培元固肾方含药血清对已转染HBV质粒的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin蛋白的影响

[目的] 通过培元固肾方含药血清对已转染乙型肝炎病毒（HBV）质粒的人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）的干预，观察其对转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-cadherin蛋白表达的影响，探讨培元固肾方抗肾间质纤维化的作用机制。[方法] 体外培养HK-2细胞，应用脂质体转染法，将扩增、鉴定后的质粒转染至HK-2细胞。将细胞分为7组，分别为：Mock组（常规培养的HK-2细胞组）；Control组（转染空载质粒pHY106的HK-2细胞组）；HBV组（转染空质粒与HBV复合物（PHY106-HBV）的HK-2细胞组）；HBV+ACEI组（贝那普利组）；HBV+PYGS Low组（培元固肾方低剂量组）；HBV+PYGS Middle组（培元固肾方中剂量组）；HBV+PYGS High组（培元固肾方高剂量组），实验分3个独立样本（n=3）。经HBV转染6 h后，予各组相应的药物进行干预。药物干预48 h后，应用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测各组细胞裂解液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）及TGF-β1的表达量；应用免疫细胞化学法检测α-SMA、E-cadherin的表达。[结果] 培元固肾方各干预组对TGF-β1表达均有下调（P<0.001），对α-SMA蛋白表达明显下调，差异有统计学意义（P<0.001），对E-Cadherin蛋白表达上调，差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 培元固肾方可能通过抑制促纤维化因子TGF-β1的表达抑制乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）肾小管上皮细胞的表型转化，对上皮细胞标志性蛋白E-cadherin的表达具有上调作用，对肌成纤维细胞标记蛋白α-SMA的表达具有下调作用，从而防治HBV-GN肾小管间质纤维化。     

槲皮素对1型糖尿病肾病肾小管上皮细胞间质转分化的作用

[目的] 研究槲皮素在1型糖尿病肾病（T1DN）肾小管上皮细胞间质转分化中的作用。[方法] 30只雄性SD大鼠随机分为3组：对照组、T1DN组和槲皮素组,每组10只。除对照组以外,其他大鼠空腹注射100 mg/kg链脲佐菌素,构建T1DN模型。槲皮素组大鼠灌胃100 mg/kg槲皮素,对照组和T1DN组大鼠灌胃同剂量的生理盐水,每日1次,持续8周。通过Masson和天狼星染色检测肾组织病理学变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和蛋白质免疫印记法（Western blot）检测肾皮质中转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Snail和E-钙黏蛋白（E-cadherin）和基因的表达。[结果] 天狼星染色结果显示,对照组的肾组织结构完整,肾间质未见胶原纤维沉积,T1DN组肾组织结构破坏,间质胶原纤维沉积明显增加,槲皮素改善肾组织损伤,间质胶原纤维减少。Real-time PCR和Western blot结果显示,与对照组比较,T1DN组的TGF-β、Smad2/3、α-SMA、Snail蛋白和mRNA表达显著增加（P<0.05）,E-cadherin的表达显著减少（P<0.05）。与T1DN组比较,槲皮素组的TGF-β、Smad2/3、α-SMA、Snail蛋白和mRNA表达显著降低（P<0.05）,E-cadherin的表达显著增加（P<0.05）。[结论] 槲皮素可能通过降低TGF-β、Smad2/3、α-SMA、Snail的表达,促进E-cadherin的表达,从而抑制肾小管上皮细胞间质转分化和肾间质纤维化的发生发展。     

基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨益肾化瘀方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤的干预机制

目的 探讨基于Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）调控上皮-间充质细胞转化（EMT）途径益肾化瘀方对糖尿病肾病（DN）肾小球足细胞损伤的干预机制。方法 60只SD大鼠分为正常组,模型组,Wnt-C59组（Wnt/β-catenin通路抑制剂,0.03 g·kg^-1）,低、中、高剂量益肾化瘀方组（8,16,32 g·kg^-1）,12周后,比较各组一般体征变化及血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,肾指数,尿蛋白量,血糖,肾脏病理改变,足细胞和肾小球基底膜损伤情况及足细胞损伤相关蛋白［去氧肾上腺素（nephrin）,肾小球蛋白（synaptopodin）］,Wnt/β-catenin通路相关蛋白（Wnt1,β-catenin）,足细胞EMT相关蛋白［α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）］表达水平。结果 与正常组比较,模型组肾组织出现明显病理改变,肾小球系膜基质弥漫性增厚,足突融合较为严重,SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显升高（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,各干预组SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显下降（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显升高（P<0.05）;各干预组中,高剂量益肾化瘀方组对于上述指标的改善程度明显优于低、中剂量益肾化瘀方组（P<0.05）,与Wnt-C59组比较无显著差异。结论 益肾化瘀方通过抑制Wnt/β-catenin通路阻止足细胞EMT,从而修复DN大鼠肾小球足细胞损伤。     

