conventional in vitro fertilization for complete tubal occlusion in women. METHODS: This historical cohort study was done at the PROCREA Fertility Centre, a private tertiary human reproduction centre in Montreal. Three groups of infertile couples were compared: 122 couples with severe male infertility treated by in vitro fertilization with intracytoplasmic injection of fresh sperm from ejaculate (group 1); 27 couples with obstructive azoospermia treated by in vitro fertilization with intracytoplasmic injection of epididymal sperm (collected by microepididymal or percutaneous epididymal sperm aspiration) (group 2); and 98 couples with tubal factor infertility (bilateral tubal occlusion) treated with conventional in vitro fertilization (with sperm from ejaculate) (group 3). The main outcomes measured were rates of fertilization, pregnancy, clinical pregnancy and implantation. RESULTS: Pregnancy rates per started cycle were 35%, 40% and 34% for groups 1, 2 and 3 respectively. When prognostic factors were controlled for, none of the outcome measures differed significantly between the 3 groups. INTERPRETATION: In vitro fertilization with intracytoplasmic injection of sperm from the ejaculate or the epididymis is as effective for treating severe male infertility as conventional in vitro fertilization is for treating complete occlusion of the fallopian tubes in women.     

人类中脑神经祖细胞的体外扩增及诱导分化

目的：探讨人类中脑祖细胞体外分离、培养及向多巴胺能神经元诱导分化的方法。方法：利用neurosphere法，在低氧分压的情况下建立中脑祖细胞克隆，并用纹状体培养上清对其进行诱导分化，观察TH阳性神经元的分化比率及成熟度。结果：中脑来源的神经祖细胞克隆，能以neurosphere形式生长，低氧分压对其克隆生长具有促进作用；纹状体培养上清可增加TH阳性神经元的分化比率，并能使TH阳性细胞具有更成熟的多巴胺能神经元的形态特征。结论：低氧分压更适于中脑神经祖细胞的体外扩增，纹状体培养上清对中脑祖细胞向多巴胺能神经元的分化及成熟具有促进作用。     

体外血脑屏障模型的建立

目的:利用自发转化的人脐静脉内皮细胞系ECV304和分离纯化的大鼠星形胶质细胞共培养试图建立一种具有重复性好、细胞纯度高、培养操作简便、接近在体状态的体外血脑屏障模型。方法:分3步:(1)分离纯化培养大鼠星形胶质细胞;(2)建立体外血脑屏障BBB模型(内皮细胞系/星形胶质细胞非接触共培养);(3)模型鉴定。结果:利用ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立的血脑屏障模型无论是在形态学、屏障功能上还是内皮细胞的特异性标志物的表达水平上都与在体血脑屏障的特性相似。结论:可以利用ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型。     

可溶性肿瘤抗原对小鼠CD_3AK细胞生物免疫功能的影响

目的:观察可溶性肿瘤抗原(STA———由S180 细胞提取)对小鼠CD3AK细胞的体外增殖、体外杀瘤活性以及体内抑瘤作用的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),分别检测小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性和杀瘤效应细胞体外杀瘤活性,并通过测定实体瘤质量来分析杀瘤效应细胞的体内抑瘤作用。结果:STA协同增强小鼠CD3 单抗诱导的小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性。由STA联合小鼠CD3 单抗共同诱导的T- AK细胞,不仅在体外对S180 细胞杀瘤活性强于CD3AK细胞,且在小鼠体内抑制S180 肿瘤细胞的生长和扩散作用也强于CD3AK细胞。结论:STA能增强小鼠CD3AK细胞的体外增殖活性和杀瘤活性     

聚醚醚酮/碳纳米管/生物活性玻璃复合材料的成骨细胞相容性研究

目的:探讨新型聚醚醚酮/碳纳米管/生物活性玻璃(PEEK/CNTs/BGs)复合材料的体外成骨细胞相容性。方法:体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,通过噻唑蓝法、吖啶橙荧光染色法研究PEEK/CNTs/BGs复合材料对成骨细胞增殖的影响。应用扫描电镜(SEM)观察MC3T3-E1细胞在PEEK/CNTs/BGs复合材料表面的黏附生长情况。结果:MC3T3-E1细胞在PEEK/CNTs/BGs复合材料表面的增殖能力较聚醚醚酮和聚醚醚酮/碳纳米管(PEEK/CNTs)复合材料强。SEM实验结果表明,PEEK/CNTs/BGs复合材料表面有利于MC3T3-E1细胞黏附、铺展和生长。结论:PEEK/CNTs/BGs复合材料具有良好的成骨细胞相容性,有望作为新型骨科材料。     

