NAD—Sepharose6MB亲和胶的制备及在2,5—二酮基—D—葡萄糖？…

目的：制备ＮＡＤ亲和胶,用于分离纯化２,５－二酮基－Ｄ－葡萄糖酸还原酶,方法：将ＮＡＤ通过丁二酸二酰肼与溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ＭＢ胶联结,制香ＮＡＤ亲和胶,从棒杆菌细胞中取的２,５－二酮基－Ｄ－葡萄糖酸还原酶粗酶液用ＮＡＤ亲和胶进行亲和层析纯化。结果：ＮＡＤ的结合率为７１．６７％;亲和层析回收率为７７．２７％;酶的比活提高了１．１倍。结论：以ＮＡＤ为配基的亲和胶用于纯化以ＮＡＤＰＨ为辅酶     

祁连獐牙菜化学成分研究

目的 研究祁连獐牙菜Swertia przewalskii全草的化学成分。方法 采用硅胶柱层析进行分离纯化,通过波谱方法及化学关联进行结构鉴定;结果 分离纯化出15个化合物,分别鉴定为：1,7-二羟基-3,8-二甲氧基San酮（Ⅰ）,1,8-二羟基-3,7-二甲氧基San酮（Ⅱ）,1,7,8-三羟基-3-甲氧基San酮（Ⅲ）,1,3,7,8-四羟基San酮（Ⅳ）,1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-7-羟基-3,8-二甲氧基San酮（Ⅴ）,1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-8-羟基-3,7-二甲氧基San酮（Ⅵ）,7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-1,8-二羟基-3-甲氧基San酮（Ⅶ）,1-O-[β-D-吡喃木糖（1→6)-β-D-吡喃葡萄糖]-7-羟基-3,8-二甲氧基San酮（Ⅷ）,1-O-[β-D-吡喃葡萄糖]-1,7-二羟基-3-甲氧基S sgmk(X),木犀草素（Ⅺ）,齐墩果酸（Ⅻ）,乌苏酸（XⅣ）和龙胆苦苷（XV）。结论 化合物Ⅳ-Ⅷ,Ⅺ,Ⅻ,XⅣ和XV均为首次从该种植物中分得。     

重组NADPH-细胞色素P450还原酶在大肠杆菌中的表达和纯化

目的 在大肠杆菌中表达重组NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)并纯化获得有活性的CPR蛋白。方法 将已构建的NADPH-细胞色素P450还原酶重组质粒pMWl72a-CPR采用温和转化法转入大肠杆菌BL-21中,依次使用超速离心、DE52纤维素阴离子交换层析和2’-5’ADP亲和层析的方法纯化CPR,并检测酶的活性。结果 获得了纯度达99％以上的可溶性CPR蛋白,纯化倍数5、20倍,检测酶的比活性为每分钟1045．49nmol／mg。结论获得了纯度高、有活性的CPR蛋白,可作为工具酶用于某些相关酶的研究,同时也为CPR的工业纯化提供了可行的参考路线。     

龙葵全草皂苷类化学成分研究

目的研究龙葵Solanum nigrum全草的皂苷类化学成分。方法采用硅胶、反相ODS开放柱色谱及反相HPLC等手段分离化合物,运用波谱技术分析确定化学结构。结果龙葵全草60%乙醇提取物经D-101大孔树脂柱吸附,获得的60%乙醇洗脱部分再经分离得到8个化合物。利用理化及波谱分析确定这些化合物结构分别为uttroside B(Ⅰ)、uttroside A(Ⅱ)、22α,25R-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-呋甾-Δ5-3β,26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅲ)、22α,25R-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-呋甾-Δ5-3β,26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅳ)、5α,22α,25R-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-呋甾-3β,26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅴ)、5α,22α,25R-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-呋甾-3β,26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅵ)、dumoside(Ⅶ)、5α,20S-3β,16β-二醇-孕甾-22-羧酸-(22,16)-内酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅷ)。结论化合物Ⅲ～Ⅷ为首次从该属植物中分离得到。     

