pcDNA3.1(+)—增强型绿色荧光蛋白在大鼠鞘内注射的表达

目的:构建重组质粒pcDNA3.1(+)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)并观察其在大鼠体内的转染部位及表达时间.方法:构建重组质粒pcDNA3.1(+)-增强型绿色荧光蛋白后直接注射到正常大鼠的蛛网膜下腔,观察其在大鼠体内转染后的时空效应.结果:双酶切结果符合真核表达载体pcDNA3.1(+)约5.4kb, EGFP约750bp,另外测序分析与文献报道结果完全一致;动物实验结果表明,鞘内注射24h后在大鼠的脑脊膜和脊神经的外膜上有EGFP表达,在14d达到高峰,4周后明显下降,第7周消失;在实验组大鼠的心、肝、脾、肺、肾及股四头肌均没有绿色荧光.对照组所有取材部位均没有绿色荧光.结论: 重组质粒pcDNA3.1(+)-EGFP通过直接注射法被成功转染至大鼠的蛛网膜下腔,且外源基因得到了表达.     

低能量氦-氖激光照射对体外培养大鼠海马神经元微管结合蛋白表达的影响

目的探讨氦-氖激光照射对体外培养神经元微管结合蛋（MAP2）表达的影响。 方法采用无血清细胞培养方法,分离并体外培养新生大鼠海马神经元,并以低能量氦-氖激光对其照射,于培养后14d神经元生长旺盛时期取出各组培养皿内盖玻片进行MAP2免疫学组织化学染色,光镜下观察,拍照计数,与其他对照组比较,观察激光照射对神经元微管结合蛋白（MAP2）表达的影响。 结果将氦-氖激光照射组与对照组比较,阳性表达细胞轮廓清晰,照射后阳性表达MAP2的培养神经元数目为（15.85±2.79）个/高倍视野,明显高于对照组［（9.23±2.56）个/高倍视野］的数量,且组间差异有统计学意义（P<0.01）。 结论氦-氖激光照射能促进体外培养新生大鼠海马神经元MAP2的表达。     

以妇产科相关手术为线索讲解盆部局部解剖学的方法

为了适应现代医学模式,为了激发学生学习兴趣,提高学生的自主学习,我们对局解解剖教学的手段、方式、进行积极的探索和改革:将局部解剖学与外科手术学紧密结合,促进了临床与局解教学的互相渗透,为学生学好临床奠定基础。本文以妇产科相关手术为线索讲解盆部局部解剖学提高学习兴趣为例,探索临床与局解相结合的教学方法。     

脂质体介导基因转染人精子膜蛋白PH20DNA疫苗质粒向小鼠骨骼肌导入

目的:精子膜蛋白PH-20分布在精子表面,在受精过程中起重要作用,可作为免疫避孕候选疫苗.采用脂质体介导基因转染法将pcDNA3.1( )-hPH20DNA疫苗质粒导入小鼠骨骼肌中,检测目的基因hPH-20在体内的表达水平.方法:实验于2006-06/2007-02在郑州大学解剖学实验室完成.①清洁级健康BALB/C小鼠12只,随机数字表法分为重组质粒组、空载体组、生理盐水组,4只,组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.已构建好的pcDNA3.1( )-hPH20重组质粒由本室保存.②实验方法:质粒提取后,用精胺盐酸去除内毒素,鲎试剂榆测晕阳性代表去除成功.取少量质粒行琼脂糖电泳鉴定纯度,用紫外分光光度计测量质粒DNA的含量.每只小鼠于股四头肌分点注射利多卡因预处理3 d.重组质粒组将脂质体包裹的peDNA3.1( )-hPH20 DNA缓慢注射于股四头肌内,200μg/只.空载体组单纯将pcDNA3.1( )缓慢注射到股四头肌内,200 μ g/只.生理盐水组于相同部位缓慢注射等鼍生理盐水.重组质粒组分别于注射后第4,7,11,16天以断颈法各处死1只小鼠,空载体组、生理盐水组小鼠均于注射后第11天同法处死.迅速取股内侧肌肉30mg,研磨成粉末状,RT-PCR法检测目的基因hPH-20 mRNA在体内的表达.结果:①提取质粒琼脂糖凝胶电泳检测结果:提取的质粒成功去除内毒素后,琼脂糖凝胶电泳显示质粒纯度较高,绝大部分处于超螺旋状态,有利于体内转基因的表达.紫外分光光度计测量质粒DNA的含量(A 260/A280)为1.8～2.0.②目的基因hPH-20mRNA体内表达RT-PCR检测:重组质粒组注射后第4天即可检测到1530 bp特异性条带,第7天表达增强,第11天达到高峰,第16天表达下降.空载体组、生理盐水组各时间点均未见特异性条带.结论:脂质体介导基因转染法能够高效将peDNA3.1( )-hPH20 DNA疫苗质粒导入小鼠骨骼肌中,且hPH-20基因于注射后11 d呈峰值表达.     

