半夏泻心汤含药血清对胃癌来源外泌体诱发腹膜间皮细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨半夏泻心汤对胃癌来源外泌体（Exo）诱发人腹膜间皮细胞（HMrSV5）上皮间质转化（EMT）的影响。方法 制备半夏泻心汤含药血清，提取人胃癌NCI-N87细胞外泌体（NCI-N87-Exo），采用透射电镜及蛋白免疫印迹法（Western blot）进行鉴定，并用细胞膜红色荧光探针（Dil）标记。实验分为空白组、模型组、半夏泻心汤低、中、高剂量组（13.5，27，54 g·kg^-1）。空白组将HMrSV5细胞单独培养；模型组在HMrSV5中加入的NCI-N87-Exo （100 mg·L^-1）；半夏泻心汤低、中、高剂量组在模型组的基础上分别加入10%的半夏泻心汤低、中、高剂量含药血清。激光共聚焦显微镜观察24，48，72 h时HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取情况，72 h后观察HMrSV5细胞形态学的变化，Western blot检测HMrSV5细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin），细胞角蛋白19（CK19），α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和弹性蛋白（Elastin）及转化生长因子-β₁（TGF-β₁），Smad2/3，磷酸化（p）-Smad2/3蛋白表达。结果 透射电镜观察到NCI-N87-Exo呈椭圆或碟状的囊泡结构，粒径介于40~80 nm，高表达Exo标志蛋白CD9，CD63，不表达钙网蛋白（Calreticulin），证实为NCI-N87-Exo。共培养24，48，72 h后，荧显微镜下均可观察到NCI-N87-Exo被HMrSV5细胞摄取，与时间呈正相关。与空白组比较，半夏泻心汤可显著抑制HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取，以半夏泻心汤中、高剂量组含药血清最为明显（P<0.05，P<0.01）。半夏泻心汤含药血清干预后HMrSV5细胞排列较为紧密，细胞间隙明显缩小，以半夏泻心汤含药血清大剂量组最为明显。Western blot显示，与模型组比较，半夏泻心汤中、高剂量组含药血清干预后HMrSV5细胞E-cadherin，CK19蛋白表达显著升高（P<0.01），α-SMA，Elastin蛋白表达显著降低（P<0.01），半夏泻心汤低、中、高剂量组TGF-β₁，p-Smad2/3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Smad2/3无明显变化。结论 NCI-N87-Exo能够被HMrSV5细胞摄取并诱发HMrSV5细胞EMT，半夏泻心汤能够阻抑HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取，抑制NCI-N87-Exo诱发的HMrSV5细胞EMT，其作用机制与调控TGF-β₁/Smads信号通路有关。

Effect of Banxia Xiexintang-containing Serum on Epithelial-mesenchymal Transition of Peritoneal Mesothelial Cells Induced by Gastric Cancer-derived Exosomes