黄花獐牙菜的化学成分研究

目的 研究黄花獐牙菜 Swertia kingii的化学成分。方法 用各种色谱柱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱解析鉴定其化学结构。结果 从黄花獐牙菜中分离到15个化合物,鉴定了其中的11个化合物,分别为β-谷甾醇(β-sitosterol,1)、1,8-二羟基-3,7-二甲氧基口山酮(甲基獐牙菜宁,methylswertianin,2)、1,7-二羟基-3 ,8二甲氧基口山酮(gentiacaulein,3)、1,8-二羟基-3,5-二甲氧基口山酮(印度獐牙菜素,swerchirin,4)、8-O-β-D-glucopyranosyl-1, 3, 7-trihydroxanthone,5)、芒果苷(mangiferin,7)、1-O-[β-D-吡喃木糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖］-7-羟基-3,8-二甲氧基口山酮(1-O-［β-D-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl］-7-hydroxy-3, 8-dimethoxyxanthone,8)、8-O-［β-D-吡喃木糖(1→6)-D-吡喃葡萄糖］-1,7-二羟基-3-甲氧基口山酮(8-O-［β-D-xylopyranosyl(1→6)-lucopyranosyl］1, 7-dihydroxy-3-methoxy-xanthone,9)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-羟基-3,8-二甲氧基口山酮(1-O-β-D-glucopyranosyl-7-hydroxy-3,8-dimethoxyxanthone,10)、异荭草苷(isoorientin,11)、8-O-β-D-吡喃葡萄糖-1,3,5-三羟基口山酮(8-O-β-D-glucopyranosyl-1, 3, 5-trihydroxanthone,13)。其余4个还在结构鉴定中。结论 所有化合物1～11均为首次从该植物中得到。     

氯丙烯、丙烯酰胺和2,5-己二酮对大鼠神经行为改变的比较

目的：比较氯丙烯(allyl chlorice,AC)、丙烯酰胺(acrvlamide,ACR)和2,5-己二酮(2,5-llexaneclione,HD)对大鼠神经行为功能的影响。方法：选用雄性Wistar大鼠,分别给予氯丙烯200mg／kg体重灌胃,丙烯酰胺40mg／kg体重腹腔注射,2,5-己二酮400mg／kg体重腹腔注射,每周3次,定期测定大鼠的体重、热感觉传导、压痛阈值、后肢撑力。结果：2,5-己二酮和氯丙烯使大鼠体重显著降低,而丙烯酰胺对体重的影响不大。氯丙烯中毒后大鼠在热板仪上的保持时间缩短了17％,丙烯酰胺组和2,5-己二酮组的保持时间分别延长了54％和23％。氯丙烯和2,5-己二酮使大鼠压痛阈值明显升高,丙烯酰胺使大鼠的压痛阈值降低。此外,氯丙烯组和丙烯酰胺组后肢撑力指数分别增大了23％和109％,2,5-己二酮组后肢撑力指数变化不大。结论：氯丙烯、丙烯酰胺和2,5-己二酮都可诱导周围神经病,但它们对大鼠神经行为的损伤不同。     

水团花根茎醋酸乙酯部位的化学成分研究

目的 研究水团花Adina pilulifera根茎醋酸乙酯提取部位的化学成分。方法 溶剂法进行提取和萃取,采用硅胶柱色谱进行分离,利用光谱数据结合理化性质鉴定其结构。结果 分离得到5个化合物,分别鉴定为去甲丁香色原酮（1）、7-O-β-D-葡萄糖基-去甲丁香色原酮（2）、鸡纳酸（3）、2-羟基-3-甲基蒽醌（4）和3,8-二羟基-1-甲氧基-2-甲氧基亚甲基-9,10-蒽醌（5）。结论 化合物4、5为首次从该植物中分离得到。     

刺人参叶中配糖体的化学研究(Ⅵ)

继续对刺人参叶的化学成分进行研究又分出一种新皂甙，命名为刺人参甙S（cirenseno-sideS）。通过测定理化常数、光谱数据等，鉴定其结构为3－O－β－吡喃葡萄糖基3β－羟基齐墩果－9（11），12－二烯－28－酸－28－O－α－L－吡喃鼠李糖基（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖甙。     