“黄芪-丹参”对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及低氧诱导因子-1α表达的影响

[目的] 通过单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型探讨“黄芪-丹参”对于肾间质纤维化和肾小管上皮细胞转分化（EMT）的作用以及缺氧诱导因子（HIF）-1α表达的影响。[方法] 将大鼠分为假手术组、模型组、芪参低剂量组、芪参中剂量组、芪参高剂量组、氯沙坦组。采用UUO模型并灌胃、取材。Masson染色法观察大鼠肾脏组织病理改变;免疫组化法检测大鼠肾脏组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;PCR法检测大鼠肾脏组织1型胶原蛋白（Col1）、纤连蛋白（FN）mRNA表达;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测大鼠肾脏组织HIF-1α蛋白表达。[结果] Masson染色：模型组与假手术组比较,胶原容积升高,差异具有统计学意义（P＜0.001）;芪参中、高剂量与模型组比较出现下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）;氯沙坦组与模型组比较下降,差异具有统计学意义（P＜0.001）。免疫组化：大鼠模型组与假手术组比较,α-SMA蛋白表达升高,差异具有统计学意义（P＜0.001）;芪参中、高剂量以及氯沙坦组与模型组比较,α-SMA均下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）。实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测：模型组对比假手术组,Col1、FN表达水平升高（P＜0.001）,药物组与模型组比较Col1、FN表达降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot检测：模型组与假手术组比较,HIF-1α表达升高,差异具有统计学意义（P＜0.001）;芪参中剂量较模型组有下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）。[结论] “黄芪-丹参”药对可以通过抑制细胞外基质的生成以及减轻肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化两个方面延缓肾间质纤维化,其机制可能与抑制HIF-1α表达有关。     

扶肾方对大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及机制探讨

目的:观察扶肾方对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及可能机制。方法:采用SD大鼠切除5/6肾脏+1.5%百特腹透液的方法复制大鼠腹膜纤维化模型。扶肾方干预6周后,检测血清学指标肌酐和尿素氮的含量;HE观察腹膜形态的变化;RT-PCR法检测各组腹膜间充质标志物Vimentin和α-SMA的表达;ELASA法检测TGF-βRI和TGF-βRII含量的变化。结果:扶肾方干预后,各组血清肌酐及尿素氮均呈现下降趋势,尤其以高剂量组最为明显(P0.05);扶肾方组腹膜间皮细胞变性、脱落,炎症细胞浸润以及血管新生现象明显减少;RT-PCR检测结果显示,与模型组相比,Vimentin各组表达均有所下降,但以中剂量组下调最为明显(P0.05);腹膜纤维化相关因子TGF-βRI和TGF-βRII检测结果中,TGF-βRI的表达呈上升趋势,同模型组相比有显著性差异(P0.01,P0.05),TGF-βRII的表达则呈下降趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论:扶肾方能够有效抑制腹膜间皮细胞转分化,改善腹膜纤维化,可能与调节TGF-βRI和TGF-βRII的表达有关。     

