25例眼眶神经鞘瘤诊治分析

目的探讨眼部神经鞘瘤的临床和影像学检查特征、组织病理学改变、治疗及预后方法回顾性分析2005.6-2008.6我院收治的25例神经鞘瘤的患者的临床资料。结果患者的主要症状为突眼和眼部周围的肿块。肿瘤发生的部位为：眼眶外上方8例（32%）、内上方6例（24%）、内侧5例（20%）、外下方2例（8%）,眼球表面4例（16%）,眼部肿瘤多发于眼眶上方。对本组25例患者进行MRI、超声波成像、CT等方法进行检验得出初步结论。病理学诊断结果为神经鞘瘤18例（72%）,恶性神经鞘瘤7例（28%）。结论手术路径多采用外侧开眶,现代的检查方法中,MRI成像技术对神经鞘瘤判断的诊断性高,对后来的手术路径的选择和治疗提供有力的支持。     

早发性和迟发性帕金森病患者parkin基因的检测

目的观察早发性帕金森病(EOP)和迟发性帕金森病(LOP)患者中parkin基因的突变情况.方法EOP17例,LOP27例.抽取患者外周血后提取DNA,PCR扩增parkin基因Exon3、4、5、7,琼脂糖凝胶电泳鉴定外显子缺失突变,单链构象多态性检测点突变.结果17例EOP中存在Exon3和Exon5联合缺失1例,27例LOP中存在Exon5缺失1例.单链构象多态性未发现单链泳动异常.4例有家族史的患者中存在parkin基因突变1例(25%),40例散发患者中存在parkin突变1例(2.5%).结论无论是EOP还是LOP患者中均可检测到parkin基因突变.     

寡核苷酸芯片检测肺癌患者痰标本中p53点突变

目的：用寡核苷酸基因芯片方法检测肺癌患者痰标本中p53基因的热点突变,为肺癌的诊断探索快速、准确的基因检测途径。方法：收集肺癌患者痰标本并提取基因组DNA,用荧光标记的引物对DNA进行p53基因Exon5、Exon7PCR扩增,然后用PCR扩增产物与基因芯片进行杂交,通过对杂交信号的检测,判断是否发生点突变,并用测序方法对部分阳性结果进行验证。结果：在27例肺癌患者痰标本中,p53基因突变的检出率为25．92％,其中小细胞肺癌的突变率为40％（2／5）、肺鳞癌的突变率为26．6％（4／15）、肺腺癌的突变率为14．28％（1／7）,检测到的突变位点有175（2）、248（1）、249（2）,对2例阳性标本的测序证实了基因芯片的结果。结论：寡核苷酸基因芯片法可以快速、准确检测出肺癌患者痰标本中p53基因的点突变,今后可用该法对肺癌患者和高危人群的痰标本进行大规模筛选,提高肺癌的早期诊断率。     

MLPA在常染色体显性遗传多囊肾病基因诊断中的应用

目的探讨多重连接探针扩增技术(MLPA)在常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)基因诊断中的应用。方法采用MLPA对20例ADPKD患者的PKD1基因和PKD2基因进行检测。MLPA检测结果显示单一外显子扩增或疑似扩增者采用RT-PCR检测验证;MLPA检测结果显示单一外显子缺失或疑似缺失者采用PCR检测验证,存在扩增产物者进行测序验证。结果 MLPA检测显示:1例患者单一外显子缺失(PKD1 Exon40),5例单一外显子疑似缺失(PKD1 Exon1、PKD1 Exon25、PKD2 Exon8、PKD2 Exon8、PKD1 Exon25),3例单一外显子疑似扩增(PKD1 Exon6、PKD1 Exon7、PKD1 Exon7)。经RT-PCR检测验证,1例患者单一外显子扩增(PKD1 Exon6);经PCR检测与测序验证,1例患者单一外显子错义突变(PKD1 Exon40),1例单一外显子缺失(PKD2 Exon8)。结论 MLPA为ADPKD的基因诊断提供了一种新的方法。     