螺内酯对体外培养的人毛囊影响的实验研究

目的：观察螺内酯（spironllactone）对体外培养的人毛囊生长的影响。方法：建立人毛囊体外培养模型，加入不同浓度的螺内酯，通过目镜测微尺测量毛囊的长度，利用^3H-胸腺嘧啶核苷酸（^3H-TdR）掺入法检测毛囊DNA合成率。结果：螺内酯各浓度组毛囊生长长度与空白对照组相比无明显差异（P〉0．05）。^3H-TdR掺入法检测与长度检测结果一致。结论：螺内酯对体外培养的人毛囊的生长无促进和抑制作用。     

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL—10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH／3T3细胞，应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较，采用MTS／PES法确定NIH／3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH／3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH／3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下，一定剂量的rhIL-10可抑制NIH／3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH／3T3细胞大部分处于G0／G1期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

硫酸长春新碱PLGA微球的制备及其性质

目的 采用W／O／O溶剂挥发法制备硫酸长春新碱PLGA微球,评估添加剂碳酸锌对微球形态及药物释放速率的影响。方法测定硫酸长春新碱在4种不同pH条件下的降解规律,选定适合药物体外释放最适宜介质条件。在微球制备过程中添加2种不同量（w／w5％、10％）的碳酸锌,对其和不添加碳酸锌的硫酸长春新碱PLGA微球进行表征及体外释放测定。结果碳酸锌可明显增加微球中药物的稳定性,36d的体外释放测定结果显示。添加碳酸锌的微球累积释药量都达到70％以上,而未添加碳酸锌的微球释药量仅为（54．2±1．1）％。添加10％碳酸锌对提高微球药物稳定性的作用优于5％碳酸锌。结论 添加碳酸锌对于制备硫酸长春新碱PLGA微球是必要的,能改善药物在PLGA微球内部酸性微环境中的稳定性,明显减少其药物降解量。     

人神经营养因子-3基因的亚克隆及其基因工程细胞模型的建立

目的 亚克隆人神经营养因子-3(human neurotrophin-3，NT3)并转染至体外培养的人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)，建立能够表达和分泌NT3的基因工程细胞模型。方法 采用低糖DMEM培养液 10％胎牛血清体外培养BM-MSCs，流式细胞仪分析其表面标记；构建真核表达载体pcDNA3.1( )／NT3并通过脂质体介导转染BM-MSCs；收集部分细胞提取其中的总RNA，经逆转录PCR检测NT3基因表达；利用培养上清液体外孵育毛细胞以鉴定其生物学活性。结果 BM-MSCs表达CD13、CD29、CD59．不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR；pcDNA3．1( )／NT3转染BM-MSCs后，能够表达和分泌NT3，并具有生物学活性，可促进离体的豚鼠耳蜗毛细胞存活。结论 在体外建立表达NT3基因并分泌NT3的基因工程细胞是可行的。     

人精子顶体膜相关蛋白32真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的:研究人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)mRNA在体外细胞NIH3T3中的表达。方法:利用RTPCR及亚克隆技术构建pcDNA3.1( )hSAMP32质粒,实验组以脂质体介导基因转染法将pcDNA3.1( )hSAMP32真核表达载体导入NIH3T3细胞中,同时设置空白和阴性对照组(转染空载体pcDNA3.1( ))。原位杂交检测hSAMP32mRNA在3组细胞中的表达。结果:①RTPCR扩增产物与预期的目的基因hSAMP32长度一致。亚克隆酶切鉴定可见目的片段。②实验组阳性细胞胞浆中可见hSAMP32mRNA的表达,镜下可见蓝紫色阳性颗粒,空白和阴性对照组未见蓝紫色阳性颗粒。结论:脂质体介导基因转染法能够将pcDNA3.1hSAMP32真核表达载体高效导入NIH3T3细胞中,实现了hSAMP32基因的体外表达。     

Nrf3基因对大肠癌LoVo细胞系生长的影响

目的:在体外检测Nrf3基因对大肠癌LoVo的生长影响作用。方法:构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染大肠癌LoVo细胞系,FCM观察其在体外对大肠癌LoVo细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果:构建融合蛋白真核表达载体pEGFP-N1-Nrf3。RT-PCR方法检测Nrf3的表达,与芯片检测结果基本一致。荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下LoVo G2/M S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制大肠癌LoVo细胞的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制大肠癌LoVo细胞的体外生长。FCM分析显示Nrf3在体外对大肠癌LoVo细胞的凋亡无影响。结论:Nrf3在体外具有抑制大肠癌增殖的功能,对大肠癌的细胞凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

重组人IL－12对体外培养的绒癌细胞活性的影响

目的：探讨重组人白细胞介素-12（IL-12）作用不同时间对绒毛膜癌JEG-3细胞活性的影响。方法：人绒毛膜癌JEG-3细胞经体外培养后,分别给予不同作用时间的5 ng/mL IL-12进行诱导,四甲基氮唑（MTT）比色法检测细胞活力的变化。结果：绒癌JEG-3细胞对IL-12的诱导作用表现为良好的时间效应。5 ng/mL IL-12作用与绒癌JEG-3细胞24h后,细胞生长抑制作用相对增加,并呈现时间依赖性（P〈0.01）。结论：外源性IL-12能够抑制绒毛膜癌JEG-3细胞的活性,具有良好的时间效应。     