基于JNK信号通路探讨扶肝化纤汤对肝星状细胞活化增殖的影响

目的 探讨扶肝化纤汤对肝星状HSC-T6细胞活化增殖及c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）信号通路的影响。方法 SD大鼠ig扶肝化纤汤制备含药血清,转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导HSC-T6细胞活化,设置对照组（10%胎牛血清）、模型组（15%正常血清）、扶肝化纤汤含药血清组（15%含药血清）、JNK抑制剂组（15%正常血清、20 μmol/L SP600125）,干预24 h。CCK-8法检测各组HSC-T6细胞增殖情况;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;Western blotting检测p-JNK和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达;qRT-PCR检测JNK和α-SMA mRNA表达;细胞免疫荧光检测α-SMA表达。结果 TGF-b1诱导24 h后,HSC-T6细胞变长,胞体变大,胞质内折光颗粒减少,部分细胞融合成片状。与模型组比较,各给药组均可明显抑制HSC-T6增殖（P<0.05）,显著抑制炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌（P<0.05）,下调p-JNK、α-SMA蛋白表达及JNK、α-SMA mRNA表达水平（P<0.05）,扶肝化纤汤含药血清与JNK抑制剂作用相当。结论 扶肝化纤汤可抑制HSC细胞活化增殖,减少活化HSC-T6细胞JNK、α-SMA mRNA表达,降低p-JNK、α-SMA蛋白表达水平。抑制JNK信号通路激活可能是扶肝化纤汤抗肺纤维化的另一种作用机制。     

肾病I号方醋酸乙酯提取物对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的 探讨肾病I号方醋酸乙酯提取物（ethyl acetate extract of Shenbingyihao Decoction,EASD）对肾纤维化大鼠转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新（洛丁新片1.67 mg/kg）组、肾病I号方（生药18.75 g/kg）组、EASD（EASD,300 mg/kg）组,除假手术组外,其他各组采用单侧输尿管结扎的方法制备单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型。各组ig给药14 d后处死大鼠,采集血清,检测尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平,取肾组织行HE和Masson染色评价肾小管间质纤维化损伤程度,采用免疫组织化学染色方法和实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测TGF-β₁、a-SMA蛋白及mRNA的表达情况。结果 与假手术组比较,模型组和3个给药组大鼠血清Scr、BUN升高（P<0.05）,间质纤维化程度加重（P<0.05）,肾组织TGF-β₁、a-SMA表达明显增多（P<0.05）。与模型组比较,3个给药组大鼠的血清Scr、BUN下降（P<0.05）,肾组织TGF-β₁、a-SMA表达下降（P<0.05）。结论 肾病I号方及EASD能够延缓肾纤维化的发生发展,其作用机制可能是通过下调TGF-β₁、a-SMA的表达,从而达到保护肾脏的作用。     

保肾方调控ERK/p38 MAPK信号通路减轻UUO小鼠肾脏纤维化的作用及机制

目的 观察保肾方对肾脏纤维化的保护作用，并通过网络药理学、分子对接及体内实验探讨其可能的作用机制。方法 将所有小鼠随机分为假手术组、模型组、保肾方低、中、高剂量组和盐酸贝那普利组。采用单侧输尿管结扎手术（UUO）制备肾脏纤维化模型，模型制备当天开始灌胃给药或蒸馏水，保肾方低、中、高剂量分别予以0.455、0.91、1.82 g·kg^-1，盐酸贝那普利1.68 mg·kg^-1，模型组及假手术组使用等体积蒸馏水灌胃，每天1次，连续干预14 d。检测小鼠血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平；苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色观察肾脏病理变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫组化法观察肾脏纤维化相关蛋白纤维连接蛋白（FN）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肾脏组织中炎症转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA的表达；通过网络药理学、分子对接及Western blot实验探究保肾方改善肾脏纤维化的作用机制。结果 与假手术组比较，模型组小鼠BUN、Cr含量水平显著升高（P<0.01）；模型组肾小球形态结构异常，肾小管刷状缘缺失及小管扩张，蓝色胶原纤维面积明显增多；模型组小鼠FN、α-SMA含量显著升高（P<0.01），E-cadherin表达显著下调（P<0.01）；模型组小鼠TGF-β₁、TNF-α、NLRP3和MCP-1 mRNA水平表达明显增强（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，保肾方干预后，BUN、Cr含量显著降低（P<0.01）；肾脏病理损害减轻，纤维化改善；FN、α-SMA表达显著下降（P<0.01），E-cadherin表达显著升高（P<0.01）；TGF-β₁、TNF-α、NLRP3、MCP-1 mRNA表达明显下降（P<0.05，P<0.01）。网络药理学及分子对接预测保肾方通过细胞外调节蛋白激酶（ERK）/p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路发挥改善肾脏纤维化作用，药理研究表明，与假手术组比较，模型组小鼠磷酸化（p）-ERK、p-p38表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，保肾方中、高剂量给药处理后明显下调p-ERK、p-p38蛋白表达（P<0.05，P<0.01）。结论 保肾方有效改善UUO诱导的小鼠肾脏纤维化，其作用机制可能与ERK/p38 MAPK信号通路有关。     