椎管内节细胞神经瘤80例临床病理学分析

目的：探讨椎管内节细胞神经瘤的临床病理学特征。方法选取我院2009年7月-2013年8月收治的80例椎管内节细胞神经瘤患者为研究对象,将标本经常规检查及神经微丝（NF）、髓磷脂碱性蛋白（MBP）和S-100等免疫组织学染色后对其病理学以及临床特点进行分析。结果80例椎管内节细胞神经瘤形态学上能够见成熟或者不成熟的肿瘤性节细胞成束穿插或者散在于肿瘤性Schwann细胞间质中。免疫组化中NF检查结果为节细胞（＋）,MBP检查结果成熟的神经纤维（＋）,S-100检查结果含神经鞘瘤样结构的肿瘤成分（＋）。结论临床上椎管内节细胞神经瘤病例较少见,其肿瘤本身为良性,在形态学上要与神经纤维瘤以及神经鞘瘤相区分,治疗手段主要为手术切除。     

神经纤维瘤病颅脑和脊柱CT、MRI表现

目的:分析神经纤维瘤(Neurofibromatosis,NF)病1型(NFl)和2型(NF2)的颅脑和脊柱的CT、MRI表现,提高诊断准确性.方法:回顾分析经临床和病理学证实16例神经纤维瘤病的CT和MRI资料,2例CT检查,14例MRI检查;6例NF1,10例NF2,分析病变异常CT、MRI表现.结果:NF1表现为:椎管内及椎旁在MRI上显示多发神经鞘瘤5例,其中1例合并脊髓空洞,2例椎旁右侧腰大肌神经鞘瘤;1例CT上右侧蝶骨大翼缺如.NF2表现为:双侧听神经瘤合并多发脑膜瘤5例,枕部、颈部及腰背部皮下软组织内多发神经纤维瘤2例,2例CT上双侧内听道扩大,其中1例侧脑室脉络丛异常钙化、1例并右环池内滑车神经鞘瘤.单侧听神经瘤5例:3例椎管内多发神经鞘瘤.其中1例合并颈髓室管膜瘤、颈胸髓空洞;3例多发脑膜瘤,其中1例合并面、前庭及三叉神经鞘瘤;3例合并脑实质内结节状异常信号.结论:NF1和NF2的颅脑和脊柱有特征性的CT、MRI表现,结合临床资料可准确诊断.     

抑癌基因NF2突变子真核表达载体的构建与表达

目的:分别构建抑癌基因NF2的42位和47位点突变的2种真核表达载体,并在大鼠神经鞘瘤细胞RT4-D6P2T中诱导表达.方法:用定点突变法分别将pcDNA3.1-NF2第42位赖氨酸(Lys)突变为脯氨酸(Pro),第47位苯丙氨酸(Phe)突变为亮氨酸(Leu)构建2种NF2突变子(pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro和pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu),将3 种NF2质粒用脂质体法分别转染RT4细胞,RT-PCR和Western印迹法分析NF2基因及蛋白表达,MTT法检测转染后RT4细胞的增殖情况.结果:测序证实定点突变成功,构建的重组真核表达载体pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro和pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu均能表达相应的蛋白和mRNA,这2种NF2突变体对RT4细胞抑制率明显低于野生型NF2组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建了2种能够在RT4中表达的单个点突变的NF2基因真核表达载体.     

2型神经纤维瘤病患者与视神经鞘膜瘤

目的：研究在2型神经纤维瘤病（NF2）患者中视神经鞘膜瘤（ONSMs）的患病率。方法：在1项观察性、回顾性病例序列研究中，纳入某专业眼科单位1991年11月1日至2003年8月31日的30例连续NF2患者。26例平均随访时间为93个月（极差3～150个月），1例失访，3例为近期新诊病例。7例ONSMs的诊断基于典型的神经放射学及临床特点，1例基于组织学标准。结果：30例NF2患者中有8例患ONSMs，其中6例为单侧性，2例为双侧性。6例ONSMs为初诊时即确诊，4例在随访时发现并确诊。结论：正如大家熟知的视神经胶质瘤与NF1之间的密切关联一样，ONSMs与NF2之间也有着相当程度的关联。因此，作为医师应当意识到，ONSMs患者可能同时患有NF2。     