从远志中分离鉴定出1种多巴胺受体活性化合物

目的从中药远志中提取脑内多巴胺(DA)受体活性化合物。方法用体外的放射配体-受体结合和高压液相法提取、分离、纯化DA受体活性化合物,用核磁共振和质谱仪确定活性化合物的结构。结果提取、分离到1种四氢非洲防己胺的活性化合物。其在体外可抑制3H-SCH23390(DA1受体亚型)和3H-螺呱隆(DA2受体亚型)与大鼠纹状体细胞膜的结合,其IC50值分别为(0.75±0.08)μmol/L和(0.92±0.10)μmol/L。这种活性化合物还能抑制3H-呱唑嗪和大鼠大脑膜α1-肾上腺素受体的结合(IC50值为46μmol/L),但是不能改变3H-QNB及3H-muscimol对膜的结合。Scatchardplot分析显示此化合物对3H-SCH23390和3H-螺呱隆与纹状体细胞膜的结合的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。结论远志中提取到的四氢非洲防己胺是脑内多巴胺受体的活性化合物,它的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。     

盐酸普罗帕酮缓释片的研制

目的：制备盐酸普罗帕酮缓释片。方法：采用羟丙甲纤维素(Hydroxypropylmethylcellose,HPMC)为缓释材料制备盐酸普罗帕酮缓释片并进行处方筛选。结果：体外释放试验表明，与普通盐酸普罗帕酮片比较，本品体外有很好的缓释效果，其体外释放行为24h内符合Higuchi方程，12h内则表现出零级释药的特征。结论：处方3为优良缓释片处方。     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.     

Transient cytosolic free calcium changes in cultured neonatal rat cardiac myocytes in response to advanced glycation end-product treatment]

OBJECTIVE: To investigate the effects of advanced glycation end-products (AGEs) on transient cytosolic free calcium in neonatal rat cardiac myocytes (CMs) cultured in vitro. METHODS: CMs cultured for 3 to 5 days in vitro were incubated with Ca(2+)-sensitive fluorescent indicator Fluo-3AM with light screening at 37 degrees celsius; with 5% CO(2) for 60 min. Changes of the fluorescence signal of free calcium caused by AGEs were measured under laser scanning confocal microscope (LSCM). RESULTS: Compared with the control cells, AGEs caused an increase in the concentration of cytosolic free calcium in a dose-dependent manner. CONCLUSION: AGEs may impair neonatal rat CMs by altering cytosolic free calcium concentration.     

人宫颈癌细胞对丝裂霉素耐药及逆转的实验研究

目的 :探讨SDZPSC 833和维拉帕米 (Verapamil,VER)对MMC体外增敏作用。方法 :以人宫颈癌Hela细胞和耐药亚系Hela/MMC细胞为材料 ,观察了PSC 833和VER对MMC体外增敏作用。结果 :无毒剂量的PSC 833和VER (1～ 3μg/ml)可显著增加MMC的细胞毒作用且可基本克服Hela/MMC细胞对MMC 5倍的耐药 ,3 H_TdR实验表明 ,VER或PSC 833与MMC联用可增加MMC对宫颈癌细胞DNA合成的抑制 ,且PSC作用强于VER ,光镜和电镜下形态学观察 ,联合用药组细胞呈明显退行性变。结论 :无毒剂量的PSC 833和VER体外能基本逆转Heal/MMC细胞对MMC的耐药性 ,且PSC 833作用强于VER ,PSC 833作为耐药修饰剂可望用于宫颈癌化疗 ,其临床应用前景优于VER。     

IL-2体外诱导健康人外周血T细胞TCR β链CDR3谱系漂移的研究

目的 研究IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的影响.方法 分离健康志愿者外周血T细胞,加入IL-2,常规体外培养,乳酸脱氢酶释放法检测其非特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术,分析其CDR3长度以判断T细胞的克隆性.结果 3例健康志愿者外周血T细胞对鼻咽癌细胞系CNE2没有杀伤作用;PBMC的TCR Vβ CDR3谱型均呈高斯分布,经IL-2体外培养后部分家族出现不同的优势表达.结论 IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移有一定影响,对其非特异性杀伤无影响.     

尾加压素Ⅱ诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大的研究

目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)能否诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大。方法 心肌细胞体外培养40h后，换无血清DMEM继续培养24h，应用流式细胞仪和3H-亮氨酸(^3H-Leu)掺入法观察不同浓度UⅡ作用24h后对心肌细胞大小和蛋白掺入率的影响。结果 10^-7mol／L的UⅡ心肌细胞的大小(P=0．021)和^3H-Leu掺入率(P=-0．015)。结论 UⅡ能诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大。