豆甾醇通过抑制钙离子内流抑制大鼠前列腺间质细胞收缩

[目的] 检测豆甾醇对前列腺间质细胞收缩的抑制作用。[方法] 体外培养大鼠原代前列腺间质细胞,通过鬼笔环肽染色法对前列腺间质细胞进行表型鉴定;用细胞增殖及乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测豆甾醇对前列腺间质细胞活力和毒性的影响;用胶原凝胶收缩实验检测对前列腺间质细胞收缩功能的影响;运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法研究豆甾醇对收缩相关的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）的mRNA水平表达的影响;用蛋白免疫印迹（WesternBlot）法检测豆甾醇对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的α-SMA表达的影响;流式细胞术检测豆甾醇对乙酰胆碱（ACh）诱导的细胞内钙离子浓度的影响。[结果] 大鼠原代前列腺细胞培养获得的细胞以间质平滑肌细胞为主;浓度低于10μmol/L的豆甾醇对前列腺间质细胞的活力无明显影响,且无明显毒性;胶原凝胶实验结果显示,血清可以使前列腺间质细胞收缩,差异具有统计学意义（P<0.01）,10μmol/L的豆甾醇可显著抑制该收缩作用,抑制率可达到77.1%,差异具有统计学意义（P<0.05）;RT-PCR结果显示,豆甾醇显著降低大鼠前列腺间质细胞中α-SMA和CollagenⅠmRNA水平的表达,差异具有统计学意义（P<0.01）;WesternBlot结果显示,豆甾醇可以抑制TGF-β1诱导的α-SMA蛋白的表达;流式细胞实验发现ACh刺激导致的钙离子浓度明显增加可以被豆甾醇显著抑制。[结论] 豆甾醇可抑制前列腺间质收缩,其机制与抑制其钙离子内流有关。     

肠复方对肠癌荷瘤小鼠MDSCs及免疫相关细胞因子表达的影响

[目的] 探讨肠癌小鼠瘤体髓源抑制性细胞（MDSCs）与血清免疫相关细胞因子水平的相关性以及肠复方干预的研究。[方法] 选取SPF级BALB/c小鼠40只,随机抽取10只为空白对照组,其余30只小鼠采用动物移植性肿瘤实验法,在小鼠右腋下接种CT26肠癌细胞,制备小鼠荷瘤实验模型。将造模成功的小鼠随机分成3组,分别给予肠复方、香菇多糖、蒸馏水干预（模型组）,空白对照组亦用蒸馏水干预,连续干预4周,每周5 d。观察小鼠的生长状态。干预结束后计算各组小鼠的抑瘤率,以流式细胞仪、免疫组化法分别检测各组荷瘤小鼠瘤体中CD11b⁺Gr-1⁺的MDSCs百分比和瘤体MDSCs（Gr-1）的表达含量。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组小鼠血清白介素（IL）-2、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-10、转化生长因子-β（TGF-β）的表达。进行瘤体组织中MDSCs的表达与瘤体质量、免疫相关细胞因子之间的相关性及各组间差异分析。[结果] 1）模型组血清IL-2、TNF-α、IL-10、TGF-β的含量明显高于空白对照组（P<0.01）;2）与模型组相比,肠复方组、香菇多糖组能够下调瘤体组织MDSCs的表达,且肠复方组优于香菇多糖组,差异具有统计学意义（P<0.01）;3）与模型组相比,肠复方组、香菇多糖组TNF-α、IL-2的表达均显著增高（P<0.01）,肠复方组、香菇多糖组血清TGF-β的表达明显下降（P<0.01）,香菇多糖组血清IL-10的表达下降（P<0.05）,而在肠复方组下降更显著（P<0.01）,且肠复方组均优于香菇多糖组（P<0.01）;4）应用Spearman相关性研究发现：肠癌瘤体中MDSCs表达与瘤体质量呈正相关（P<0.05）,与血清IL-10、TGF-β呈正相关（P<0.05）,与血清TNF-α呈负相关（P<0.05）,与血清IL-2不具有相关性。[结论] 肠癌组织中MDSCs表达与瘤体负荷密切相关,且MDSCs与TGF-β、IL-10具有协同作用,肠复方可能通过上调TNF-α、IL-2表达,下调MDSCs、TGF-β、IL-10发挥免疫抗肠癌作用。     