结晶样视网膜变性患者的基因突变检测

目的检测结晶样视网膜变性（BCD）患者的CYP4V2基因突变位点。方法收集临床诊断为BCD患者（先证者）及其家系成员,完善最佳矫正视力、眼底照相、光学相干断层成像技术、电生理及眼底荧光造影等眼科相关检查。同时招募150名无血缘关系的健康志愿者作为健康对照组。采集先证者、先证者家系成员及健康对照组外周血,提取DNA,并进行CYP4V2基因11个外显子的扩增,对扩增产物进行直接测序,确定突变位点。测序结果与健康对照组的基因检测结果进行对照。结果共收集3个BCD家系,均为散发患者,先证者眼底表现为典型的结晶样物质沉积,伴不同程度的脉络膜萎缩,角膜均未累及。DNA测序发现2个家系的先证者存在c.802-8_810dell7insGC（Exon7del）突变,另一家系先证者存在c.219T＞A（p.F73L）突变,此外3个家系均检测到c.775C＞A（p.Q259K）突变。150名健康志愿者中有32人发现c.775C＞A（p.Q259K）突变。结论中国人群BCD患者中最常见c.802-8_810dell7insGC（Exon7del）突变为家系1、家系2的致病突变,此外c.219T＞A（p.F73L）突变可能为家系3的致病突变。     

CD31在神经鞘瘤中的表达及鉴别诊断意义

目的研究CD31在神经鞘瘤中的表达以及在中枢神经系统中与脑膜瘤的鉴别意义。方法对46例神经鞘瘤和28例脑膜瘤进行CD31免疫组织化学染色。结果45．7％（21／46）神经鞘瘤表达CD31，而仅3．6％（1／28）的脑膜瘤表达CD31。神经鞘瘤与脑膜瘤CD31的表达具有显著差异性（P〈0．001）。结论CD31在部分神经鞘瘤中表达，可以作为神经鞘瘤的辅助诊断性标记，并可以作为与较易混淆的脑膜瘤鉴别诊断的标记。     

脑血管狭窄患者Nf1全基因的DHPLC分析(附5例报告)

目的 探讨脑血管狭窄患者Nf1基因的突变热点及突变方式.方法 从全血中提取DNA,采用变性高效液相色谱分析(DHPLC)对5例脑血管狭窄病例进行Nf1全基因突变筛查;对DHPLC检测有差异洗脱峰型的区域进行测序分析.结果 5例无危险因素的脑血管狭窄患者Nf1全基因筛查发现:①1例出现5号外显子无义突变位点,c.541C-T;②5例均有14号和15号外显子之间内含子的基因突变;③4例有7号外显子c.702G-A的同义突变位点;④1例出现32号(c.4177G-A,Val-Ile)和46号外显子(c.6918T-G,Asn-Lys)的错义突变.结论 在目前无其他基础疾病的脑血管狭窄患者体内的Nf1基因并非以稳定野生型存在,而是具有不同类型的突变,这些突变集中在第5、7、14、32和46等外显子上.     

bcl 10 gene mutation in hepatocellular carcinoma

Objective To detect the mutation frequency of the bcl 10 gene in the early and advanced st ages of hepatocellular carcinoma (HCC).Methods Genome DNA samples were extracted from 46 cases of fresh HCC tumor tissues and t heir non-tumor adjacent tissues. Polymerase chain reaction-single strand conf ormation polymorphism method was used to detect point mutations of t he three exons of the bcl 10 gene. For each individual exon, six random samples from those showing abnormal DNA bands were sequenced to verify those mutations . The relationship between serum alpha-fetoprotein (AFP) level and bcl 10 muta tion, between the tumor size and bcl 10 mutation was also analyzed.Results Among the 46 samples, 26 cases (56.5%) were found to have mutations in exon 1, 5 out of the 6 cases were shown to have 5744 C→G mutation by sequencing; 25 cas es (54.3%) were found to have mutations in exon 2, 4 out of the 6 cases were sh own to have 11 311 T deletion mutation by sequencing. Twenty-one cases (4 5.7%) were found to have mutations in exon 3, all of the 6 cases selected for sequenc ing were shown to have 14 116 C→T mutation. Statistical analysis showed t hat ne ither serum alpha-fetoprotein level nor the size of hepatocellular carcino ma has a significant relationship with bcl 10 mutation.Conclusion The bcl 10 gene has a high mutation frequency in liver cancer.     