卫矛抗心肌缺血有效部位的化学成分研究

目的 对卫矛Euonymus alatus抗心肌缺血有效部位的化学成分进行研究.方法 利用各种色谱法分离化学成分,通过理化性质和波谱法鉴定化合物的结构.结果 从卫矛中分离得到5个化合物,分别为1-[3-(α-D-吡哺葡萄糖氧基)-4,5-二羟基苯基]-乙酮(Ⅰ)、8-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基苯乙醇(Ⅱ)、丁香酚苷(Ⅲ)、金丝桃苷(Ⅳ)、橙皮苷(Ⅴ).结论 化合物Ⅰ为新化合物,命名为鬼箭羽苷(guijianyuside),化合物Ⅱ、Ⅲ为首次从卫矛中分离得到.     

用亲和层析法纯化牛精浆蛋白

目的：从牛精浆中纯化牛精浆（BSP）蛋白。方法：利用盐析及亲和层析等方法对BSP蛋白进行纯化。结果：用Gelatin-Sephorase4B亲和胶纯化出一个蛋白峰,经电泳及氮基础测序证实为BSP－A1／－A2蛋白。结论：用市售Gelatin-Sephorase4B亲和胶可方便的纯化出BSP－A1／A2蛋白。     

孕血清中早孕因子的分离纯化

目的:通过离子交换层析和亲和层析的分离方法从孕血清中得到纯化的早孕因子(EPF),为进一步制备单克隆抗体做准备。方法:采用依次经过DEAE52阴离子交换层析,SP Sepharose F.F阳离子交换层析,Con ASepharose4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl6B亲和层析分离纯化方案,最终得到具有早孕因子活性的Hepa-rin-Ⅱ成分,早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条带,相对分子量分别为46.30kDa和10.71kDa。结论:经过四步层析得到较纯的EPF样品,并认为EPF在血清中可以以单体和多聚体形式存在。     

蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离方法研究

目的：探索蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ(antineoplastic polypeptide-Ⅲfrom APBMV,AP-Ⅲ)的分离和纯化方法。方法：蝎毒经预处理后,分别采用pharose FF阳离子交换凝胶柱(cm×5 cm交换柱,流速0．8 ml／min,梯度洗脱1 200 min)层析法和Sepharose FF阳离子交换凝胶柱与Sephadex G-50凝胶柱(柱：100cm×5 cm;流速：0．5 ml／min)联合层析法,分离AP-Ⅲ,用HPLC仪检测2种方法分离出的AP-Ⅲ的纯度及产率。结果：单独用Sepharose FF阳离子交换凝胶柱分离,AP-Ⅲ产率为2．24％,纯度为89％。Sephadex G-50凝胶柱与Sepharose FF阳离子交换凝胶柱联用,其产率及纯度分别提高至4．72％和％。结论：Sephadex G-50与Sepharose FF联用可提高AP-Ⅲ的产率及纯度,从而为开发和利用AP-Ⅲ提供了实验依据。     

重组人瘦素的分离纯化

目的：探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法：采用强阴离子交换柱(Sepharose Qfast flow)和疏水层析柱(Phenyl Sepharose 6 fast flow)在pH7．5的条件下进行纯化。结果：经Q柱一步纯化后，产物纯度由42．3％到达89．6％，随后通过疏水层析纯化后，产物纯度达到96．2％。经SDS—PAGE证实为单一蛋白条带。结论：通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。     

绿脓杆菌凝集素的研究——Ⅱ半乳糖专一性绿脓杆菌凝集素的提纯

本文应用交联剂环氧氯丙烷将半乳糖交联于淀粉,制备了半乳糖—淀粉凝胶(Gal—starch gel),并利用Gal-starch gel亲和层析法成功地提纯了半乳糖专一的绿脓杆菌凝集素(PA-Lectin)。同时,根据产率、纯化倍数、PA-Lectin的分子量和氨基酸组成,作者将Gal-starch gel法与Gilboa-Garber等报道的Sepharose 4B亲和层析法进行了比较研究。此外,文中还对Gal-starch gel法提纯的最适条件进行了观察。     