半夏泻心汤含药血清对胃癌来源外泌体诱发腹膜间皮细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨半夏泻心汤对胃癌来源外泌体（Exo）诱发人腹膜间皮细胞（HMrSV5）上皮间质转化（EMT）的影响。方法 制备半夏泻心汤含药血清，提取人胃癌NCI-N87细胞外泌体（NCI-N87-Exo），采用透射电镜及蛋白免疫印迹法（Western blot）进行鉴定，并用细胞膜红色荧光探针（Dil）标记。实验分为空白组、模型组、半夏泻心汤低、中、高剂量组（13.5，27，54 g·kg^-1）。空白组将HMrSV5细胞单独培养；模型组在HMrSV5中加入的NCI-N87-Exo （100 mg·L^-1）；半夏泻心汤低、中、高剂量组在模型组的基础上分别加入10%的半夏泻心汤低、中、高剂量含药血清。激光共聚焦显微镜观察24，48，72 h时HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取情况，72 h后观察HMrSV5细胞形态学的变化，Western blot检测HMrSV5细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin），细胞角蛋白19（CK19），α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和弹性蛋白（Elastin）及转化生长因子-β₁（TGF-β₁），Smad2/3，磷酸化（p）-Smad2/3蛋白表达。结果 透射电镜观察到NCI-N87-Exo呈椭圆或碟状的囊泡结构，粒径介于40~80 nm，高表达Exo标志蛋白CD9，CD63，不表达钙网蛋白（Calreticulin），证实为NCI-N87-Exo。共培养24，48，72 h后，荧显微镜下均可观察到NCI-N87-Exo被HMrSV5细胞摄取，与时间呈正相关。与空白组比较，半夏泻心汤可显著抑制HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取，以半夏泻心汤中、高剂量组含药血清最为明显（P<0.05，P<0.01）。半夏泻心汤含药血清干预后HMrSV5细胞排列较为紧密，细胞间隙明显缩小，以半夏泻心汤含药血清大剂量组最为明显。Western blot显示，与模型组比较，半夏泻心汤中、高剂量组含药血清干预后HMrSV5细胞E-cadherin，CK19蛋白表达显著升高（P<0.01），α-SMA，Elastin蛋白表达显著降低（P<0.01），半夏泻心汤低、中、高剂量组TGF-β₁，p-Smad2/3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Smad2/3无明显变化。结论 NCI-N87-Exo能够被HMrSV5细胞摄取并诱发HMrSV5细胞EMT，半夏泻心汤能够阻抑HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取，抑制NCI-N87-Exo诱发的HMrSV5细胞EMT，其作用机制与调控TGF-β₁/Smads信号通路有关。     