NIH3T3细胞中前脑啡肽原基因的稳定表达

目的:利用重组逆转录病毒载体pLNCX2-pENK,研究pENK基因在NIH3T3细胞中是否能够稳定表达.方法:用pLNCX2-pENK转染病毒包装细胞PT67,其病毒上清液感染NIH3T3细胞,检测pENK基因是否整合人NIH3T3细胞基因组中并通过RT-PCR及放射免疫法检测基因表达情况.结果:病毒基因组整合到NIH3T3细胞基因组中,并检测到目的基因转录及蛋白表达.结论:用逆转录病毒载体能将pENK基因整合到靶细胞NIH3T3基因组中,且该基因能长期稳定表达,为慢性疼痛的进一步治疗奠定了基础.     

pCDNA3.1(+)-PENK真核载体的表达与肿瘤镇痛

目的 构建人前脑腓肽原基因真核表达载体,将其转入NIH3T3细胞中表达,为晚期癌症的镇痛研究奠定基础.方法 用pCR的方法获得人脑腓肽原基因,构建人前脑腓肽原基因真核表达载体pCDNA3.1(+)-PENK,用脂质体2000包裹转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达后检测培养液中脑啡肽的含量.结果 pCDNA3.1(+)-PENK真核表达质粒可以在NIH3T3细胞中高表达.结论 pCDNA3.1(+)-pENK可作为肿瘤镇痛基因治疗的实验研究的有力工具.     

ABO血型与急性荨麻疹相关性的研究

目的:了解ABO血型与急性荨麻疹是否存在相关性。方法:选取我院359例急性荨麻疹患者作为病例组,同期体检健康的359例体检者作为对照组,对两组ABO血型分布数据作对比分析。结果:病例组中男169例,女190例,年龄1~67岁,平均27.8岁,其中A型94例(26.18%),B型101例(28.13%),AB型32例(8.91%),O型132例(36.77%)。对比显示病例组患者中O型血的比例明显高于对照组(χ^2=6.11,P<0.05),两组间其他血型比例差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论:血型可能与急性荨麻疹存在相关性。相比于其他血型,O型血者可能更易于罹患荨麻疹。     

美国高等医学精英教育的形成及启示

笔者通过对美国高等医学教育教学法的培训心得进行梳理,如实记录并分析了在美国内布拉斯加医学中心访学期间对于美国高等医学精英教育的感受和理解,并结合中国高等医学教育现状,对美国高等医学精英教育模式的形成及体现进行具体分析,以期为中国高等医学精英教育体系的建立及医学教育改革带来新的启示及参考。     

蛛网膜下腔注射pcDNA3．1（＋）-hPPE对大鼠神经病理性痛的镇痛效应

目的:观察蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经痛的镇痛作用.方法:SD大鼠随机分为坐骨神经慢性压迫(CCI)组、CCI假手术组、实验组和空质粒组.CCI组和CCI假手术组,用于观察疼痛持续时间;实验组和空质粒组分别于CCI术后第15天蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE和空质粒pcDNA3.1(+).测定各组注射质粒前后CCI模型鼠双后肢热痛阈(PWTL),观察纳洛酮对镇痛效应的影响,用放射免疫法检测脑脊液灌流液中脑啡肽(L-ENK)的含量,同时采用免疫组织化学方法测定两组大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的变化.结果:CEI术后7～33 d,术侧PWTL明显低于对照侧.空质粒组注射前后热痛阈未见明显变化;与空质粒组相比,实验组大鼠蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE后的第3天产生明显的抗伤害效应(FTWL升高),持续镇痛长达18d,且镇痛效应能被纳洛酮翻转.实验组脑脊液灌流液L-ENK含量显著高于空质粒组.与空质粒组比较,实验组大鼠脊髓背角NR2B阳性蛋白表达明显受到抑制.结论:蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE能够减轻大鼠神经病理性疼痛的热痛敏行为.     

人精子顶体膜相关蛋白SAMP32 DNA避孕疫苗的构建

目的探讨构建hSAMP32DNA疫苗的方法。方法根据GenbankhSAMP32cDNA序列设计引物,RT-PCR得到hSAMP32DNA,将其亚克隆至pGEM-T载体,酶切鉴定后测序;再构建pcDNA3.1(+)-hSAMP32质粒,并对质粒DNA定量。结果(1)人睾丸组织中提取的总RNA显示2条清晰条带,分别对应28S、18S;RT-PCR扩增产物与预期的目的基因hSAMP32长度一致;(2)RT-PCR产物与载体pGEM-T连接后测序,显示其与Genbank的hSAMP32基因序列一致;(3)超螺旋的pcDNA3.1(+)-hSAMP32DNA疫苗不含内毒素。结论应用亚克隆技术构建hSAMP32DNA避孕疫苗的载体pcDNA3.1(+)-hSAMP32,为研制避孕疫苗奠定实验基础。