孕妇血清中早孕因子的分离与纯化

目的：建立一条从妊娠早期妇女血清中分离纯化早孕因子的技术路线，获得高纯度的早孕因子。方法：采用依次经过DEAE 52阴离子交换层析、SP Sepharose F．F阳离子交换层析、ConA Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl-6B亲和层析分离纯化的方案，最终得到具有早孕因子活性的Heparin-Ⅱ成分，早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示有一条电泳区带，相对分子量为10．91kDa。结论：这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的，得到的相对分子量为10．91kDa的蛋白质为电泳纯的早孕因子。     

对一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的不同纯化方法的选择

目的研究源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法，得到壳聚糖水解酶的纯品，从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业菌制备奠定前期基础。方法对比疏水作用层析、离子交换层析、羟基磷灰石柱（HA）层析、凝胶过滤层析等方法纯化蜗牛酶的实际效果，确定纯化的最佳条件，从而设计出最合理的纯化方案。结果分别用苯基琼脂糖柱层析，DEAE—Sepharose离子交换层析，羟基磷灰石柱层析，Sephacryl S-300凝胶过滤层析分离蜗牛酶，最终确定为用弱阴离子交换填料DEAD—Sepharose，疏水作用层析，凝胶过滤层析进行分离。结论本文探讨了蜗牛酶的不同纯化方法，建立了一种从蜗牛酶中分离高效高纯度壳聚糖水解酶的方法，为壳寡糖的酶解工业生产提供了新方法。     

江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的:江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及部分生物化学和药理性质的研究.方法:应用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱和HiPrep Sephacryl S 100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氨基酸组分及部分药理性质.结果:分离得到相对分子质量为59 100,等电点为4.98, SDS-PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶.该组分属于金属蛋白酶类.氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氨基酸.高浓度的纤溶酶对肿瘤细胞CEN2有抑制作用,有微弱的出血毒性.结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶.     

重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达、纯化和鉴定

目的:表达与纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(rhCⅡ250-270),鉴定并确认rhCⅡ250-270多肽与预期的相符。方法:在E.coli BL 21中表达rhCⅡ250-270多肽,使用亲和层析法分离纯化。用限制性酶切、聚合酶链式反应(PCR)、基因序列测定、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹等方法在基因和蛋白水平上对rhCⅡ250-270多肽进行鉴定。结果:纯化的rhCⅡ250-270多肽,大小约43 kD,纯度为89.3%。E coRⅠ和SalⅠ双酶切法和PCR法鉴定测得DNA大小约为500bp和650bp,核苷酸序列测定证实基因DNA序列与设计的完全相符。SDS-PAGE显示rhCⅡ250-270多肽目的蛋白条带的大小约为43 kD,W estern B lotting证实GST融合蛋白上存在CⅡ片段。结论:表达和纯化rhCⅡ250-270多肽与预期的相符,并发现此多肽具有较强的免疫原性。     

pcDNA3-内皮抑素质粒的大规模纯化

目的：探索pcDNA3-内皮抑素质粒的大规模纯化工艺。方法：碱裂解法提取质粒后，用0．4mol／L CaCl2沉淀除去RNA,再用Q-Sepharose XL进行初纯，SOURCE 15Q精纯。所得纯化物以1％琼脂糖凝胶电泳鉴定超螺旋质粒的含量。结果：经此方法纯化的pcDNA3-内皮抑素质粒中超螺旋质粒的含量可达95％以上，且无RNA检出。结论：该法可以实现pcDNA3-内皮抑素质粒的大规模纯化。     

去乙酰基壳聚糖在亲和层析纯化胰蛋白酶中的应用

首次用环氧氯丙烷活化的去乙酰基壳聚糖（Ｃｈｉｔｏｓａｎ）为载体，鸡卵粘蛋白（Ｏｖｏｍｕ－ｃｏｉｄ，简称ＣＨＯＭ）为配基，制备了胰蛋白酶（Ｔｒｙｐｓｉｎ）的亲和吸附剂，纯化效率与琼脂糖（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ）相近，为４７倍，纯化的Ｔｒｙｐｓｉｎ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳为单一区带。表明Ｃｈｉｔｏｓａｎ可以代替Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ作为亲和层析的载体。