扩心方通过调节TGF-β1/Smad2通路改善扩张型心肌病大鼠心肌纤维化＊

目的 观察扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病（DCM）大鼠心肌纤维化的改善作用并探究其作用机制。方法 选取Wistar大鼠68只，设8只为空白对照组（Con组），余60只以腹腔注射阿霉素建立DCM模型后随机分为模型组（Dox组），扩心方低（KXF-L组）、扩心方中（KXF-M组）、扩心方高（KXF-H组）剂量组、卡扩普利组（Cap组），每组12只，连续灌胃4周。治疗结束后，行心脏超声检查测左室结构及心功能变化；Masson染色观察心肌组织形态学改变；免疫组化观察心肌组织I型胶原（简称ColI）、III型胶原（简称ColIII）表达；蛋白芯片检测TGF-β1相关通路中各蛋白表达情况；蛋白印迹法（Western blot）测心肌TGF-β1、Smad2蛋白表达。结果 ①心超：与Con组相比，Dox组LVEDD、LVESD明显增加（P<0.01），LVEF、LVFS明显降低（P<0.01），IVS缩小（P<0.05），心肌重塑明显，而经过扩心方干预后，LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS明显改善（P<0.01）。②Masson染色：与Con组相比，Dox组心肌细胞肥大，间质增生，细胞排列紊乱，经扩心方干预后上述病理改变明显改善（P<0.01）。③免疫组化：与Con组相比，Dox组ColI、ColIII表达明显增多（P<0.01）。经扩心方治疗后有明显减少（P<0.05）。④蛋白芯片：与Con组相比，Dox组TGF-β信号传导通路中有3种蛋白表达上调，分别为PP2A-alpha（上调1.42倍）、Smad2（上调1.5倍）、TGFBR2（上调1.44倍），而经扩心方干预后Smad2表达下调0.81倍、TGFBR2表达下调0.77倍，差异有统计学意义（P<0.01）。⑤Western blot：与Con组相比，Dox组Smad2、TGF-β1蛋白表达明显增加（P<0.01），而经扩心方干预后，各剂量组TGF-β1表达均明显降低（P<0.01），KXF-H组Smad2蛋白明显降低（P<0.01）。结论 扩心方可改善阿霉素诱导的DCM大鼠心肌纤维化，其机制可能与抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关。     

大黄泄浊方调控ROS/TXNIP/NLRP3通路对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响

目的 通过观察大黄泄浊方对5/6肾切除大鼠肾脏病理变化，肾组织活性氧（ROS）/硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路表达的变化，研究其保护肾功能，延缓肾间质纤维化的作用机制及可能性。方法 90只健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄泄浊方低、中、高剂量（6.825、13.65、27.30 g·kg^-1）组和尿毒清颗粒（2.60 g·kg^-1）组。除假手术组外其余5组均采用5/6肾切除术复制CRF大鼠模型。造模成功后，各给药组分别给予相应剂量的药物混悬液灌胃，每日1次，连续8周。给药结束后，检测大鼠血清中肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平和24 h尿蛋白定量（UTP）水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测硫氧还蛋白（TRX）、TXNIP和NLRP3蛋白的表达情况；免疫组化法检测NLRP3、TRX、TXNIP、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅳ型胶原蛋白（Collagen Ⅳ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和调纤连蛋白（FN）的表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠血SCr、BUN、24 h UTP水平明显增高（P<0.05），TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著增高（P<0.01），肾间质发生显著纤维化；与模型组比较，大黄泄浊方各剂量组和尿毒清颗粒组血SCr、BUN、24 h UTP水平均有不同程度降低（P<0.05），TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著降低（P<0.01），肾间质纤维化不同程度改善。结论 大黄泄浊方可保护慢性肾衰竭大鼠肾功能、延缓肾间质纤维化。     

栀子苷对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中TGF-β/Smad通路的影响

[目的] 探究栀子苷（GE）对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化中转化生长因子-β和Smad相关蛋白（TGF-β/Smad）通路的影响。[方法] 实验分为对照组、高糖组、GE 1、10、50、100 μmol/L组。对照组HK2细胞在5.5 mmol/L低糖DMEM培养液中培养,除对照组外,其余各组均于25 mmol/L高糖DMEM培养液中培养,GE 1、10、50、100 μmol/L组同时添加GE,使GE终浓度分别为1、10、50、100 μmol/L,干预48 h。显微镜下观察HK2细胞形态;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中纤连蛋白（FN）、E-钙黏素（E-cad）、Ⅳ型胶原（COLⅣ）mRNA水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、磷酸化Smad3 （p-Smad3）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白水平。[结果] 对照组细胞呈多边形或卵圆形,分布均匀;高糖组细胞部分呈现长梭形、胞核呈梭形变;随着GE剂量的升高,细胞形态逐渐恢复正常。与对照组相比,高糖组细胞中FN、COLⅣ mRNA水平,TGF-β1、p-Smad3/Smad3、α-SMA蛋白水平,上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,细胞中E-cad mRNA水平降低（P＜0.05）;与高糖组相比,GE 1 μmol/L组细胞中FN mRNA水平,TGF-β1、p-Smad3/Smad3、α-SMA蛋白水平,上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低（P＜0.05）,GE 10、50、100 μmol/L组细胞中FN、COLⅣ mRNA水平,TGF-β1、p-Smad3/Smad3、α-SMA蛋白水平,上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低,细胞中E-cad mRNA水平升高（P＜0.05）。[结论] GE可以抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化中TGF-β/Smad通路。     