颅内海绵状血管畸形CCM1基因突变的分析

目的探讨颅内海绵状血管畸形（ICM）患者CCM1基因突变的情况。方法收集经手术病理证实的ICM患者25例,均为汉族,其中家族性ICM7例。以30例正常健康人作为对照组。抽取两组对象的静脉血,提取基因组DNA、PCR,扩增CCM1基因8、9、11、12、13、15、16、17、18号外显子及部分两侧相邻的内含子、DNA测序,结果与GenBank比较。结果ICM患者中有11例被检测出7个新的CCM1基因突变,突变率为44％（11／25）。其中错义突变3个：12号外显子,1160A→C（Q387P）、1172C→T（S391F）;13号外显子,1405A→C（N469H）,插入突变2个：8号外显子,704insT（K246stop）;18号外显子,2138insG（T733stop）,内含子突变1个：IVS12-4C→T,同义突变1个：17号外显子,1875C→T（F625F）。除了1875C→T的同义突变可能为基因多态性以外,其他被发现的CCM1基因突变均导致编码KRIT蛋白的变化。对照组的CCM基因未检测出异常。家族性ICM的CCM1基因突变率高于散发性ICM,两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论国人ICM患者同样存在CCM1基因的突变,导致编码的KRIT1蛋白功能改变或缺失,这与ICM发病相关,是ICM发病的遗传学基础。     

中国人苯丙氨酸羟化酶基因的10种新突变

目的 研究中国人苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变的分子基础。方法 应用PCR／SSCP、序列分析等技术,分析中国北方地区120个经典型苯酮尿症(PKU)核心家系,对PAH基因外显子3、5、7、10、11、12进行突变基因的筛查和确定。结果 在确定的31种突变中(另文报道)有10种突变首次在中国PKU人群中发现：165T、S70del、G239D、R241fsdelG、L255S、P281L、G346R、L367fsinsC、R400S和Ivsllnt2t→c。其中4种突变G239D、R241fsdelG、R400S和Ivsllnt2t→c在国际PAH数据库末见公布(至投稿日期)。新突变显示中国人PAH基因虽以点突变为主,但存在小的碱基插入、缺失以及移码突变。新突变主要发生在外显子7中(4／10),每种突变的发生频率均很低(0．42％。1．3％)。结论 中国人PAH基因存在高度异质性和突变的多样性,外显子7是PAH基因的突变热点区域。     

Proteolipid protein 1 gene mutation in nine patients with Pelizaeus-Merzbacher disease

Background Pelizaeus-Merzbacher disease （PMD） is a rare X-linked recessive disorder with symptoms including nystagmus, impaired motor development, ataxia, and progressive spasticity. The proteolipidprotein 1 （PLP1） gene is the only pathogenic gene of PMD. Duplication of the PLP1 gene is the most frequent gene defect, accounting for 50%-70% of PMD cases, whereas point mutations in the coding sequence or the splice sites account for 10%-25% of PMD cases. This study aimed to identify PLP1 mutations in nine unrelated Chinese patients （P1-9） with PMD, and 14 subjects from the family of patient 2 were also described. Methods Genomic DNA was extracted from peripheral multiplex ligation-dependent probe amplification （MLPA）. AI amplified and analyzed using direct DNA sequencing. blood samples. Gene dosage was determined using the 7 exons and exon-intron boundaries of the PLP1 gene were Results Of these nine patients, there were four transitional, four classical, and one connatal PMD according to their clinical and radiological presentations. PLP1 duplications were identified in patients 1-7 with PMD. Their mothers were PLPI duplications carriers as well. Both duplication carriers and normal genotypes of PLP1 were identified in the family members of patient 2. A c.517C〉T （p. P173S） hemizygous missense mutation in exon 4 was found in patient 8 with PMD, and his mother was shown to be a heterozygote of this mutation. Conclusions We identified seven genomic duplications and one missense mutation （p. P173S） of the PLP1 gene in eight Chinese patients with PMD. This is the report about PLP1 mutations in PMD patients from the mainland of China.     

原发性胃腺癌P53基因第7、8外显子突变研究

目的：探讨连云港地区原发性胃腺癌P53基因变异发性情况，方法：应用聚合酶链反应单链构象多态分析法（PCR－SSCP）对20例原发性胃腺癌的P53基因第7、8外显子突变进行了检测。结果：共发现突变5例（25％），其中第7外显子突变4例，第8外显子突变1例，在20例原发性胃腺癌组织分型中，高分化和中分化各3例，均未见P53基因第7、8外显子突变，低分化13例，发现P53基因第7外显子突变3例，第8外显子突变1例；低分一未分化1例，亦发现第7外显子突变。结论：P53基因突变与原发性胃腺癌发生有关；对原发性胃腺癌的治疗有指导意义。     