基于TGFβ/Smads信号通路探讨补肾促排卵汤治疗PCOS大鼠卵巢纤维化的分子机制

[目的] 探讨补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠的治疗效果,并研究其调节卵巢纤维化TGF-β/Smads信号通路的分子机制。[方法] 将40只SD雌性大鼠随机分为空白组8只及脱氢表雄酮（DHEA）给药组32只,DHEA给药组每日颈部皮下注射DHEA（60 mg/kg）,连续给药35 d;将造模成功的大鼠随机分为模型组、补肾促排卵汤低、中、高剂量组（5.58、11.16、22.32 g/kg）。补肾促排卵汤分别用生理盐水配成适当浓度,连续灌胃给药4周,每日1次;同时空白组与模型组大鼠予等量生理盐水进行灌胃。阴道涂片观察大鼠动情周期,HE法观察补肾促排卵汤对各组大鼠卵巢中卵泡发育的影响,天狼猩红染色法观察大鼠卵巢纤维化情况,酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测大鼠血清雌二醇（E2）、睾丸酮（T）、黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）含量,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、Smad7 mRNA的表达,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测大鼠TGF-β1、p-Smad3、Smad7的蛋白表达。[结果] 与空白组比较,模型组大鼠丧失规律的动情周期,大鼠卵巢中囊状扩张卵泡增多,卵巢纤维化阳性面积明显增多,血清T、LH水平显著升高,同时TGF-β1、p-Smad3蛋白及mRNA表达显著增多,Smad7蛋白及mRNA表达显著减少（P<0.01）。与模型组比较,补肾促排卵汤中、高剂量组可明显改善大鼠的动情周期,减少囊状扩张卵泡的形成,降低卵巢纤维化阳性面积（P<0.01）,下调卵巢TGF-β1蛋白及mRNA的表达（P<0.05,P<0.01）,显著下调p-Smad3蛋白及mRNA的表达（P<0.01）,上调Smad7蛋白及mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。[结论] 补肾促排卵汤能有效治疗PCOS模型大鼠,可能是通过调节纤维化TGF-β/Smads信号通路上重要分子TGF-β1、p-Smad3、Smad7的表达从而发挥作用。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞密度的干预作用

[目的] 分析化瘀通络中药对糖尿病肾病（DN）大肾脏整合素α3β1表达及足细胞密度的影响。[方法] 糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和中药组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃20周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24h尿蛋白定量（24h UTP）,肾组织行光镜观察,分别采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组化（IHC）检测肾脏整合素α3（ITGA3）、整合素β1（ITGB1）、WT1 mRNA及蛋白的表达,计算足细胞密度。[结果] 与正常组比较,模型组各项指标差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,两治疗组BUN、24hUTP明显下降（P＜0.05）,ITGA3、ITGB1、WT1 mRNA表达水平及足细胞密度明显上升（P＜0.05）,干预组病理损伤明显减轻,主要表现为肾小球内细胞基质及系膜细胞明显减少;与厄贝沙坦组比较,中药组24h UTP明显降低（P＜0.05）,ITGB1 mRNA及足细胞密度明显上升。[结论] 化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节整合素α3β1表达从而减少足细胞脱落相关。     

鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠TGF-β1/samd信号通路的影响

目的 探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法 SD大鼠随机分成6组：对照组,模型组,秋水仙碱（0.1 mg/kg）阳性对照组,鳖甲煎丸低、中、高剂量（0.55、1.1、2.2 g/kg）组。除对照组外,其他各组大鼠sc 40% CCl₄橄榄油溶液,每周2次,连续给予6周,建立大鼠肝纤维化模型。在造模同时,各给药组每天给予相应药物10 mL/(kg?d) 1次,连续给药11周。于11周末处死大鼠,免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测大鼠肝组织中转化生长因子（TGF-β₁）及smad 3基因的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠肝组织α-SMA蛋白及TGF-β₁、smad 3基因的表达显著上调（P＜0.05）。与模型组比较,鳖甲煎丸和秋水仙碱可显著降低大鼠肝组织α-SMA蛋白及TGF-β₁、smad 3基因的表达,其中以鳖甲煎丸2.2 g/kg的效果更显著。结论 鳖甲煎丸抗肝纤维化作用机制可能与其下调TGF-β₁/smad 3信号通路、抑制肝星状细胞活化和增殖有关。     

芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

[目的] 观察芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。[方法] 通过结扎大鼠左冠状动脉（冠脉）前降支的方法诱导形成慢性心力衰竭模型,经过芪丹利心丸药物[1.1、2.2、4.4 g/（kg·d）]4周干预后,利用超声心动仪和左心室压力-容积环检测评价心功能。采用Masson染色观察各组心脏病理学变化,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定各组胶原蛋白（Collagen I和Ⅲ）的mRNA水平,采用蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）检测各组转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、Smad7的蛋白表达水平。[结果] 模型组心功能显著下降[左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、左室内压上升或下降最大速率（±dp/dt max）,P<0.05],心室重构明显[室间隔厚度（IVST）、左室收缩末期内径（LVESD）,P<0.05];与模型组比较,芪丹利心丸能够明显改善慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构进程,其中芪丹利心丸中剂量组和芪丹利心丸高剂量组效果较为明显（P<0.05）,并且抑制胶原蛋白CollagenI和Ⅲ的mRNA表达（P<0.05）,减少心肌纤维细胞形成,下调心肌纤维化相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白表达（P<0.05）,提高抗纤维化蛋白Smad7水平（P<0.05）。[结论] 益气活血利水方芪丹利心丸能改善心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构和心肌纤维化水平,其机制可能与调控TGF-β1/Smads的信号通路有关。     

榛花消肾安胶囊干预实验性糖尿病大鼠足细胞相关蛋白琢-actinin-4的研究

[目的] 通过实验观察实验性糖尿病（DM）大鼠的肾脏及足细胞相关蛋白α-actinin-4的表达,表明“榛花消肾安胶囊”治疗糖尿病肾病的有效性。[方法] 建立链脲佐菌素（STZ）诱导的实验性糖尿病大鼠模型分为DM模型组、对照组、中药组、西药组,中药组给予榛花消肾安胶囊,西药组给予厄贝沙坦片;检测空腹血糖、24 h尿微量白蛋白、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,应用光学显微镜和透射电镜及免疫组化方法观察足细胞骨架蛋白α-actinin-4的表达;应用实时定量聚合酶链反应（PCR）技术检测α-actinin-4 m RNA表达。[结果] 中药干预之后中药高、中、低剂量组及西药对照组尿量较DM模型组明显减少（P<0.01）;中药各剂量组与西药对照组大鼠血糖均明显低于DM模型组（P<0.01）;中药各剂量组和西药对照组大鼠α-actinin-4及mRNA含量均低于DM模型组（P<0.01）。[结论] 榛花消肾安胶囊能够降低实验性DM大鼠血糖、Scr、BUN,减少尿微量白蛋白的排泄,而改善肾功能;能够抑制实验性DM大鼠早期肾脏体积增大,而抑制α-actinin-4蛋白表达及其m RNA的表达。     

丹芪合剂下调糖尿病肾病大鼠肾组织Akt1的表达

目的: 观察丹芪合剂对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶B (PKB/Akt1)表达的影响,探讨其保护肾脏的机制。 方法: SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病丹芪合剂组(2 g·kg^-1)和依那普利组(10 mg·kg^-1)。单次尾静脉注射链脲佐菌素复制糖尿病模型。生化方法检测血糖、尿蛋白和血肌酐。免疫组化检测肾组织Akt1、E-钙黏素(E-cadherin)、纤维连接蛋白(FN)蛋白表达;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白水平;RT-PCR检测Akt1 mRNA水平。 结果: 丹芪合剂明显降低DM大鼠肾组织Akt1蛋白和mRNA表达(P<0.01);同时上调E-cadherin蛋白表达并下调α-SMA表达,使FN沉积减少(P<0.01);降低DM大鼠血肌酐和尿蛋白水平(P<0.05)。丹芪合剂组与依那普利组之间无统计学差异。 结论: 丹芪合剂可能通过抑制Akt信号分子,进而抑制上皮细胞-间充质细胞转化,减少FN沉积,对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。