Frequencies of 6 known mutations in phenylalanine hydroxylase gene and their application in prenatal gene diagnosis]

The known mutant alleles of human phenylalanine hydroxylase gene were analyzed in 25 phenylketonuria (PKU) families from North China by polymerase chain reaction combined with allele-specific oligonucleotide dot hybridization techniques. The results showed that the six mutation accounted for 62% of all PKU genes. The three most frequent mutations were Arg243-->Gln in exon 7, Arg413-->Pro in exon 12 and Tyr204-->Cys in exon 6. They accounted for 24%, 18% and 16% respectively of all PKU alleles. The frequencies of Arg111-->Ter mutation in exon 3, Tyr356-->Ter mutation in exon 11 and Trp326-->Ter mutation in exon 10 were somewhat lower in North China. They accounted for 4% of all PKU alleles. Among these 25 PKU families, prenatal gene diagnosis was possible in 10 families. In 11 families, 50% exclusive diagnosis was possible. Prenatal gene diagnosis was performed and confirmed in 2 families.     

溃疡性结肠炎及伴发癌的p53改变和微卫星不稳定性

目的:探讨溃疡性结肠炎和不典型增生、癌变组织的p53基因改变和微卫星不稳定性状况.方法:采用SP法检测21例70个手术切除的溃疡性结肠炎标本和25例正常人的P53蛋白表达;人工微切割-PCR-SSCP/HA-克隆测序技术检测溃疡性结肠炎标本p53基因第5-8外显子的点突变;SSLP-测序技术检测10个微卫星位点的改变情况.结果:P53蛋白免疫组化发现25例正常人全部阴性;溃疡性结肠炎患者4例阳性,其中炎症性、低度不典型增生(LGD)、高度不典型增生(HGD)与癌变阳性标本分别为0/5例、1/7例、2/7例和1/2例.SSCP/HA、SSLP结果各有2例阳性,其中1例癌变病例癌组织 p53基因第6外显子及Bat26微卫星位点均阳性,其LGD区Bat26也阳性;1例LGD病例Bat26位点阳性;另1例HGD病例p53基因第8外显子阳性,后者经测序证实发生了移码突变.21例标本在TGFβRII(A)10、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFβRII(GT)3、BAX(G)8、hMSH3(A)8、hMSH6(C)8、TCF4(A)9和DPC4(CA)179个微卫星位点都阴性.结论:溃疡性结肠炎和癌变黏膜的早期就存在P53蛋白的过表达和微卫星不稳定性,前者部分是基因突变的结果.     

家族性帕金森病Parkin基因外显子缺失突变

目的: 研究Parkin基因外显子缺失突变与中国家族性帕金森病(PD)发病的关系,探讨Parkin基因缺失突变在家族性PD发病机制中的作用及与临床特点、手术疗效之间的关系.方法: 家族性PD患者36例为研究对象,正常人20例作为对照,提取外周血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测Parkin基因外显子4,6,7,10缺失情况,观察外显子的缺失分布及缺失率,并结合PD患者的手术疗效分析.结果: 家族性PD患者36例有10例外显子缺失突变,其中外显子4缺失8例,6和7缺失各1例,缺失突变率为27.8%,外显子10未发现异常,对照组中无缺失突变;有外显子缺失突变患者的手术疗效较好.结论: Parkin基因外显子4,6,7缺失突变是我国家族性PD的致病原因之一,PD患者的手术效果与Parkin基因外显子缺失突变与否有关.     

HRM方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变的临床意义

[目的]探讨应用HRM方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞EGFR、KRAS基因突变用于指导EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂治疗的可行性.[方法]收集36例非小细胞肺癌患者胸水标本,常规提取DNA,HRM方法检测KRAS基因第2外显子、EGFR基因第19和21外显子突变.统计分析胸水标本与前期检测过的非小细胞肺癌组织KRAS、EGFR突变率差异.[结果]胸水标本36例中,2例(5.6％)KRAS突变,10例(27.8％) EGFR突变(其中EGFR第19和21外显子突变各5例).前期检测过的非小细胞肺癌组织KRAS和EGFR突变率分别为5.8％和36.3％.KRAS和EGFR突变率在胸水标本与前期非小细胞肺癌组织中差异均无显著性意义(P＞0.05).[结论]对难以获得肺癌组织标本的非小细胞肺癌患者可应用HRM方法检测胸水标本筛查KRAS、EGFR基因突变,指导EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂应用.